问号钩端螺旋体脂蛋白LipL32膜定位及其免疫应答

目的 确定问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性脂蛋白抗原LipL32膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型.方法 IPTG诱导目的 重组蛋白rLipL32-1和rLipL32-2表达,Ni-NTA亲和层析法提纯rLipL32.采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区钩体患者血清标本及rLipL32兔抗血清与我国问号钩体参考标准株的交叉凝集情况.采用胶体金免疫电镜技术对LipL32进行膜定位.建立基于rLipL32的ELISA,检测钩体患者血清中特异性抗体类型及其水平.结果 黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群.rLipL32兔抗血清均能与我国问号钩体参考标准株发生MAT效价为1∶80～1∶320的交叉凝集反应.LipL32是位于钩体外膜表面的蛋白质分子.156例MAT阳性钩体患者血清标本中,rLipL32-1和rLipL32-2特异性IgM阳性率分别为91.0%～92.9%和90.4%～92.3%,特异性IgG阳性率分别为99.4%和97.4%～98.1%.结论 LipL32是问号钩体属特异性表面蛋白抗原.自然感染钩体时,LipL32-1和LipL32-2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体.rLipL32-1和rLipL32-2可作为研制检测试剂盒的候选抗原.     

幽门螺杆菌黏附素A有效T和B联合抗原表位噬菌体展示和抗原性测定

Objective To analyze and determine the efficient T- and B-combined (T/B) antigenic epitopes in Helicobacter pylori adhesin A. Methods Recombinant HpaA (rHpaA) was expressed for immunizing rabbit to generate antiserum. T- and B-cell epitopes in HpaA molecule were predicted by using bioinformatic technique. The segments to encode T/B combined epitope peptides were amplified by PCR and the phage display systems of T/B combined epitopes were subsequently constructed. PEG/NaCl precipitation method was applied to extract the recombinant phage PⅢ (rPⅢ) that displayed T/B combined epitopes. By using either commercial IgG against whole-cell of Helicobacter pylori or rHpaA antiserum as the primary antibody, the T/B combined epitopes displayed in rP Ⅲ s were screened and identified by Western blot and ELISA. MTT was applied to determine the proliferation of rHpaA-immunized mouse splenocytes after stimulation of the different recombinant rPⅢ proteins. Results In the HpaA molecule there were five T/B combined epitopes: HpaA10, HpaA37, HpaA79, HpaA116 and HpaA143. All the T/B combined epitopes were successfully displayed on the surface of PⅢ protein of phage M13. The results of Western blot, ELISA and MTT confirmed that HpaA116 was the predominant antigenic epitope, both HpaA37 and HpaA79 were the efficient antigenic epitopes. However, HpaA10 and HpaA143 were identified as ineffective antigenic epitopes. Conclusion The phage display systems of T/B combined epitope peptides of H. pylori adhesin A have been successfully generated in this study. HpaA37 and HpaA79, especially HpaA116 are the efficient T/B combined antigenic epitopes in HpaA of H. pylori.     

地塞米松对哮喘大鼠血中性粒细胞TGF-β/Smad信号传导途径的调控作用

哮喘是一种儿童时期常见的气道慢性炎症性疾病,涉及多种炎症细胞和炎症介质。参与的细胞有嗜酸性粒细胞、中性粒细胞（PMN）、淋巴细胞、肥大细胞和巨噬细胞等,其发病机制十分复杂,至今尚未完全阐明。最近研究发现,哮喘急性期PMN处于活化状态,能释放多种酶、炎症介质和细胞因子,参与了哮喘的炎症过程。     

内皮中性粒细胞激活肽-78在哮喘大鼠中性粒细胞中的表达及意义

目的观察大鼠哮喘内皮中性粒细胞激活肽-78(ENA-78),表达及布地奈德对其的影响,探讨中性粒细胞(NEU)参与哮喘发作的可能作用机制。方法采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组、布地奈德组,流式细胞术测定血NEU ENA-78的表达。结果哮喘组(97.65±13.99)MFI NEU ENA-78的平均荧光强度显著高于对照组(50.79±8.66)MFI(P<0.01);布地奈德组(75.81±6.10)MFI NEU ENA-78的平均荧光强度显著性低于哮喘组,且高于对照组(均P<0.01),NEU ENA-78的表达水平与支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数呈显著正相关(n=29,r=0.781,P<0.01)。结论哮喘大鼠NEU ENA-78的表达水平增加,NEU可能通过ENA-78参与哮喘发作的炎症过程;布地奈德可能部分通过下调NEU ENA-78,从而减轻哮喘气道炎症。     

