AFP-L3、HSP70及AFP水平在大鼠肝癌发展中的动态变化

目的：通过动态检测大鼠肝癌模型造模各阶段血清中AFP-L3、HSP70和AFP水平的变化,对其在肝癌早期诊断中的价值做综合评价。方法：SD大鼠CCl4橄榄油溶液腹壁皮下注射,食用白酒溶液代替饮用水,建立大鼠肝硬化基础上的肝癌模型。从造模第6周起,每2周心脏采血1次,ELISA法检测大鼠血清中AFP-L3、HSP70和AFP水平,并取部分肝组织行病理学检验造模进度。结果：造模第8周发生肝硬化,第10周发生不典型增生及早期肝癌结节。AFP-L3和HSP70在造模第10周即显著升高,其阳性率分别为60%和70%,两者联合检测的阳性率为90%,HSP70在肝硬化阶段也有升高,AFP-L3没有显著变化。AFP水平在造模第12周才有显著升高,阳性率为60%,肝硬化阶段也略有升高,肝癌早期无显著变化。AFP-L3/AFP比值在造模第10周即显著升高（35.5%）,其敏感性和特异性分别达70%和100%。结论：成功建立了大鼠肝硬化基础上的肝癌模型,传统指标AFP对极早期的肝癌不敏感,特异性不高,而AFP-L3和HSP70均较AFP敏感,两者联合可提高检测的敏感性,AFP-L3和AFP-L3/AFP比值均较AFP特异。     

胸腺基质淋巴细胞生成素、OX40和OX40受体在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中表达的关系

目的 建立小鼠过敏性腹泻模型,检测其大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、OX40、OX40受体(OX40L)的表达和肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4、IFN-γ的水平,分析其之间的关系,探讨TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻中的作用.方法 雌性BALB/c小鼠20只随机分成两组即对照组和实验组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的水平,取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变,SP免疫组织化学技术检测TSLP、OX40、OX40L的表达.结果 ①HE染色结果显示:实验组比对照组小鼠结肠黏膜组织非特异性炎症反应显著,上皮排列不规则,有大量炎性细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞浸润;②TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中的表达水平高于对照组的表达水平(t=7.07,t =7.81,t =7.79,P均＜0.01);③Spearman等级相关分析发现TSLP、OX40、0X40L三者间表达强度存在正相关(r=0.889,r=0.932,r=0.943,P均＜0.01),同时三者与肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4水平呈正相关(r=0.891,r =0.936,r=0.886,P均＜0.05),而与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.829,r=-0.881,r=-0.937,P均＜0.05).结论 TSLP、OX40、OX40L三者间表达存在正相关,并诱导了Th1/Th2轴向Th2轴漂移,促进了过敏性腹泻的发生发展.     

乳糖化羧甲基壳聚糖的合成及转运质粒DNA的作用

目的 探讨乳糖化羧甲基壳聚糖（Lac-CMCS）的合成及其对DNA的转运作用。方法 还原胺化法共价连接乳糖和羧甲基壳聚糖（CMCS），并使其与含HBV反义x基因的质粒DNA进行复合，转染细胞进行培养，用酶联免疫吸附试验（ELISA）观察对细胞内病毒复制的抑制作用。结果 制备出的Lac-CMCS共价结合物中乳糖与CMCS的摩尔比为15：1。DNA与Lac-CMCS形成复合物的最佳质量比是1：10。此复合物能有效携带药物进入细胞发挥作用，最大抑制率达83．6％。结论 乳糖化羧甲基壳聚糖在体外能有效转运DNA进入细胞。     

肺炎衣原体感染与冠心病关系的初步探讨

目的　探讨肺炎衣原体感染与冠心病发病关系及发病机制。方法　用ELISA法检测冠心病患者血清中肺炎衣原体IgA ,IgG抗体阳性率 ,并与健康对照组进行比较。结果　经检测发现 ,冠心病患者中肺炎衣原体抗体IgA阳性率 4 7.4 % ,明显高于健康人 (P <0 .0 1) ,但是冠心病患者IgG阳性率与健康人无明显差别。结论　肺炎衣原体感染与冠心病有相关性 ,可能是诱发或加重冠心病病情的原因之一。     

