LPS和TNF-α对血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的：研究细菌脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）对牛肺动脉内皮细胞（BPAEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C Kinase Substrate，SSeCKS）表达的影响和对细胞骨架结构的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法：应用LPS、TNF-α刺激体外培养的BPAEC，应用原位杂交、免疫印迹方法检测不同刺激条件下BPAEC中SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；免疫细胞荧光法观察LPS、TNF-α对内皮细胞中SSeCKS与纤维状肌动蛋白（F-actin）定位和结构的影响。结果：静息状态的BPAEC表达极少量的SSeCKS；经LPS刺激后，SSeCKS表达没有明显变化；而TNF-α以浓度和时间依赖的方式诱导内皮细胞SSeCKS表达增加；LPS和TNF-α刺激后，F-actin发生重构，且SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足聚集；蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro-31．8220抑制LPS和TNF-α对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论：TNF-α能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加，PKC参与LPS、TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构和SSeCKS重新分布。提示SSeCKS可能与LPS和TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

大鼠坐骨神经损伤后Src抑制的蛋白激酶C的底物在背根神经节中的表达变化

目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在背根神经节(DRG)中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经夹伤及切断模型。通过Western印迹法、Real-time PCR及免疫组织化学方法检测坐骨神经损伤后SSeCKS在DRG中表达的时空变化。结果:大鼠坐骨神经夹伤后6h,DRG中可检测到SSeCKS的表达并逐步升高,伤后12h达到高峰,2d后逐渐下降;而大鼠坐骨神经切断后DRG中SSeCKS的表达高峰发生在伤后2周,1d时最低;SSeCKS主要分布于DRG大、中、小神经元胞质;SSeCKS与NeuN、NF200以及GAP43存在共定位。结论:大鼠坐骨神经损伤后,引起DRG中SSeCKS的表达变化,其可能参与疼痛信号转导通路并与周围神经损伤后的再生有关。     

口腔不洁容易患结肠癌

口腔感染与肠癌似乎风马牛不相及,然而,美国最新的研究发现,它们之间竟然存在着关联.美国＂健康日＂网站8月14日报道,美国《细胞宿主与微生物》杂志最新刊登一项新研究发现,一种常见口腔细菌感染会导致结肠癌.美国凯斯西储大学牙科学院科学家最新研究发现,＂细梭菌属细菌＂（牙病患者口腔中此类细菌水平相对更高）,可以附着于结肠细胞,诱发并导致结肠癌的一系列变化,并能加快肿瘤细胞的聚集.     

p27kip1和Skp2在大鼠坐骨神经切断后脊髓中的表达

目的 观察坐骨神经切断后大鼠脊髓中p27^kip1和Skp2的表达变化。方法 将成年SD大鼠随机分为正常对照组和实验组。对实验组实行坐骨神经切断术。用Western blot和免疫组织化学技术检测脊髓中p27^kip1和Skp2的表达变化。结果 Western blot结果表明坐骨神经切断后脊髓中p27^kip1表达持续下降，Skp2表达上调。免疫组织化学结合免疫荧光双标技术显示，在正常组和实验组，p27^kip1和Skp2在脊髓神经元和胶质细胞均有表达。在腹角神经元，损伤后p27^kip1 免疫染色减弱，Skp2增强。坐骨神经损伤前后脊髓腹角p27^kip1和Skp2阳性细胞数目改变呈负相关（r=-0．6892，P〈0．01）。结论 坐骨神经损伤可影响脊髓中p27^kip1和Skp2的表达水平及亚细胞定位，两者改变呈负相关。     

Src抑制的蛋白激酶C的底物在脑组织中的表达

目的:探讨大鼠发育过程中,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及意义。方法:通过Western blot,免疫组织化学法检测SSeCKS在脑组织中表达的时空变化及细胞定位。结果:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在明显的表达变化,在胎鼠和生后早期的SD大鼠中表达水平较高,尤以生后1周明显,成年以后显著降低,4周时最低。脑分区检测显示端脑、海马和间脑符合全脑检测结果。DAB显色示SSeCKS在脑组织中呈点状散在分布,免疫荧光双标记示SSeCKS与星形胶质细胞有部分共定位,与神经元无明显共定位。结论:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在时空变化,并且主要定位于星形胶质细胞。提示SSeCKS可能通过参与细胞骨架的调节和信号通路的活化影响大鼠胚胎发育过程中星形胶质细胞指导的神经元的迁移和轴突的生长。     

大鼠脑损伤后SSeCKS的表达变化

目的:探讨大鼠脑损伤后,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠脑损伤模型。通过Western blot和RT-PCR方法检测脑损伤后SSeCKS表达的时相变化,免疫组织化学方法检测SSeCKS在脑组织中的细胞定位。结果:Western blot显示,大鼠脑损伤后,SSeCKS的表达逐步降低,伤后3d降至最低点,之后逐渐上升,7d达到高峰,14d后趋于平稳;RT-PCR的结果与Western blot一致。免疫荧光双标记结果显示SSeCKS与星形胶质细胞的标记物GFAP、神经元的标记物NeuN共定位。结论:大鼠脑损伤可以改变SSeCKS的表达,这种改变可能参与脑损伤后星型胶质细胞的活化和增殖过程,并与神经元的凋亡、轴突再生有关。     

SSeCKS对牛肺动脉内皮细胞黏附和迁移的影响

目的： 研究SSeCKS在细胞外基质成份诱导内皮细胞黏附和迁移中的作用。方法： 用纤黏连蛋白(FN)诱导内皮细胞，以Western blotting分析SSeCKS表达量的变化；用Ro31-8220、calphostin C（蛋白激酶C抑制剂）预处理内皮细胞，观察对细胞黏附和迁移的影响，以共聚焦显微镜观察其对SSeCKS、F-actin和vinculin在细胞定位的影响。结果： FN能够显著诱导内皮细胞黏附和迁移，SSeCKS的表达量也随之增加，具有时间和剂量依赖性；经Ro31-8220、calphostin C处理细胞后，SSeCKS表达量明显减少，细胞黏附率和迁移细胞数也较处理前显著减少，SSeCKS由细胞质散在分布向核周聚集，且SSeCKS与F-actin、vinculin在细胞边缘共定位比处理前减少。结论： SSeCKS参与细胞外基质诱导内皮细胞黏附和迁移的过程，由其介导的PKC信号转导促进了这一过程，蛋白激酶C抑制剂可有效抑制此过程。     

沉默EMS1/cortactin基因对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭和细胞周期的影响

目的研究原发性肝癌(HCC)Hep G2细胞中EMS1/cortactin的表达与定位,探讨其功能特性。方法 RTq PCR、免疫荧光法检测EMS1基因和cortactin(EMS1编码蛋白)表达,共聚焦显微镜观察cortactin定位,并以人正常肝细胞L02为对照。将靶向EMS1的质粒EMS1-shRNA转染Hep G2,并以CCK8法、流式细胞周期检测、划痕和Transwell小室实验检测细胞增殖、周期、迁移和侵袭能力。结果 Hep G2中EMS1 mRNA水平为LO2的10.5倍;cortactin在Hep G2中高表达,并聚集于细胞膜下皮质区,L02中cortactin弥散分布在胞质中。与未处理组相比,转染EMS1-shRNA组Hep G2中EMS1 mRNA水平下降68.00%,cortactin水平下降52.80%,细胞增殖能力下降9.50%,S期比例下降37.89%,迁移能力下降45.40%,侵袭能力下降64.91%(均P0.05)。结论 EMS1/cortactin主要与Hep G2细胞迁移和侵袭相关。