4种血清型登革病毒外膜蛋白重组抗原的表达

摘要 目的 在大肠杆菌中表达重组1－4型登革病毒外膜蛋白,为研制登革病毒抗体快速检测试剂提供原材料。方法 根据基因序列设计、合成引物并经PCR方法扩增1－4型登革病毒部分外膜蛋白基因片段,克隆至表达载体pET30a(+)并在大肠杆菌中诱导表达。小量表达以及纯化后的重组蛋白做SDS-PAGE分析并经WB实验验证其免疫活性。结果 酶切消化及电泳结果表明4种重组质粒均构建成功。经IPTG诱导后,4种重组大肠杆菌均可表达相应的重组蛋白。纯化前后的重组蛋白经WB实验表明,4种重组蛋白均能与对应型别的病毒感染者血清反应。结论 利用大肠杆菌表达系统,成功表达重组1－4型登革病毒外膜蛋白,4种型别的重组蛋白可被各自血清型的抗体结合,均具有免疫反应活性。     

福建省首次发现米克戴德军团菌感染病例

目的 对1例重症肺炎患者进行军团菌病确诊和血清分型,为该血清型军团菌病的诊疗提供科学依据。方法 对病例开展流行病学个案调查和临床病案分析;采集病例标本进行血清抗体检测和常规分离鉴定,对菌株进行生化试验和血清分型;运用PCR技术进行分子诊断。结果 患者2份血清军团菌抗体均为阳性,军团菌培养阳性,生化特性与军团菌相符;菌株与非嗜肺军团菌乳胶凝集阳性,与米克戴德军团菌诊断血清产生凝集。结论 该患者被确诊为感染米克戴德军团菌,为我省首次发现该血清型感染病例;对免疫功能低下且原因不明的肺炎病例应尽早开展军团菌的相关检测,为合理使用抗生素提供依据。     

新型冠状病毒肺炎确诊病例粪便标本的病毒核酸检测

目的了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例粪便中2019-nCoV感染情况。方法收集36例确诊病例的粪便标本/肛拭子标本,采用实时荧光RT-PCR检测2019-nCoV载量,利用统计分析软件SPSS 19.0比较病例的带毒率。结果36份标本共检出2019-nCoV核酸阳性20份(55.56%),危重症病例(2/3)和重症病例标本阳性率均为66.67%(6/9)、普通肺炎病例阳性率为62.50%(10/16)、轻症肺炎病例阳性率为25.00%(2/8)。36例确诊病例包括男性22例、女性14例,检出率分别为54.55%和57.14%;病例年龄分布于17~86岁之间,平均为48.75岁。36份标本其中5份肛拭子标本检出阳性标本2份,31份粪便标本检出阳性标本18。临床分型、性别、年龄和标本类型各组间阳性检出率均无统计学差异。结论本研究发现COVID-19患者,无论重症、轻症患者粪便标本均存在2019-nCoV基因检测阳性,提示消化道可能是该病毒排泄渠道,因此可能存在粪-口传播途径,研究结果具有重要的临床和流行病学意义。     

异源双链泳动分析法在人类免疫缺陷病毒1基因亚型分析中的应用

目的 运用异源双链泳动分析法（HMA）进行人类免疫缺陷病毒1（human immunodeficiency virus-1,HIV-1)基因亚型分析。了解福建省HIV-1亚型的流行情况。方法 收集细胞培养中HIV-1感染的外周血单个核细胞（PBMC），聚合酶链反应（PCR）扩增HIV-1膜蛋白基因（env)区的核酸片段，与标准亚型的对照质粒的PCR产物进行杂交，形成异源双链二聚体，根据其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的泳动率确定其亚型，并进一步对标本进行序列测定和系统树分析，结果 15份标本中，80.00%为E亚型，6.67%为B亚型，2份不能确定其亚型，比较异源双链泳动法和序列测定法的结果，显示两种分析方法对HIV-1病毒基因分型有较高的一致性，其亚型一致率为86.67%。结论 福建省流行的HIV-1毒株以E亚型为主，亚型分析5法具有快速，简便，经济和高特异性的特点，可用作对HIV流行毒株进行长期监测的重要手段。     

溴氰菊酯现场灭蚤效果观察

近年来,随若有机氯杀虫剂的禁止使用,加之一些有害昆虫对有机磷杀虫剂产生抗性,新型高效杀虫剂的探求已成为主要研究课题。为此,作者等于1987年9月,在莆田县黄石镇东埭村进行了溴氰菊酯现场灭蚤试验。结果如下:     