利用乳糖化羧甲基壳聚糖构建小鼠OX40转基因细胞株

目的利用乳糖化羧甲基壳聚糖（Lac-CMCS）构建小鼠OX40转基因细胞株，探讨Lac-CMCS在HepG2细胞定向转染中的可行性。方法从ConA活化的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA，应用RT-PCR方法，扩增获得编码小鼠OX40分子的cDNA，并将其克隆到pUCm-T载体，测序证实后构建pIRLS2-EGFP-OX40重组真核表达载体，利用Lac-CMCS与载体偶联靶向性转染HepG2细胞，G418筛选，RT-PCR法鉴定获得表达OX40分子的阳性细胞株。结果pUCm-T-OX40和pIRFE2-EGFP-OX40经PCR、酶切和测序分析，证实插入的目的片段与GenBank记载的小鼠OX40 cDNA序列完全一致。利用Lac-CMCS能将小鼠OX40靶向转染HepG2细胞并获得表达；经G418筛选后获得稳定表达小鼠OX40的细胞株。结论利用Lac-CMCS能够成功将OX40靶向转染入HepG2细胞中。     

生白片的药理实验研究

目的研究生白片（ＳＢ）对小鼠血虚模型的升白疗效、促进淋巴细胞增殖和保护ＤＮＡ免受损伤的作用。方法以环磷酰胺制小鼠血虚模型,以生白片加以治疗,观察各研究指标。结果生白片组的白细胞计数为７．４７０×１０９／Ｌ,淋巴细胞增殖为１４７７６８．２３ｍｉｎ－１,小鼠骨髓细胞微核率为７．０２‰,均优于血虚模型组（Ｐ＜０．０１）。结论生白片具有显著的升白疗效、提高淋巴细胞增殖能力和降低细胞微核率的作用     

LACA小鼠脾细胞增殖试验对乙肝病毒特异性转移因子抗原依赖活性的研究

取同窝 LACA 小鼠的脾细胞,分别与乙肝病毒(HBV)抗原、乙肝病毒特异性转移因子(HBV—TF)、HBV 抗原+HBV—TF 进行体外培养,观察小鼠脾细胞增殖的能力,并对 HBV—TF 的抗原依赖活性进行了研究。经~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入 DNA 法进行了测试,HBV 抗原+HBV—TF 组的 cpm 值为13759.3±3970.4,是单独 HBV 抗原组及 HBV—TF 组 cpm 值的10倍多,与各组相比 P 均<0.01。研究结果证明,本方法对检测 HBV—TF 的生物活性具有高度的敏感性。     

小鼠OX40原核表达载体的构建及表达

目的构建小鼠OX40胞外段基因的原核表达载体并进行诱导表达。方法PCR扩增OX40胞外段基因并将其插入原核表达质粒pET32a（＋），重组pET32a—OX40经测序鉴定后转入表达菌株BL21（DE3）进行融合蛋白的小量诱导表达。结果出现新增蛋白条带，融合蛋白主要存在于包涵体中；Western Blotting分析表明该融合蛋白可与相应抗体发生特异性结合。结论构建了小鼠OX40基因的原核表达载体，获得OX40胞外段融合蛋白。     

北沙参粗多糖的提取及对阴虚小鼠的免疫调节作用

目的研究北沙参粗多糖(GLP)的滋阴和免疫调节作用。方法提取GLP,制备阴虚小鼠模型,观察对小鼠体重变化、脾脏抗体生成细胞(AFC)、迟发型超敏反应(DTH)和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果GLP可使阴虚小鼠体重明显增加;亦能显著增加阴虚小鼠脾脏AFC的数量,增强DTH反应,而对腹腔MΦ的吞噬百分率和吞噬指数无明显影响。结论GLP具有滋阴补虚作用,可增强体液免疫和细胞免疫功能。     

小鼠OX40稳定表达细胞株的构建及其对B细胞促分化作用的研究

目的:构建稳定表达小鼠OX40的细胞株HUVEC,并探讨其对B细胞的促增殖作用。方法:从ConA活化的小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR法扩增小鼠OX40的cDNA,并将其克隆到pUCm-T载体中,经PCR、酶切和测序分析,进而构建pIRES2-EGFP-OX40重组真核表达载体。以脂质体法转染HUVEC,经G418筛选后,用流式细胞术检测OX40分子的表达。采用3H-TdR掺入法,研究OX40信号对体外培养的B细胞的促分化作用。结果:构建了OX40基因的真核表达载体。经PCR、酶切和测序证实,插入的目的片段与GenBank登录的小鼠OX40cDNA序列完全一致。用G418筛选后,获得能稳定表达小鼠OX40蛋白的HUVEC细胞。3H-TdR掺入法结果显示,小鼠OX40稳定表达的细胞HUVEC对体外培养的B细胞具有促增殖、分化的作用。OX40/OX40L信号与CD40/CD40L信号具有协同作用。结论:成功地构建小鼠OX40稳定表达地细胞,OX40对B细胞具有促增殖、分化作用。