特异性抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建及鉴定

噬菌体单链抗体（ＳｃＦｖ）弥补了传统ＭｃＡｂ制备繁琐、抗原性强、穿透力弱等不足,为ＨＣＣ临床和基础研究提供新的手段。我们用基因工程技术和噬菌体表面呈现技术构建和筛选特异性抗ＨＣＣ噬菌体ＳｃＦｖ库。 １．材料与方法：（１）抗ＨＣＣ噬菌体ＳｃＦｖ库的构建：应用ＨＣＣ细胞常规免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,从其脾脏提取ｔＲＮＡ并纯化ｍＲＮＡ,逆转录合成ｃＤＮＡ,ＰＣＲ扩增抗体轻链和重链可变区,应用ｌｉｎｋｅｒ－（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３装配ＳｃＦＶ基因,在其５’端和３’端分别引入内切酶ＳｆｉＩ和ＮｏｔＩ酶切位点,连接…     

胰岛素样生长因子和HBV-DNA整合在肝癌演变过程中作用机制的研究

目的：通过观察胰岛素样生长因子及其受体（IGFs)和增殖细胞核抗原（PCNA）在不同肝组织的表达,探讨它们与HBV－DNA整合在肝癌发生中的关系,为肝癌的发病机制和临床诊疗提供一定的理论依据。方法：肝癌和癌旁肝组织各32例,慢性活动性乙型肝炎12例,胎肝10例和正常肝组织8例,Southern杂交检测各种肝组织中HBV－DNA整合情况,胶体金免疫电镜技术观察不同肝组织中IGFs和PCNA在超微结构水平的分布与表达。结果：81．3％（26／32）的肝癌和癌旁肝组织为HBV－DNA整合阳性。83．3％（10／12）的慢性活动性乙型肝炎为HBV－DNA整合阳性。所有胎肝组织和正常成人肝组织均无HBV－DNA整合。87．5％（28／32）的肝癌和84．4％（27／32）癌旁肝组织的表达PCNA;肝癌组织表达胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF－Ⅰ）和IFG－Ⅰ受体（IGF－ⅠR)的阳性率分别为40．6％（13／32）和56．3％（18／32）;癌旁肝组织表达（IGF－Ⅰ和IGF－ⅠR折阳性率分别为50．0％（16／32）和65．6％（21／32）。肝癌组织表达胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF0Ⅱ）和IGF－Ⅱ受体（IGF－ⅡR）的阳性率均为78．1％（25／32）;癌旁肝组织表达IGF－Ⅱ和IGF-ⅡR垢阳性率均为81．3％（26／32）。HBV－DNA整合组中,肝癌和癌旁肝组织表达IGF－Ⅱ和IGF－ⅡR的阳性率均明显高于非整合组（P＜0．001）。IGFs有以下三种分布形态;全胞浆型、核旁型和核内型。所有正常成人肝组织均不表达IGFs和PCNA,所有胎肝均表达IGFs及其受体和PCNA。结论：大多数肝癌、癌旁肝组织存在HBV－DNA整合。IGF－Ⅱ基因和IGF－ⅡR基因的异常表达在肝癌发生中可能起了重要的作用,HBV－DNA整合可能通过某种机制激活这些基因。IGFs及其受体的分布形态基本一致。IGFs可能通过自分泌和／或旁分泌机制刺激肝细胞生长、增殖、异常分化而发挥致癌作用。肝癌和癌旁肝组织中存在着活跃的细胞增殖活动。     

Apogossypolone抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及诱导细胞凋亡

目的:研究Apogossypolone(ApoG2)对人乳腺癌细胞系MCF-7体外的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法:采用MTT法和平板克隆形成实验检测ApoG2作用于MCF-7细胞后,对其体外增殖和细胞克隆形成能力的影响;Hoechst 33258荧光染色法观察ApoG2(20μmol/L)作用48 h后,细胞凋亡的形态学变化;FCM检测ApoG2作用于MCF-7细胞后的细胞凋亡率以及细胞周期的变化.结果:ApoG2药物在浓度为5μmol/L、作用14 d后就能对MCF-7细胞增殖起到明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性;平板克隆实验表明,经不同浓度(5、10和20 μmol/L)ApoG2作用14 d后,对MCF-7细胞克隆形成能力呈现明显的抑制作用,且同样呈剂量和时间依赖性.Hoechst 33258荧光染色结果显示,ApoG2与MCF-7细胞共培养72 h后,细胞呈现明显的核固缩和碎裂、染色质凝集和凋亡小体形成等细胞凋亡现象.FCM检测结果显示,20 μmol/LApoG2作用72 h后,细胞凋亡率较对照组升高,而且S期和G2/M期细胞比例较对照组升高(P＜0.05).结论:ApoG2能够抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和克隆形成,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡.     

