眼部新生血管性疾病与内源性血管形成抑制剂

眼部新生血管性疾病是损害人类视力的主要疾病,其发病机制非常复杂,目前认为眼内新生血管形成依赖于血管生长促进因子及抑制因子之间的消长平衡。近年来,内源性血管形成抑制剂在眼部新生血管性疾病中的作用越来越受到关注,本文就与眼内新生血管形成有关的内源性血管形成抑制剂作简要综述。     

衰老标记蛋白-30--一种新的肝细胞癌相关抗原

目的：寻找人肝细胞癌（ＨＣＣ）特异抗原。方法：应用重组克隆表达抗原的血清学鉴定技术（ＳＥＲＥＸ）,用病人自身血清从广西肝细胞癌ＣＤＮＡ文库中选出编码ＨＣＣ肿瘤抗原的基因克隆,用肝癌患者及其他人血清检验ＨＣＣ肿瘤抗原原肝癌的特异性,测定抗原ＤＮＡ序列并一基因库核对寻找其同源结构。结果：其中一种ＨＣＣ肿瘤抗原与衰老标记蛋白－２０（ＳＭＰ－３０）是同源结构。相应抗体主要只见于ＨＣＣ病人,在２０例其它５种     

肝癌相关抗原SMP-30羧基端基因的构建、表达及血清学分析

目的：用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌肿瘤相关抗原衰老标记蛋白-30(SMFL30)，检测肝癌、肝硬化及其它肿瘤病人血清中相应抗体的阳性率。方法：PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌相关抗原SMP-30羧基末端165个氨基酸的DNA序列，构建其表达质粒，经原核表达和亲和层析纯化获得目的蛋白，经N-末端氨基酸序列测序证实为SMP-30蛋白。采用ELISA方法检测肝癌、肝硬化与其他肿瘤患者血清中抗SMP-30抗体的阳性率。结果：以63例正常人血清为对照，肝癌、慢性肝炎、肝硬化和鼻咽癌血清中SMP-30抗体阳性率分别为39．7％(23／58)、21．9％(7／32)、64．7％(11/17)和21．6％(5／23)。7例肺癌和25例胃肠疾病中无一例阳性。Western blot亦显示部分肝癌患者血清存在有SMP-30蛋白抗体。结论：SMP-30蛋白抗体检测可望作为肝癌和肝硬化等疾病的血清学诊断指标之一。     

衰老标记蛋白-30的表达与肝疾病的关系

目的 通过检测人正常肝组织、病毒性肝炎组织、肝硬化组织和肝癌(HCC)组织及相应癌旁组织中衰老标记蛋白-30(SMP-30)的表达,探讨SMP-30与肝疾病的关系.方法 将本课题组构建的含SMP-30羧基端165个氨基酸的cDNA序列表达质粒,经表达和纯化获得MBP-SMP-30,免疫家兔制备出抗MBP-SMP-30多克隆抗体.采用免疫组织化学SABC法,检测30例人正常肝组织、10例病毒性肝炎组织、49例肝硬化组织和48例人HCC及相应癌旁组织中SMP-30的表达.结果 SMP-30定位于肝细胞的细胞质和细胞核,其在HCC癌旁组织中的表达高于另外4种组织,具有显著性差异(P＜0.05),且HCC中SMP-30的表达与肿瘤大小和病理分级无关.结论 用MBP-SMP-30融合蛋白制备的多克隆抗体可成功检测出人肝细胞中的SMP-30.SMP-30与肝疾病的发生发展有关,其高表达可能是HCC的早期性、保护性事件.     

肝癌相关抗原SMP-30基因工程菌培养条件的优化

目的:对重组人肝癌相关抗原SMP-30基因工程菌的培养条件进行研究,确定最佳培养方案以提高基因工程蛋白表达产量.方法:通过SDS-PAGE蛋白质电泳和电泳图谱扫描来分析诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导时间长短、培养温度和培养基成分对基因工程菌TB1表达肝癌相关抗原SMP-30的影响.结果:当工程菌培养条件合适,即在吸光度值A600为0.5左右时加入IPTG至终浓度0.5 mmol/L,30℃培养7 h,其表达的SMP-30融合蛋白可占细体总蛋白量的46.1%.将工程菌培养温度从37℃降到30℃时,表达蛋白质的可溶性部分可提高10%～15%.结论:通过对重组人肝癌相关抗原SMP-30基因工程菌的培养条件进行优化,获得较满意的应用工程菌表达肝癌相关抗原SMP-30的培养条件,为基因工程下游技术奠定了基础.     