信号传导子及转录激活子-6、前列腺特异抗原在前列腺癌中的表达及意义

目的：观察信号传导子及转录激活子（STAT）-6和前列腺特异抗原（PSA）在前列腺癌中的表达,探讨前列腺癌的发病机制和早期诊断方法。方法：20例前列腺癌和36例良性前列腺增生患者均来自2005年1月-2008年5月的住院手术者,免疫组化法测定前列腺组织STAT-6和PSA蛋白的表达,电化学发光法测定血清总PSA（tPSA）及游离PSA（fPSA）,彩色多普勒超声测量前列腺体积（PV）,计算f/t比值和前列腺特异抗原密度（PSAD）。结果：前列腺癌组前列腺组织的STAT-6和PSA蛋白的表达水平（OD值分别为0.24±0.08和0.31±0.09）显著高于良性前列腺增生组（OD值分别为0.12±0.06和0.20±0.07）（P〈0.01）。前列腺癌组血清tPSA及fPSA的含量和PSAD值[分别为（43±26）、（3.8±2.2）ng/mL和（0.88±0.66）ng·mL^-1·cm^-3]显著高于良性前列腺增生组[分别为（6±4）、（1.2±0.8）ng/mL和0.12±0.09）ng·mL^-1·cm^-3]。两组之间f/t比值和PV值[分别为（0.14±0.10）、（61±35）cm3;（0.31±0.48）、（47±24）cm3]比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论：STAT-6和PSA可能参与了前列腺癌的形成过程,血清tP-SA、fPSA、PSAD可作为前列腺癌（PCa）筛查良好的指标。     

男性慢性盆腔疼痛综合征患者前列腺液中肿瘤坏死因子受体浓度测定

目的：检测肿瘤坏死因子受体（sTNF-R1和sTNF-R2）在男性慢性盆腔疼痛综合征（CPPS）患者前列腺液中的表达水平,探讨sTNF—R1和sTNF-R2在CPPS炎症过程中的可能作用机制。方法：CPPS患者均来自2008年3月-2009年1月,其中ⅢA级24例、ⅢB级20例,并与15例健康人作对照。直肠按摩取出前列腺液,ELISA法检测前列腺液sTNF—R1和sTNF-R2的蛋白浓度。结果：CPPsⅢA组前列腺液sTNF—R1和sTNF—R2的蛋白浓度显著高于ⅢB组[（46±6vs41±6）,P〈0．05;（13．0±4．8vs7．9±4．1）ng／mL,P〈0．01],且ⅢB组前列腺液sTNF—R1和sTNF—R2的蛋白浓度显著高于对照组[分别为（25±8）、（2．5±1．9）ng／mL,均P〈0．01]。结论：男性CPPS患者前列腺液中sTNF—R1和sTNF-R2的蛋白浓度增加,两者可能共同参与了CPPS的炎症过程。     

杭州市3～6岁儿童常见肠道线虫感染现状

于2006年4～6月对杭州市14所幼儿园按分层整群随机抽样调查1 667例3～6岁学龄前儿童的肠道线虫感染情况。用生理盐水直接涂片法和饱和盐水浮聚法检查蛔虫卵、钩虫卵、鞭虫卵。用透明胶纸肛拭法检查蛲虫卵。肠道线虫总感染率为12.96%，其中蛲虫4.44%、蛔虫8.28%、鞭虫0.54%、钩虫0.24%；肠道线虫感染率的高低与幼儿园环境和卫生设施的水平成反比。     