腹膜活检在不明原因腹水诊断中的意义

腹水的常见病因有肝硬化、结核性腹膜炎、腹膜恶性肿瘤和恶性肿瘤腹膜种植或转移 ,但临床上有不少病例经各种常规检查仍不能明确病因 ,直接影响到患者的诊断、治疗。我科从1994年 7月起开展腹膜活检术 ,对 2 5例原因不明的腹水患者进行了腹膜活检 ,其中 2 0例 ( 80 % )获得明确诊断 ,直接为临床的治疗提供了明确的依据 ,并取得了良好的治疗效果。1　资料与方法1.1　病例选择　 2 5例均为住院患者 ,其中男 17例 ,女 8例 ,年龄 2 7～ 75岁 ,平均年龄 43 .7岁。体检发现有程度不同的腹水 ,经腹部Ｂ超、ＣＴ证实 ,腹腔穿刺抽出腹水送常规及脱落…     

提高经内镜逆行胰胆管造影成功率的几个问题

经内镜逆行胰胆管造影术(endoscopic retrograde cholangio pancreatography,ERCP),是经十二指肠镜观察十二指肠降段乳头及其开口,在直视下插人造影导管,注入造影剂后,在X线下显示胆系和胰管形态的综合诊断方法。Mcune(1986年)首次报道此项技术,迄今已历经30余年,现已成为诊断胰胆疾病重要的方法之一,并逐渐发展到在一定范围内替代外科手术治疗,堪称人类医学史上的一次革命。随着内镜的改进和插管技术的提高,造影成功率亦有显著提高。但临床上常常遇到某些先天性或因病变导致解剖结构改变的情况,使部分经验不足的医师感到困难,本文就ERCP中的特殊情况结合临床体会,作一简介。     

IGF-I、IGF-II及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达

目的:探讨胰岛素样生长因子I、II及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达及其意义.方法:采用DNA RNA原位杂交方法检测肝癌和癌旁肝组织中IGF-I、IGF-II及其受体mRNA的表达.结果:在肝癌组织中IGF-I、IGF-I受体、IGF-II、IGF-II受体mRNA的表达率分别为40.0%、46.7%、66.7%和63.3%,在癌旁肝组织中IGF-I、IGF-I受体、IGF-II、IGF-II受体mRNA的表达率分别为46.7%、53.3%、70.0%和73.3%,有36.7%的肝癌和50.0%的癌旁肝组织同时表达四种mRNA.IGF-I、IGF-II及其受体mRNA在分化较差的肝癌细胞、肝细胞再生结节和不典型增生肝细胞中阳性信号最强.结论:IGF-I、IGF-II及其受体在肝细胞癌变过程中发挥重要作用,肝癌的发生发展与IGF-I、IGF-IR、IGF-II、IGF-IIR的协同作用有关.     

胰岛素样生长因子Ⅱ及其受体在肝细胞癌变中的表达及意义

目的 探讨ＩＧＦ－Ⅱ及戎受体（ＩＧＦ－ⅡＲ）在肝细胞癌孪演化过程中的作用。方法 通过ＤＮＡ、ＲＮＡ原位分子杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术,观察和分析慢性肝炎、肝硬化和肝癌中ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦ－ⅡＲ基因的单细胞转录瓣表达与ＨＢＶ ＤＮＡ整合之间的关系。结果 ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦ－ⅡＲ ｍＲＮＡ在慢性肝炎、肝硬化和肝癌中均有不同程度的表达,阳性率依次为：慢性肝炎（３３．３％）〈肝癌（６６．７％）〈肝硬化     

胰岛素样生长因子Ⅱ及其受体基因在肝癌和癌旁肝组织中的表达

为了探讨胰岛素样生长因子Ⅱ（ｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒⅡ，ＩＧＦⅡ）及其受体（ＩＧＦⅡＲ）在肝癌发生及发展过程中的作用，我们采用原位分子杂交技术，对肝癌和癌旁肝组织中ＩＧＦⅡ、ＩＧＦⅡＲ基因的表达进行了观察，发现ＩＧＦ...     

IGF—Ⅰ,IGF—Ⅱ及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达

目的：探讨胰岛素样生长因子Ⅰ、Ⅱ及其受体在肝癌和癌旁肝组织中的表达其意义。方法：采用ＤＮＡ－ＲＮＡ原位杂交方法检测肝癌和癌旁肝中ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－Ⅱ及其本 ｍＲＮＡ的表达。结果：在肝癌组织中ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－Ⅰ受体、ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦ－Ⅱ受体ｍＲＮＡ的表达率分别为４０．０％、４６．７％、６６．７％和６３．３％，在癌旁肝组织中ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－Ⅰ受体，ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦ－Ⅱ受体ｍＲＮＡ的表达率