U251细胞溶解物体外诱导人TCR Vβ T细胞增殖和杀伤活性的研究

目的了解神经胶质瘤U251细胞溶解物lysate体外诱导人外周血T细胞的特异性细胞毒作用和T细胞受体（TCR）vB谱系表达和克隆性变化情况。方法采用混合淋巴细胞／肿瘤细胞培养方法，以lysate作为刺激原体外诱导外周血单个核细胞增殖，应用LDH释放法检测不同效靶比时诱导后T细胞杀伤U251和Raji细胞的细胞毒活性，同时利用RT-PCR基因扫描技术分析诱导前、后TCR Vβ亚家族的克隆性增殖特点。结果基因扫描显示lysate诱导前5例健康人全部TCR Vβ谱型呈高斯（钟型）分布，T细胞均为多克隆；lysate诱导后部分TCR Vβ亚家族T细胞呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长。相同效靶比时lysate诱导前、后T细胞对U251细胞杀伤活性之间的差异有统计学意义（P〈0．05）；而对Raji细胞的杀伤活性之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论U251细胞溶解物lysate在体外可诱导T细胞呈克隆性增殖，此优势增殖的克隆性T细胞对U251细胞具有特异性细胞毒作用。     

NVP-BEZ235抑制CD34~+CD38~-急性髓系白血病干细胞的增殖和集落形成

本研究旨在探讨PI3K/mTOR信号系统双靶点抑制剂———NVP-BEZ235对CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖、细胞周期和集落形成能力的影响。用流式细胞术检测急性髓系白血病KG1a细胞表面CD34和CD38的表达;应用台盼蓝染色细胞计数法检测不同浓度NVP-BEZ235对KG1a细胞增殖的影响,PI染色流式细胞术检测NVP-BEZ235对KG1a细胞周期的影响,持续用软琼脂集落形成实验检测不同浓度NVP-BEZ235对KG1a细胞集落形成细胞的影响。结果表明,急性髓系白血病KG1a细胞中CD34+CD38-占(98.02±0.72)%,NVP-BEZ235(0.125-1μmol/L)对KG1a细胞增殖抑制呈现时间和剂量依赖(P<0.05),其24和48 h的IC50值分别为0.597和0.102μmol/L。0.5μmol/L的NVP-BEZ235作用24 h后,G0/G1期KG1a细胞比例达(83.2±3.80)%,较对照组(43.47±9.60)%明显增高(P<0.05)。2500个细胞在NVP-BEZ235(0-1μmol/L)持续作用下14 d和21 d而形成的集落数分别由375.67±21.46、706.33±87.31降至0(P<0.05)。结论:NVP-BEZ235能抑制CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖和集落形成。     

硼替佐米诱导ABCG_2~(High)耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体的实验研究

目的 探讨硼替佐米诱导高表达ABCG2耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制.方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经硼替佐米处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性.结果 ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上.经硼替佐米处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(17.52±2.04)%、(12.53±3.68)%、(15.24±2.91)%、(62.02±6.85)%、(35.69±3.23)%.在效靶比为10:1、20:1、Allo-NK细胞对硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(35.06±5.10)%、(52.34±4.78)%.处理前后杀伤率差异有统计学意义(F=26.03,P=0.000).结论 硼替佐米通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强.     

AS2O3对CD34+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响

目的：观察AS2O3对CD34^＋早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法：流式细胞仪检测KG1a细胞表面CD34抗原表达率,MTT法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KG1a细胞,流式细胞仪测定处理前后KG1a细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KG1a细胞的杀伤活性。结果：10nmol/ml的AS2O3作用KG1a细胞后,能使KG1a细胞表面ULBP1的表达水平显著上调（P〈0.05）,同时也激发了NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性（P〈0.05）。结论：AS2O3能上调CD34^＋白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效。     

基因扫描分析人T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立人T细胞受体（TCR）互补决定区3（CDR3）基因谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,应用RT-PCR方法扩增5例健康志愿者外周血T细胞的34个TCR Vα亚家族和26个TCR Vβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果T细胞株Jurkat细胞仅表达TCR Vα1．1和Vβ8基因,且为单克隆,而B细胞株Raji细胞则不表达所有的TCR Vα和Vβ基因。5例健康人表达所有的TCR Vα和Vβ基因,均为多克隆T细胞。结论基因扫描分析人TCRCDR3基因谱型是检测T细胞克隆性的精确敏感方法。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养方法的改进

