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目的:分离、克隆和测定中国人纤溶酶原Kringle5功能区基因,为进一步研究其功能奠定基础。方法:实验于2002—06/2003-05在广州医学院金域医学检验中心完成。①实验材料:国人胚肝组织取自广州医学院第一附属医院的流产胚胎(取得家属同意,并经广州医学院第一附属医院伦理委员会批准)。pET21a(+)载体购自Novagen公司,大肠杆菌BL21(DE3)为医学检验中心保存。引物均由上海生工合成。②实验方法:从国人胚肝组织中提取mRNA,用反转录-聚合酶链反应方法将人纤溶酶原Kringle5的cDNA扩增出来,克隆到pET21a(+)载体中测序。(D实验评估:采用紫外分光光度仪和琼脂糖凝胶电泳分析胚肝组织总RNA的抽提结果;经琼脂糖凝胶电泳鉴定Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果;pET-Kringle5重组质粒的酶切鉴定;序列测定。结果:①胚肝组织提取总RNA结果:提取的总RNA经紫外分光光度仪测得A260nm/A80nm〉1.8,A60nm,A270nm〉1.2,表明无蛋白残留;电泳结果显示提取的总RNA有明显的28S、18S两条带,说明RNA基本完整。②Kringle5的反转录-聚合酶链反应扩增结果:人Kringle5 cDNA片段长为240bp,加上引物设计的2个酶切位点,总长度为258bp,聚合酶链反应产物长度与该长度一致,符合预期结果。③)pET-Kringle5重组质粒的构建和酶切鉴定结果:用引物所带的限制性内切酶BamH Ⅰ、NdeⅠ双酶切,结果有250bp左右条带出现。④序列测定结果:证实国人纤溶酶原Kringle5功能区基因被成功克隆,序列分析证实为该基因,未发现有基因突变或多态性现象,但第153位核苷酸与文献比较存在碱基替代现象,其组成的密码子由于遗传的简并性,所编码的氨基酸相同,并未造成氨基酸组成的改变。结论:中国人纤溶酶原Kringle5功能区cDNA基因编码序列与国外文献报道的相应序列可能存在碱基替代现象。 相似文献
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目的探讨广州地区珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)患者的ABO血型分布。方法选择2014年6~12月该中心经地贫基因检测确诊的528例地贫患者为试验组,选择同期526例健康体检者为对照组,通过正反定型玻片法和试管法鉴定两组的ABO血型。结果试验组血型分布特点为OABAB,其构成比为A型占25.76%,B型占23.11%,O型占46.78%,AB型占4.17%;对照组血型分布特点为OABAB,其构成比为A型占27.38%,B型占27.00%,O型占39.54%,AB型占6.08%,两组血型构成比比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论广州地区地贫患者的血型表现型符合南方人群表现型特点,接近中国人群血型分布特点。 相似文献
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目的对1例少见型β-珠蛋白生成障碍性贫血(简称β-地贫)-90位点突变病例进行结果分析。方法应用常规血液学检查、碱性琼脂糖凝胶血红蛋白电泳进行表型分析;通过跨越断裂点聚合酶链反应(GAP-PCR)法检测α-地贫,反向点杂交(RDB)法检测β-地贫;应用DNA克隆测序技术对β-珠蛋白基因全长进行测序,检测β-珠蛋白基因突变类型。结果通过对β-珠蛋白基因簇进行直接测序发现该患者为少见型β-地贫-90(C-T)beta++杂合突变(HBB:c.-140CT)。结论联合应用血液学、血红蛋白电泳和基因测序技术可以明确先证者的基因型,对防治出生缺陷和提高人口素质都具有十分重要的意义。 相似文献
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用分子生物学方法检测军团菌已经被越来越多的专家和实验室所认可,其中以基因测序为基础的军团菌鉴定和分型方法是目前认为最客观、准确且具有较好重复性的方法。军团菌常用的测序靶点有16S rRNA基因、mip基因、rpoB基因、dotA基因、23S-5S rDNA基因间隔区、5S rRNA基因、gyrA基因、dnaJ基因、rnpB基因等位点,但观其分型效果、重复性、流行病学可信度及分辨能力,最具优势的是欧洲军团菌感染工作组(EWGLI)提出的利用7个基因(flaA,mompS,pilE,asd,mip,proA,neuA)测序对军团菌进行分型。随着基因测序技术和序列数据库的发展,基因测序在军团菌的鉴定、分型中发挥着越来越重要的作用。本文对基因测序鉴定军团菌的技术方法及其优缺点和实用价值做一简要概述。 相似文献
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目的:探讨胰腺癌与糖尿病及肥胖的流行病学关系。方法:回顾性收集2001~2011年间收治的201例胰腺癌和同期非消化系统、非肿瘤及非激素代谢异常类的200例病例资料,将胰腺癌患者作为病例组,非胰腺癌患者设为对照组。比较病例组和对照组在合并糖尿病患者及肥胖方面有无差异。结果:病例组和对照组糖尿病合并率差异具有统计学意义(P〈0.01,OR=3.121);两组肥胖率差异具有统计学意义(P〈0.05,OR=2.079)。结论:糖尿病和肥胖与胰腺癌之间有密切关系,可能是胰腺癌的危险因素。 相似文献
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目的综述及讨论近几年以来连锁分析在血友病甲基因诊断中的应用的研究进展,为血友病甲连锁分析位点的选择提供有利的参考。方法以网络数据库资源为主,查询ScienceDirect,pubmed等数据库关于血友病甲连锁分析研究进展等方面的资料。结果共收集到多篇文献,选择其中16篇进行归纳总结与讨论。结论连锁分析现在在世界范围内都应用广泛,对血友病甲携带者的检出与产前诊断不失为一种简便、快捷实用的方法。但是依然有其局限性,比如,有些多态性标记并不能提供诊断信息,对于一些散发病例,连锁分析则不一定有效。对于基因外的多态性标记,细胞减数分裂期间基因重组会导致连锁分析错误。因此,有待发现更多有效的遗传多态性标记用于血友病甲的连锁分析。 相似文献
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目的通过侧方液压脑损伤骨折模型研究脑损伤后大鼠血清中降钙素基因相关肽(calcitoningene—related peptide,CGRP)的变化及对骨折愈合的影响。方法SD大鼠随机分成三组,空白对照组10只(A组,n=10),单纯骨折组48只(B组,n=48),脑损伤骨折组48只(C组,n=48),通过侧方液压脑损伤及开放骨折建立模型,损伤后适时取SD大鼠血清及骨折标本,通过放射免疫荧光、免疫组化、X片、骨折直径及生物特性测量骨痂直径、骨痂中阳性细胞的数量表达及抗应力的大小等,了解血清中CGRP的含量、骨折愈合情况。结果伤后各组血清中CGRP的含量:从伤后CGRP水平的变化看,脑损伤骨折组CGRP含量明显升高,第7天达高峰(196.73±54.98)pg/ml,随后逐渐下降,单纯骨折组CGRP含量也升高,第5天达高峰(74.70±20.76)pg/ml,随后下降;脑损伤骨折组中CGRP含量明显高于单纯骨折组,且高峰时间长,差异有统计学意义(P〈0.05);脑损伤骨折组骨痂无论在影像学、直径大小及骨痂抗应力均大于单纯骨折组,免疫组化发现脑损伤骨折组骨痂中阳性细胞明显增多,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论脑损伤骨折大鼠骨折愈合快于单纯骨折,推测脑损伤血清中CGRP可促进骨折愈合。 相似文献