福建省发现1例登革3型病毒感染者

[目的]对福建省2006年发现的1例登革热病例进行实验室检测并鉴定病毒型别。[方法]应用免疫层析及ELISA方法检测感染者双份血清中病毒IgM和IgG抗体,逆转录-套式PCR方法扩增登革病毒特异性核酸片段,并与1～4型病毒特异性产物比较,判定其型别。[结果]双份血清标本均检出病毒IgM抗体,恢复期血清中IgG抗体出现阳转。使用通用引物和型特异性引物,在急性期标本中检出血清3型登革病毒特异性核酸,其他型别为阴性。流行病学调查表明该病人系从菲律宾回国,在当地有蚊虫叮咬史。[结论]该登革热病例为血清3型病毒感染。结合流行病学调查,其感染地可能为菲律宾,为防止病毒暴发流行,应对其进行密切监测。     

间接免疫荧光试验在HIV抗体检测中的应用

目的：评价间接免疫荧光试验（IFA）作为一种确认实验在HIV抗体检测中的应用。方法：用T嗜性的HIV毒株感染MT4细胞制备抗原片,并与不同稀释度的免疫血清相结合,再滴加荧光素标记的羊抗人IgG,在荧光显微镜下检测特异性免疫荧光,结果：用IFA检测43分血清样本（其中包括17份WB阳性血清,14份阴性血清和12份ELISA阳性或WB出现可疑条带但按标准不能判为阳性的可疑血清）,除HIV－2血清呈阴性反应外,其余检测结果与WB相符,IFA对HIV－1抗体检测的敏感性和特异性均达到100％,HIV－1阳性血清抗体最高滴度达到1：10240。结论：IFA可用于HIV－1抗体检测的确认,它可作为Western Blot的一种补充或替代实验。     

福建省鼠疫检验实验室血清学室间质控结果与评价

[目的]为评价全省鼠疫检验实验室检验工作能力,及时发现影响实验检验因素,纠正不规范的检验操作,避免检测工作中室间误差,确保鼠疫监测检验结果的准确性。[方法]统一制备质控血清,各鼠疫实验室统一时间检测,及时反馈结果。省疾病预防控制中心对质控结果进行分析与评价。[结果]3种检测方法平均合格率均在92％以上,各年度合格率没有显著性差异。[结论]金省各监测点鼠疫检验实验室基本具备鼠疫血清学检验能力,检验质量达到质控要求。     

福建省戊型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

目的了解福建省动物种群及人群中戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况。方法收集猪、犬、乳牛、山羊和啮齿动物(黄胸鼠及褐家鼠)等5种与人类关系密切的哺乳动物血清标本共1151份,收集普通人群血清标本2209份,暴露人群血清标本1722份,应用ELISA检测抗-HEV IgG抗体。结果不同动物HEV感染率有差异(x2=406.25,P<0.01),其中猪的感染率为71.31%,散养家猪(70.00%-94.12%)HEV感染率高于大型专业养猪场(39.77%),不同生长期(≥4月龄)的猪其HEV感染率未见不同。普通人群HEV的阳性率为23.3%,暴露人群HEV阳性率为33.3%;暴露人群阳性率显著高于普通人群。在暴露人群中与鸡密切接触者,HEV的阳性率显著高于与猪密切接触者。HEV阳性率有随年龄的增长而上升的趋势,在普通人群中,男、女性HEV阳性率差异无统计学意义(P>0.05);但在暴露人群中男性HEV阳性率显著高于女性。结论猪和暴露人群HEV的感染率较高;与猪、鸡密切接触者HEV阳性率高于普通人群,证明了HEV可能是一种人兽共患病。     

福建省2011-2014年手足口病相关病原柯萨奇病毒A组10型的分子流行病学研究

目的 了解2011-2014年福建省手足口病相关病原其他肠道病毒中优势血清型柯萨奇病毒A组10型(Cox A10)的分子流行病学特征。方法 对2011-2014年福建省确诊为其他肠道病毒感染的1525例手足口病病例咽拭子和肛拭子标本进行病毒培养和鉴定分型,扩增、测序并分析其中优势血清型Cox A10的完整VP1区基因片段。结果 共分型鉴定出407例其他肠道病毒病例,包括Cox A10病例103例(占25.3%)。Cox A10病例在2011-2014年福建省手足口病病原谱的年度构成比分别为11.0%、6.0%、18.4%和9.2%。与手足口病总体疫情相比,Cox A10病例在地区、性别、年龄组的分布上没有特异性,致重症率较高。VP1区基因序列分析显示,Cox A10福建分离株与原型株的核苷酸序列同源性较低(76.0%~77.1%),氨基酸序列同源性为91.9%~93.6%。进化分析显示,Cox A10福建分离株与原型株及国外地区分离株的亲缘关系远,与国内地区分离株的亲缘关系近。Cox A10福建分离株分布在进化树上的多个分支。结论 Cox A10为2011-2014年福建省手足口病的主要病原之一。Cox A10福建分离株与国内相应分离株同进化共循环。