布地奈德对哮喘模型大鼠肺组织Toll样受体4和5表达的影响

目的观察布地奈德对哮喘模型大鼠肺组织Toll样受体4（TLR4）和TLR5表达的影响,探讨TLR在哮喘炎症机制中的作用。方法 27只SD大鼠随机分成哮喘组、对照组、布地奈德组,每组9只。制备哮喘大鼠模型,免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织TLR4和TLR5表达。结果哮喘组大鼠肺组织TLR4光密度值与对照组比较,差异无统计学意义（P〈;0.05）;布地奈德组大鼠肺组织TLR4光密度值显著低于对照组和哮喘组（P〈0.05）。哮喘组大鼠肺组织TLR5光密度值显著高于对照组（P〈0.05）;布地奈德组TLR5与对照组及哮喘组比较,差异均无统计学意义（P〈0.05）。肺组织TLR4和TLR5蛋白表达水平无相关性（r=0.246,P＆gt;0.05）。结论 OVA致敏的哮喘模型大鼠肺组织TLR5表达升高,TLR4无变化,TLR5在哮喘中可能起到促炎作用。布地奈德能下调哮喘模型大鼠肺组织TLR4和TLR5表达。     

荧光定量PCR用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度检测的研究

目的：建立一种高效﹑简便的荧光实时定量PCR方法，用于重组杆状病毒鉴定及病毒滴度的检测。方法：利用Bac-to-Bac载体系统在昆虫细胞中构建含人IL-18基因的重组杆状病毒，收获的病毒母液以10倍梯度系列稀释后，提取病毒基因组DNA。以10倍梯度稀释的重组杆状病毒穿梭质粒（bacmid）作为标准模板，进行荧光定量PCR反应扩增IL-18基因片段并绘制标准曲线，然后以上述的重组杆状病毒基因组DNA作为模板，采用同样体系进行实时PCR反应检测，同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度。结果：成功构建了重组杆状病毒并建立了病毒滴度的实时荧光PCR检测方法。运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线形范围为101-108拷贝，病毒母液的DNA拷贝浓度（vg/mL）值约为空斑检测的滴度 pfu/mL值的10倍。结论：荧光定量PCR方法可灵敏快速地鉴定重组杆状病毒，并在较大的线形范围内检测重组杆状病毒滴度，较之空斑法更准确地反映了重组杆状病毒的实际数量。     

中性粒细胞弹性蛋白酶、髓过氧化物酶在大鼠哮喘中的变化及意义

目的：观察中性粒细胞（PMN）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）和髓过氧化物酶（MPO）在大鼠哮喘中的表达水平变化及意义。方法:18只大鼠被随机平均分成2组：哮喘组、正常对照组，以卵清白蛋白（OVA）致敏激发法复制大鼠哮喘模型，对血PMN进行分离纯化，免疫组化和比色法检测MPO的表达水平，ELISA法测定NE的蛋白浓度。 结果:（1）免疫组化法显示哮喘组血PMN和支气管壁中MPO的表达水平均显著高于对照组（P<0.01），比色法显示哮喘组支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织中MPO的活性显著高于对照组（P<0.05，P<0.01）；（2）哮喘组PMN和BALF中NE蛋白浓度显著高于对照组（P<0.01）；（3）哮喘组BALF、支气管壁、肺组织中PMN的计数均显著高于对照组（P<0.01）。 结论:PMN 计数、NE和MPO的表达水平在此实验性哮喘中增加，PMN可能通过分泌NE、MPO参与哮喘炎症过程。     

布地奈德对哮喘大鼠肺泡巨噬细胞GITR/GITRL信号系统表达的调控作用

目的：通过观察布地奈德对大鼠肺泡巨噬细胞（Mφ）GITR/GITRL表达的影响,探讨GITR/GITRL信号系统参与哮喘炎症反应的机制。方法：将30只SD大鼠随机分为哮喘组、对照组、布地奈德组,每组10只,卵白蛋白建立哮喘模型。行支气管肺泡灌洗分离提纯肺泡Mφ,分别采用实时荧光定量PCR法和细胞免疫化学法测定肺泡MφGITR/GITRL mRNA和蛋白的表达。结果：哮喘组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（11.05±0.23,9.82±1.24）和蛋白OD值（0.64±0.08,0.71±0.05）表达水平显著高于对照组△CT值（12.79±1.28,11.88±1.37）和蛋白OD值（0.37±0.09,0.39±0.04）（P均〈0.05）;布地奈德组肺泡MφGITR/GITRL mRNA△CT值（12.97±0.97,11.16±1.42）和蛋白OD值（0.40±0.06,0.40±0.07）表达量显著低于哮喘组（P均〈0.05）,但与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论：哮喘大鼠肺泡MφGITR/GITRL的表达升高,肺泡Mφ可能通过GITR/GITRL信号系统起到促进哮喘气道炎症的作用,而糖皮质激素布地奈德可能通过抑制肺泡MφGITR/GITRL信号通路在哮喘治疗中起作用。     

毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿血清可溶性TRAIL及其受体TRAILR1、TRAILR4的表达

【目的】 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(sTRAILR1和sTRAILR4)在毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿中的表达,探讨它们在呼吸道感染炎症机制中的作用。 【方法】 ELISA 法检测毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿及健康对照组儿童血清sTRAIL、sTRAILR1和sTRAILR4的蛋白浓度。 【结果】 毛细支气管炎组和急性上呼吸道感染组患者血清中sTRAIL、sTRAILR1和sTRAILR4的蛋白浓度分别为(85±38)、(71±19)、(167±97);(78±28)、(61±15)、(139±72) pg/mL均显著高于对照组(55±19)、(45±14)、(56±38) pg/mL(P均<0.01);毛细支气管炎组sTRAILR1的蛋白浓度显著高于急性上呼吸道感染组(P<0.05),两组sTRAIL和sTRAILR4的蛋白浓度相比差异无统计学意义(P均>0.05)。sTRAILR1分别与sTRAIL、sTRAILR4的蛋白浓度呈显著正相关(n=102,r分别为0.236和0.409,P均<0.01)。 【结论】 毛细支气管炎和急性上呼吸道感染患儿血清中可溶性TRAIL及其受体TRAILR1和TRAILR4的表达增加,它们可能参与了呼吸道感染的炎症过程,TRAIL可能主要通过TRAILR1起作用,它们的表达水平增高可能被视为病情活动的指标之一。     

呼吸道感染患儿血清Toll样受体、Dectin及CD14测定临床意义

机体免疫系统对感染的识别及应答依赖于模式识别受体,Toll样受体（TLR）被认为是最主要的模式识别受体,参与感染、哮喘、肿瘤等疾病的炎症过程。最近研究发现TLR2、6与Dectin、膜蛋白细胞分化抗原14（CDl4）等模式识别受体具有协同作用,共同对微生物和外源性分子等产生免疫应答,它们通过髓样分化因子（MyD88）／NF—κB途经产生TNFα、     

Smad2／3和Smad7蛋白在血中性粒细胞中的表达与哮喘发病关系的实验性研究

目的：观察Smad2／3和Smad7蛋白在大鼠哮喘血中性粒细胞（PMN）中的表达,探讨PMN能否通过Smads体系参与哮喘气道炎症的发病过程。方法：卵白蛋白（OVA）诱导大鼠哮喘模型,20只SD大鼠随机分成哮喘组和正常对照组,分离纯化血PMN,免疫细胞化学法检测PMNSmad2／3和Smad7蛋白的表达水平。结果：哮喘组（0．142±0．021,OD值）Smad2／3蛋白的表达水平显著高于正常对照组（0．081±0．011,OD值）（P〈0．01）,而哮喘组（0．125±0．024,OD值）Smad7蛋白的表达水平显著低于正常对照组（0．257±0．047,OD值）（P〈0．01）。两者的表达呈显著负井目关（n=19,r=-0．891,P〈0．01）。结论：Smads体系在哮喘时处于失衡状态,受体调节型Smad占优势。哮喘时PMN合成Sinad2／3和Smad7蛋白的功能增加,PMN可能部分通过Smads体系参与哮喘的气道炎症过程。     

生长相关癌基因α在哮喘大鼠中的表达意义

目的 观察哮喘大鼠生长相关癌基因α(GROα)蛋白的表达水平及布地奈德对其的影响,探讨GROα和中性粒细胞(PMN)的相关性.方法 采用哮喘大鼠模型,将30只SD大鼠随机分成哮喘组、布地奈德治疗组、正常对照组,分离纯化血PMN,应用免疫组化法测定支气管壁和血PMN中GROα蛋白的表达水平,计数肺组织PMN数目.结果 与对照组相比,哮喘组和治疗组的GROα蛋白的平均光密度值(OD值)在支气管壁(依次为0.138±0.009、0.114±0.007、0.077±0.010)和血PMN(依次为0.211±0.017,0.136±0.010,0.081±0.008)中差异均有统计学意义(P均<0.01);与哮喘组相比,治疗组的GROα蛋白的平均光密度值在支气管壁和血PMN中差异均有统计学意义(P均<0.01).三组PMN计数(对照组6.70±2.41,哮喘组26.00±6.54,治疗组196.80±25.73)两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05).GROα蛋白的表达水平与肺组织PMN计数在哮喘组和对照组之间呈显著正相关(n=19,r=0.865,P<0.01).结论 哮喘时支气管壁和PMN的GROα蛋白的表达水平及肺组纵PMN计数增加,它们参与了哮喘发病的炎症过程;布地奈德部分通过抑制GROα蛋白的表达从而减轻气道炎症,但能加剧PMN住肺组织中聚集;GROα蛋白可能与PMN在肺组织中聚集密切相关.