平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒哮喘小鼠NF-κB、TGF-β影响的研究

目的:观察平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒(RSV)感染引起BALB/c小鼠哮喘模型肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)含量的影响,探讨其治疗哮喘发作的作用机制。方法:72只BALB/c小鼠随机分成6组,随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组、平喘Ⅰ号低、中、高剂量组,每组12只。予RSV致敏,除正常对照组和模型对照组用等量生理盐水外,其余各组用相应药物干预。末次激发48h后取肺组织病理切片采用免疫组化法测定各组NF-κB和TGF-β含量。结果:与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠肺组织中NF-κB、TGF-β含量明显增高(P0.01)。与模型对照组比较,平喘Ⅰ号各剂量组和地塞米松组均可降低哮喘小鼠肺组织中NF-κB和TGF-β水平(P0.01或P0.05),其中平喘Ⅰ号高剂量组与地塞米松组水平接近。结论:平喘Ⅰ号能降低哮喘小鼠肺组织中NF-κB、TGF-β含量,并具有量效关系。由此推测,通过降低肺组织中NF-κB和TGF-β水平,从而减轻气道炎症反应和气道组织的重构,是平喘Ⅰ号治疗哮喘的作用机制之一。支气管哮喘(简称哮喘)是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞等)和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病。本病反复发作,可产生气道不可逆性狭窄和气道重塑,致使病情缠绵难愈。平喘Ⅰ号是治疗哮喘急性发作的经验方,经过长期的临床治疗和观察,证实对小儿哮喘发作有良好的治疗作用。本研究的主要目的是观察哮喘小鼠肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β(TGF-β)的含量变化,探讨平喘Ⅰ号治疗哮喘的可能作用机理。     

贝类中诺如病毒检测方法的优化

目的优化贝类中GⅡ型诺如病毒(No V GⅡ)的检测方法。方法用No V GⅡ人工染毒贝类样本,分别比较曲通X-100缓冲液(KNT)、Tris/甘氨酸/牛肉膏(TGBE)缓冲液、甘氨酸缓冲液、脱脂牛奶、磷酸盐缓冲液(PBS)、PBS-吐温80缓冲液和大豆蛋白缓冲液的洗脱效果以及PEG沉淀法、超滤法和膜吸附法3种浓缩方法的回收效果,并采用实时荧光RT-PCR方法进行检测,最后运用优化后的方法对诺如病毒污染的贝类各组织的病毒含量进行检测,以确定最佳检测部位。结果实时荧光RT-PCR结果表明,人工染毒后的贝类样品采用KNT缓冲液洗脱,再用PEG沉淀法浓缩,回收率最好,达18.95%;诺如病毒在贝类中的分布主要集中于进出水口、鳃和消化腺。结论贝类海产品中诺如病毒的检测建议取贝类的进出水口、鳃和消化腺,用KNT缓冲液洗脱、PEG沉淀法浓缩,实时荧光RT-PCR进行检测,以提高检测率。     

嗜肺军团菌核酸等温扩增快速检测技术研究

目的建立一种嗜肺军团菌的核酸等温扩增试纸条及pH显色快速检测方法,从而实现对空调冷却水样中嗜肺军团菌的快速现场检测。方法基于嗜肺军团菌特异性mip基因设计引物,建立环介导等温扩增体系,并结合反应产物横向流动试纸条和pH显色检测技术,进而验证方法的灵敏性、特异性,并对浙江省不同地区的中央空调冷却水水样进行检测。结果环介导的等温扩增试纸条及pH显色检测方法灵敏度可高达3 cfu/μl,特异性好,且检测时间仅需40 min左右。检测的灵敏度与荧光定量PCR的方法基本一致,对外环境空调冷却水的检测阳性率与荧光定量也相符。结论建立的嗜肺军团菌试纸条与pH显色快速检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。     

加味桃红四物汤治疗白癜风的临床及实验室研究

目的 观察加味桃红四物汤治疗白癜风的效果并探讨其作用机制。方法 白癜风患者243例，用加味桃红四物汤口服液，每次10mL，3次／d，口服。体外培养的正常人黑素细胞以含药血清作用后测定细胞酪氨酸酶活性、黑素含量和细胞增殖。结果 临床观察显示243例白癜风患者服用加味桃红四物汤后，治愈26例(10．7％)，显效66例(27．2％)，有效76例(31．3％)，无效75例(30．8％)；实验结果显示加味桃红四物汤的含药血清能上调酪氨酸酶活性，提高黑素含量，促进黑素细胞增殖。结论加味桃红四物汤治疗白癜风有明显疗效，其作用可能与刺激黑素细胞黑素合成、上调酪氨酸酶活性、促进细胞增殖有关。     

钩端螺旋体脂多糖对小鼠成纤维细胞和豚鼠脏器组织的侵入及损害

应用免疫胶金技术证实钩端螺旋体脂多糖（Ｌ－ＬＰＳ）作用于体外培养的小鼠成纤维细胞后５ｍｉｎ即能侵入胞浆,３０ｍｉｎ后可在细胞核中检出Ｌ．一！Ｉ５。钩端螺旋体实验感染的豚鼠各内脏组织的细胞间隙、胞浆及核等内均存在１．一！,ＰＳ,尤以肾和肺脏检出阳性率较高。Ｌ－ＬＰＳ检测阳性的小鼠成纤维细胞和感染豚鼠内脏组织细胞均出现相似的超微结构病变,如内质网扩张、膜旁核糖体脱落、线粒体嵴或外膜消失等。实验结果表明Ｌ－ＬＰＳ是钩端螺旋体主要致病物质之一。     