广西金秀瑶族12个STR基因座遗传多态性

目的:了解广西金秀瑶族群体12个STR基因座的遗传多态性.方法:对175例瑶族男女抽取外周血,采用Chelex-100法提取DNA,荧光标记复合扩增基因座,ABI Prism 3100型遗传分析仪对扩增产物进行检测.结果:12个位点(D2S1338、 D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、FGA、vWA)共检测出94种等位基因,基因频率分布在0.002 9～0.394 3;322种基因型;符合Hardy-Weinberg平衡定律;观察杂合度(HO)分布在0.737 1～0.902 9,个人识别力(DP)分布在0.875 3～0.960 1,累积个人识别力(TDP)为>0.999 999 999,非父排除率(EP)在0.604 6～0.851 9,累积非父排除率(CEP)为0.999 999 974,多态信息量(PIC)分布在0.678 8～0.842 8.结论:广西金秀瑶族12个STR基因座均属于高度多态性遗传标记.     

模型比赛在组织学与胚胎学教学中的应用

在组织学与胚胎学课堂教学中,学生们接触的切片、照片和插图等显示的是细胞、组织和器官的平面结构,而在机体中这些结构是立体的,这就需要学生将所看到的二维图形还原为事物本身的三维构象.如何培养学生的观察能力和空间思维能力?如何调动学生的学习积极性?如何帮助学生理论联系实际,掌握正确的学习方法?这也是教师在教学实践中不断探讨的问题.2004年以来,本教研室对七年制临床医学专业的教学模式进行了改革,其中改革内容之一是根据教学内容由学生自己动手制作模型并参与评比,迄今已举办了4届.现就模型比赛的实施过程及其效果总结如下.     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增殖及ERK蛋白表达的影响

目的 观察Tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞增殖及细胞外信号调节激酶(ERK) 蛋白表达的影响。方法　采用MTT比色法测定Tumstatin肽（T8肽）对血管内皮生长因子（VEGF）诱导下的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖的干预作用;采用Western-blot检测T8肽对VEGF刺激后15min、30min、45 min和60min的RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。 结果　T8肽浓度在5μg/ml 以上时对RF/6A细胞有抑制作用,且抑制作用随着浓度的增大而增高,各组OD值和抑制率比较差异均有显著性意义（P均<0.05）;T8肽可抑制VEGF对RF/6A细胞的促增殖作用;在1～40μg /ml相同浓度条件下,T8肽对VEGF条件下的RF/6A细胞增殖抑制率显著大于无VEGF条件下的抑制率（P均<0.01）。VEGF可刺激RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达增加,T8肽可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞ERK1/2蛋白的表达。 结论　Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖,机制可能与VEGF信号转导通路上的ERK1/2细胞信号转导通路有关。     

精子蛋白sp32/OY-TES-1mRNA及其蛋白在正常组织表达的探讨

目的 了解正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的表达量是否存在差异以及该蛋白的表达情况,为sp32/OY-TES-1表达谱增加更多信息.方法 提取40例(19种)正常组织总RNA,逆转录-聚合酶合成cDNA,普通PCR检测cDNA质量;构建目的 基因sp32/OY-FES-1及看家基因HPRT质粒,制备标准品,绘制标准曲线,建立实时定量PCR(TaqMan)方法和优化反应体系,检测组织中sp32/OY-TES-1和HPRT的表达,sp32/OY-TES-1mRNA的表达量以OY-TES-1/HPRT表示.通过制备的OY-TES-1多克隆抗体,结合免疫组织化学检测sp32/OY-TES-1蛋白在多种正常组织中的表达.结果 正常组织中sp32/OY-TES-1mRNA阳性率为72.50%(29/40);2.非睾丸正常组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量值(目的 基因/看家基因)为0.000 1～0.495 0,呈对数正态分布;3.睾丸组织中sp32/OY-TES-1 mRNA的相对表达量为44.9,是其他正常组织的91～1 000倍;4.免疫组织化学(IHC)显示在所检测的多种正常组织和细胞中(10例睾丸组织、8例结肠、7例肝、6例骨骼肌、5例胃、5例晶状体、4例精子、3例外周血白细胞和1例肾),除4例精子和1例肾组织中的肾小管外,其余均未见OY-TES-1蛋白阳性反应.结论 sp32/OY-TES-1 mRNA广泛地表达在各种正常组织,表达量因组织不同而异;睾丸组织是所检测的正常组织中其mRNA表达量最高的组织.而sp32/OY-TES-1蛋白比其mRNA更具有限制性表达的特点.     

恶寒与畏寒之不同视角辨析

在基础研究及临证实践中,对恶寒与畏寒的一些细节问题仍时有争议。本文通过不同角度探讨和分析后认为,恶寒常见于表证和里实寒证,而畏寒主要见于虚寒证。恶寒的怕冷可能是由于温度调定点的改变而导致,是中枢性的;而畏寒的怕冷则可能是机体消耗过度、能量代谢不足所致,是外周性的,因而造成了这两者在多加衣被或近火取暖时反映的差别。表证时恶寒常伴发热,但并不是必须同时出现,且发热应为客观的体温升高;而里实寒证时可不伴发热,虚寒证畏寒时还可伴体温偏低,因而有无伴随发热尚不足以成为恶寒与畏寒的一个鉴别点。