背景:间充质干细胞在骨髓中的含量很低,需进行体外分离纯化和大量增殖.目的:优化骨髓间充质干细胞取材、纯化、扩增的方法,拟提高骨髓间充质干细胞的获得率和扩增率.设计、实施及地点:以细胞为对象的观察实验,于2007-03/2008-02在南方医科大学珠江医院血液科实验室进行.材料:实验动物为6～8周龄清洁级雄性大鼠,体质量130～150 g.方法:采用改进的贴壁法培养骨髓间充质干细胞:保留大鼠肱骨、股骨和胫骨,尽量将骨周边组织剔除干净,从而减少混杂的细胞;冲洗骨髓腔时,选用2.5 mL的注射器,可以将紧贴骨髓腔壁的骨髓间充质干细胞吹洗下来,从而提升获得率;细胞换液时未全部倾去旧培养液,保留了1/4～1/5的旧培养液;采用"二传一"的方法将两瓶原代细胞分别消化后合为一瓶,保证传代时对细胞数目的要求,能避免细胞过度老化.主要观察指标:倒置光显微镜和苏术精-伊红染色进行细胞形态学观察,流式细胞术进行细胞周期分析,MTT法和克隆形成实验测定细胞P1和P5生长曲线和克隆形成能力,用流式细胞仪和碱性磷酸酶对培养进行细胞鉴定.结果:分离的骨髓间充质干细胞人小较为均匀,基本上呈梭形或星形.原代培养细胞传代后,细胞增殖速度较快,基本上三四天传代1次,随传代次数的增加细胞形态趋于一致细胞基本为成纤维细胞型.流式细胞术证明G0G1期的细胞约占80%以上.细胞生长曲线测定表明接种后第3天细胞进入指数增生期,至第五天进入平台期,随着传代次数的增加,细胞增殖速度变慢、克降能力降低.经流式细胞仪检测显示CD44、CD99阳性,CD45阴性,碱性磷酸酶试验为阳性.结论:采用改良的的方法获得了大量遗传性质均一、功能状态良好的骨髓间充质干细胞,并有效地提高了细胞的获得率和扩增率.     

格列卫治疗后bcr/abl融合基因变异的研究

目的:应用荧光原位杂交法检测格列卫治疗后白血病bcr/abl融合基因的改变。方法:应用双色双融合法荧光原位杂交技术检测42例接受格列卫治疗的急慢性白血病患者骨髓细胞bcr/abl融合基因,对比治疗前后bcr/abl融合基因的改变。结果:所有患者治疗后均出现融合基因变异,与患者肿瘤负荷、分型和分期无关。结论:格列卫治疗可诱导bcr/abl基因发生融合变异。     

新冠肺炎患者和细菌性肺炎患者血清差异表达的细胞因子特征分析

目的 了解新型冠状病毒肺炎（新冠肺炎）患者与细菌性肺炎患者细胞因子的差异,探讨新冠肺炎免疫病理机制,为新冠肺炎提供新的治疗靶点。方法 收集轻型新冠肺炎患者（新冠肺炎组）、细菌性肺炎患者（细菌性肺炎组）和健康志愿者（健康对照组）3组各15份血清标本,进行48种细胞因子的检测,比较3组间细胞因子表达谱的差异。检测10例新冠肺炎患者在治疗不同时间点的血清标本中48种细胞因子表达,分析其与新冠肺炎患者的临床特征及疾病进展的相关性。结果 新冠肺炎组与细菌性肺炎组比较中,巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）、生长调节致癌基因α（GROα）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和TNF-β在新冠肺炎组中上调（P均< 0.05）。而 IL-10、IL-18、IL-2受体α和IFN-γ诱导的单核细胞因子（MIG）在细菌性肺炎组中上调（P均< 0.05）。巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）在新冠肺炎患者住院治疗的第2周有明显的下调;单核趋化蛋白-1（MCP-1）的变化与新冠肺炎患者的核酸检测结果变化一致。结论 新冠肺炎患者和细菌性肺炎患者体内存在不同的细胞因子表达谱。M-CSF和MCP-1在新冠肺炎疾病进展中起着重要作用。     

去甲斑蝥素对Burkitt淋巴瘤Raji细胞株生物学特性的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(nor-cantharidin,NCTD)对Raji细胞的增殖抑制及周期阻滞作用。方法:通过台盼蓝拒染法观察NCTD对Raji细胞及外周血单个核细胞(perip heralblood mononuclear cells,PBMC)的增殖抑制情况;甲基纤维素集落形成法观察NCTD对Raji细胞自我更新能力的影响;流式细胞仪检测Raji细胞周期变化。结果:NCTD抑制Raji细胞增殖,具有剂量时间依赖性(P<0.05),但是对单个核细胞增殖无影响(P>0.05);NCTD显著抑制Raji细胞的集落形成能力(P<0.05),NCTD使Raji细胞G2/M期细胞增多,G0/G1期细胞和S期细胞减少。结论:去甲斑蝥素能抑制Raji细胞增殖并产生G2/M期阻滞,且对Raji原始干祖细胞有抑制作用,有可能成为一种新的抗瘤制剂作用于人Burkitt淋巴瘤。     

白藜芦醇增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用

目的:观察白藜芦醇作用前后TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用的变化。方法:流式细胞仪检测KG-1a细胞表面CD34和CD38的表达,二甲氧唑黄(XTT)细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测白藜芦醇作用前后TRAIL对KG-1a细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡变化。流式细胞仪检测白藜芦醇作用前后KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体表达变化。结果:人髓系白血病KG-1a细胞CD34+CD38-占(58.67±2.87)%,10~1 000 ng/ml的TRAIL对KG-1a细胞增殖无明显影响,但对白藜芦醇作用后的KG-1a细胞的增殖有明显抑制作用,白藜芦醇能促进TRAIL诱导KG-1a细胞凋亡,并能上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达。结论:白藜芦醇能增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用,其机制可能与白藜芦醇上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达有关。