布氏杆菌病新型疫苗的研究进展

布氏杆菌病是一种流行广泛、危害很大的人畜共患病。因其独特的致病机制及感染后难以根治的特点,疫苗的应用一直是其主要的防治方法。其疫苗的应用也大体经历了死苗、减毒活疫苗、菌体组分苗等发展历程,但各种疫苗的有效性及对机体的毒性一直是应用的难点和隐患。随着科技的发展,基因疫苗等各种新型疫苗的发现又为布氏杆菌疫苗的研究开辟了新天地,已成为疫苗研究的热点及重点。本文就布氏杆菌病新型疫苗的研究现状与进展等方面做一综述。     

反向遗传操作技术在流感病毒中的应用研究

反向遗传操作技术(reverse genetics, RG)是近年来比较热门的一门技术,该技术可以在DNA水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,然后通过拯救病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而可以对病毒基因组表达调控机制、病毒致病的分子机理等进行研究.我们通过对近年来国外有关文献的回顾,希望能够正确看待病毒拯救技术的利弊,注意生物安全性,希望能够为防治可能发生的流感病毒流散和传播提供新的思路.     

以病毒样颗粒为载体的小肾母细胞瘤新型疫苗的研制

目的 对小儿肾母细胞瘤以病毒样颗粒为载体的新型疫苗进行初步研究,为该肿瘤的治疗以及替代手术后放疗和化疗提供新的切入点.方法 采用基因重组技术分别克隆编码小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A*2402、HLA-A*-2402x,将其融合到乙型肝炎核蛋白基因片段上,运用棒状杆菌表达系统对融合蛋白进行表达. 结果细胞病变显示病毒重组,SDS-PAGE显示目的 蛋白的表达,电镜下可观察到目的 蛋白.结论 小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x融合到乙型肝炎核蛋白基因片段上可以产生融合病毒样颗粒,该融合蛋白的制备将为小儿肾母细胞瘤的免疫治疗提供新的思路.     

布氏杆菌pCDNA3.1-L7/L12核酸疫苗的构建及其免疫学评价

目的 获得布氏杆菌保护性抗原L2／L12重组蛋白及pCDNA3．1-L7／L12重组质粒，并比较其诱导特异性免疫应答的能力。方法 PCR扩增布氏杆菌核蛋白L7／L12基因分别构建至原核表达载体PET32a( )和真核表达载体pCDNA3.1( )中；pET32a-L7／L12重组质粒转化BL21(DE3)，所表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析、纯化后免疫小鼠；pCDNA3.1-12／L12重组质粒配以GM-CSF同时肌肉注射免疫小鼠，3次免疫后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、Western blot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生，蛋白苗所诱导的抗体效价远远高于DNA疫苗；通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主。结论 所构建的布氏杆菌DNA疫苗和蛋白苗均具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力，DNA疫苗诱导产生的细胞免疫反应强于蛋白苗，可作为潜在的布氏菌新型疫苗，有进一步研究的意义。     

布氏菌病双价DNA疫苗免疫保护效果的研究

【目的】构建布氏杆菌pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗，观察其免疫保护效果。【方法】分别克隆L7／L12、BCSP31基因，构建pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗。转染COS-7细胞，免疫细胞化学检测目的蛋白的表达。DNA疫苗免疫Balb／c小鼠，观察体液免疫和细胞免疫效果。布氏杆菌强毒株腹腔攻毒，观察双价DNA疫苗的免疫保护效果。【结果】构建的pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗在COS-7细胞有目的蛋白的表达。双价DNA疫苗免疫小鼠，ELISA检测双价DNA疫苗产生了高水平的特异性IgG抗体，且抗体亚型以IgG2a为主。FCM检测双价DNA疫苗的CD4^＋／CD8^＋比值明显下降。ELISPOT检测到疫苗免疫后小鼠分泌IFN-γ的T细胞增多。攻毒实验证明双价DNA疫苗能够产生有效的保护效果；部分数据及攻毒结果表明双价DNA疫苗的效果优于单价。【结论】研制的pcDNA3．1（＋）-L7／L12-BCSP31双价DNA疫苗免疫Balb／c小鼠能产生有效的免疫保护效果，且双价DNA疫苗效果优于单价。     

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。     

记忆性B细胞的研究进展

记忆性B细胞（Bm）是初次免疫应答后克隆消除保留下来的高亲和力细胞,它们有其独特的表型以及特殊的生物活性,如同Bm相似的异质性及其活化特点。Bm是机体重要的免疫细胞,在体液免疫中扮演着十分重要的角色．对浆细胞的产生、抗体的生成以及持久的免疫保护起关键的作用。近年来Bm的长期免疫记忆机制已成为研究的热点,然而热点也是难点,迄今为止,对其记忆机制还不完全明了,但最近有报道指出,Bm的长期免疫记忆机制在免疫应答及免疫保护方面起着重要的作用,在临床治疗及疫苗研制方面也起着一定的指导作用。