哮喘大鼠TLR1、 FasL和TRAF2表达及甲基强的松龙干预作用

目的:探讨TLR1、FasL和TRAF2在大鼠哮喘炎症机制中的作用,观察甲基强的松龙对其表达的影响。方法:27只SD大鼠,随机分成哮喘模型组、正常对照组和甲基强的松龙组,每组9只,采用流式细胞术检测血淋巴细胞TLR1和FasL表达,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2表达。结果:哮喘组血淋巴细胞TLR1表达水平显著低于甲基强的松龙组(P<0.05),正常对照组血淋巴细胞TLR1表达水平分别与哮喘组及甲基强的松龙组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。哮喘组和甲基强的松龙组血淋巴细胞FasL表达水平均显著高于正常对照组(P均<0.05),而哮喘组血淋巴细胞FasL表达水平与甲基强的松龙组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘组TRAF2光密度值显著高于正常对照组和甲基强的松龙组(P均<0.01),甲基强的松龙组TRAF2光密度值与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘模型大鼠FasL和TRAF2表达增加,而TLR1无变化;甲基强的松龙能下调TRAF2和提升TLR1水平,从而起到抗炎作用。     

不同5′-硝基咪唑类药物治疗厌氧菌性及滴虫性阴道炎临床疗效比较

目的观察甲硝唑、替硝唑和奥硝唑治疗厌氧菌性和滴虫性阴道炎的临床疗效和不良反应,了解所分离的厌氧菌和阴道毛滴虫对上述药物的敏感性。方法根据细菌学和寄生虫学实验室检查结果,将290例厌氧菌性和62例滴虫性阴道炎患者各随机分为3组,分别给予甲硝唑、替硝唑和奥硝唑治疗。采用二倍试管平皿稀释法测定厌氧菌分离株对不同药物的最低抑菌浓度(MIC),采用二倍试管稀释法测定阴道毛滴虫分离株对不同药物的最低杀虫浓度(MPC)。结果厌氧菌性阴道炎组中,甲硝唑亚组的有效率为54．6%,明显低于替硝唑亚组的68．8%(P＜0．05)和奥硝唑亚组的74．2%(P＜0．01),后两组的差异无显著性(P＞0．05)。滴虫性阴道炎组中,甲硝唑、替硝唑和奥硝唑亚组的有效率分别为90．5%、100．0%和100．0%,3个亚组间的差异均无显著性(P＞0．05)。甲硝唑不良反应总发生率明显高于替硝唑(P＜0．01)和奥硝唑(P＜0．01),但后两组间不良反应率的差异无显著性(P＞0．05)。甲硝唑、替硝唑和奥硝唑对266株革兰阴性厌氧菌MIC_(90)范围分别为4～8、1～2和1～2μg/mL,甲硝唑、替硝唑和奥硝唑对261株革兰阳性厌氧菌MIC_(90)范围分别为32～64、8～32和8～16μg/mL。甲硝唑、替硝唑和奥硝唑杀灭阴道毛滴虫的MPC分别为25、5和5μg/mL。结论与甲硝唑比较,替硝唑和奥硝唑治疗厌氧菌性阴道炎的疗效高、不良反应少,但甲硝唑的价格低廉。临床厌氧菌株对甲硝唑有较高的耐药率。3种药物抗革兰阴性厌氧菌的作用均明显高于革兰阳性厌氧菌,但革兰阳性厌氧菌对奥硝唑仍有较高的敏感性。     

问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因原核表达及其产物免疫原性分析

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定.方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因,并用常规基因工程方法建立其原核表达系统.采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统,检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2表达量.采用免疫双扩散试验及Western Blot,鉴定rLipL32/1- LipL21-OmpL1/2的免疫原性.结果:获得了序列正确的lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统E.coli BL21DE-3pET42a-lipL32/1-lipL21-ompL1/2.表达条件优化后的rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2产量为37.78 mg/L,是优化前的3.7倍.rLipL32/1-LipL21- OmpL1/2兔抗血清免疫双扩效价为1∶4.rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2抗血清能识别rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2以及rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2.rLipL32/1- LipL21-OmpL1/2能与问号钩体56601株全菌兔抗血清以及黄疸出血群、流感伤寒群、波摩那群、秋季群问号钩体感染患者血清出现阳性杂交信号.结论:成功地构建了lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,表达产物具有良好的抗原性和交叉免疫反应性,可作为研制通用型问号钩体基因工程疫苗及通用型钩体病血清学检测的抗原.