姜黄素经红曲霉菌发酵后对高脂血症小鼠脂代谢的影响

目的:利用红曲霉菌对姜黄素进行发酵,研究发酵后姜黄素对高脂血症小鼠脂代谢的影响.方法:选择本实验室保存的不产洛伐他汀的红曲霉菌,制成适量的孢子悬液,加入到装有1%姜黄素的发酵培养基中,恒温培养进行姜黄素的发酵.设只含1%姜黄素而不接种菌株的底物对照,考察转化液中是否存在非微生物引起的药物分解产物;设不含姜黄素的菌株对照,排除菌株的发酵产物和培养基残留成分的干扰.昆明种小鼠喂饲高脂饲料15d形成高脂血症模型,以高、中、低剂量(质量浓度分别为500、200、100 mg/kg)的发酵姜黄素灌胃;设底物对照和菌体对照治疗组(500 mg/kg);模型组、正常组等容积生理盐水灌胃.治疗10 d后禁食12 h,摘眼球取血,酶法测定TC、TG、HDL-C;取肝脏匀浆后,提取上清液,测定TC、TG、HDL-C.结果:发酵后姜黄素高、中、低剂量治疗均能显著减低高脂血症小鼠血清TC、TG,血清TC降低幅度分别为38.7%、34.5%、32.7%,TG降低幅度分别为38.3%、28.6%、30.1%,而底物对照组和菌体对照组的治疗效果不明显.发酵后姜黄素亦能降低高脂血症小鼠肝脏TC、TG,且同等质量浓度的底物姜黄素疗效不明显.结论:姜黄素发酵后能显著提高高脂血症小鼠的血脂调节能力.     

商陆提取物抑菌活性评价研究

目的:探讨商陆的有效抑菌活性成分。方法:采用琼脂扩散法测定不同商陆提取物对临床常见的15株病原菌的抑菌圈;采用液体稀释法测定最小抑菌浓度。结果:商陆不同粗提物对病原菌有不同程度的抑制作用,商陆水煎液仅对不动杆菌、白假丝酵母、新生隐球菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度分别为500.0,500.0,62.5mg.mL-1,抑菌作用不明显;多糖提取物仅对产气荚膜梭菌、痢疾志贺菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度为60.0,7.5mg.mL-1;商陆皂苷30%乙醇提取物抑菌效果较明显、抗菌谱较广,对产气荚膜梭菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、志贺菌、甲型副伤寒菌、枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌、白假丝酵母均有抑菌作用,最小抑菌浓度范围为17.6～70.0mg.mL-1;商陆皂苷60%和90%乙醇提取物无抑菌活性。结论:商陆抑菌活性主要有效部位为极性较大的皂苷类提取物。     

平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒哮喘小鼠IL-10、IL-12的影响

[目的]观察平喘Ⅰ号对呼吸道合胞病毒（RSV）感染引起BALB/c小鼠哮喘模型血清中细胞因子IL-10、IL-12水平的影响及其抑制气道炎症反应的作用,探讨平喘Ⅰ号治疗哮喘发作的作用机制。[方法]70只BALB/c小鼠随机分成7组,正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、急支糖浆组、平喘Ⅰ号低、中、高剂量组,每组10只。予RSV致敏,除正常对照组和模型对照组用等量生理盐水外,其余各组用相应药物干预。末次激发48h后取肺部标本行常规病理观察,并取血清采用ELISA法测定各组IL-10、IL-12的表达水平。[结果]平喘I号各剂量组较利巴韦林组和急支糖浆组IL-10、IL-12表达水平均有明显升高（P〈0.05）。其中以平喘I号高剂量组升高最为突出。高剂量组较中剂量组和低剂量组对IL-10和IL-12的调节作用更为显著（P〈0.01）。同时,平喘Ⅰ号能明显减少气道浆细胞和嗜酸性粒细胞（EOS）等炎症细胞的浸润。[结论]平喘Ⅰ号能提高哮喘小鼠IL-10、IL-12的表达,抑制支气管哮喘气道炎症,并具有量效关系,由此推测,这种对抗炎因子表达的正性作用是治疗哮喘的作用机制之一。     

浙江产蜡梅叶水提物急性毒性研究

目的:研究浙江产蜡梅嫩叶沸水浸提物的急性毒性及蜡梅叶生物碱的分析.方法:ICR小鼠随机分组,按0.3mL/10g体重的灌胃量1次灌胃测定蜡梅叶水提物的LD50,按0.4mL/10g体重的灌胃量灌胃1日6h内2次,观察14天内动物反应及死亡情况测定最大耐受剂量.用酸溶碱沉法提取总生物碱,碘化铋钾试剂检查法确证,总生物碱干燥后称重计算得率.结果:0.3mL/kg体重灌胃量不能测出浙江产蜡梅嫩叶沸水浸提物的LD50,测得其最大耐受剂量为80g/kg体重.经分析浙江产蜡梅叶含有生物碱,得率为0.0048%.结论:浙江产蜡梅嫩叶沸水浸提物具有较高的安全性,可以直接饮用.