PTEN 表达载体的构建及转染食管鳞癌细胞系EC9706

 目的 筛选稳定表达野生型PTEN基因的食管鳞癌细胞株EC9706。方法 提取胎盘总RNA，设计引物，PCR扩增人野生型PTEN基因，经测序鉴定后，连接于pcDNA3．1（＋）真核表达载体，构建pcDNA3．1-PTEN，用脂质体介导的方法将其转染EC9706。而后加抗生素G418筛选稳定表达株，用RT-PCR方法检测稳定表达株PTEN基因的mRNA水平，通过绘制生长曲线观察细胞生长情况。结果 PCR产物的电泳结果显示，在1500bp左右有一明显亮带，测序结果与GenBank上PTEN序列完全一致；稳定表达PTEN基因的细胞株RT-PCR结果显示，PTEN的mRNA水平比对照细胞株相比明显升高；生长曲线结果显示，转染后的细胞生长速度明显减慢。结论 所扩基因为野生型PTEN基因，所构建的载体为野生型PTEN基因真核表达载体，并筛选出PTEN基因稳定表达的食管鳞癌细胞株。     

食管鳞癌细胞中NF-κB与IκBα的mRNA、蛋白表达

目的：核转录因子NF—kappaB（NF—κB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究通过检测食管鳞癌细胞中NF—κB与IκBαmRNA、蛋白的表达及NF—κB的DNA结合活性．分析NF—κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其在食管鳞癌细胞的生存及转化中的作用。方法：采用Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞胞质中NF—κB亚单位p50和p65、阻遏物IKBα及其磷酸化IKBα的蛋白表达．检测细胞核中p50和p65的蛋白表达并采用EMSA法检测其与DNA的结合活性。使用RT-PCR法检测p50、p65、IκBαmRNA的表达：结果：NF—κB的亚单位p50、p65、IκBα及磷酸化IκBα在食管鳞癌细胞质中均表达．p50、p65蛋白在细胞核中也表达并具有较高的DNA结合活性.RT-PCR结果表明．p50、p65、IκBα的mRNA在细胞中也存在过表达。结论：本研究发现NF—κ在两株食管鳞癌细胞系中被激活，基因的过表达及IκBα的磷酸化在维持NF—κB的活化中起着重要的作用．     

NF-kB信号通路在食管鳞癌细胞系中的激活

目的核转录因子NF-kappaB（NF-kB）是一种重要的转录因子，参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究拟通过检测NF-kB信号通路在食管鳞癌细胞系中是否存在，分析NF-kB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其对食管鳞癌细胞的生存及转化作用。方法采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中NF-kB亚单位p50和p65，阻遏物IKBα及其上游激酶IKKβ的蛋白表达。并采用EMSA法检测两株食管鳞癌细胞核中NP-kB与DNA的结合活性。结果食管鳞癌细胞中存在激活的NF-kB信号通路，p50、p65、IkBα及其上游激酶IKKβ的蛋白在细胞质中均表达，并且p50／p65在细胞核中具有较高的DNA结合活性。结论本研究发现NF-kB信号通路在两种食管鳞癌细胞系被激活，提示激活的NF-kB信号通路可能在食管鳞癌发生中起重要作用。     

伴后巩膜葡萄肿的高度近视白内障患者人工晶状体屈光度测算

背景 白内障术前人工晶状体(IOL)屈光度的准确测算是术后恢复良好视功能的关键,尤其是对伴后巩膜葡萄肿的高度近视白内障患者. 目的 对比分析IOL Master和接触式A型超声两种生物测量方法测算的伴后巩膜葡萄肿的高度近视白内障患者IOL屈光度结果,并对比不同IOL屈光度计算公式的准确性.方法 收集2008年8月至2009年2月在天津医科大学眼科医院行白内障超声乳化联合IOL植入术伴后巩膜葡萄肿的高度近视患者28例41眼,术前分别用IOL Master和接触式A型超声联合手动角膜曲率计测量患眼的生物参数,并根据SRK-Ⅱ、SRK-T、Haigis、Hoffer Q、Holladay 1公式分别计算IOL Master和接触式A型超声联合手动角膜曲率计测量的IOL屈光度的结果,术后3个月检查患者的屈光状态,评价预测的精确性.结果 IOL Master和接触式A型超声测得的眼轴长度分别为(28.93=2.4) mm和(28.7±2.4) mm,前房深度分别为(3.3±0.4) mm和(2.9±0.6) mm,差异均有统计学意义(P=0.005、0.000),而IOL Master与手动角膜曲率计测得的角膜曲率分别为(44.7±1.7)D和(44.7±1.6)D,差异无统计学意义(P=0.398).应用IOL Master生物测量方法时,SRK/T、Haigis公式较准确;应用接触式A型超声联合手动角膜曲率计生物测量方法时,Holladay 1、Hoffer Q、Haigis公式较准确,平均绝对屈光误差(MAE)较为接近. 结论 对于伴后巩膜葡萄肿的高度近视白内障患者,应用IOL Master生物测量方法推荐使用SRK/T、Haigis公式;应用接触式A型超声联合手动角膜曲率计生物测量方法推荐使用Holladay 1、Hoffer Q、Haigis公式.     

乙酸阴道热敏凝胶剂在家兔阴道内的药动学

目的研究乙酸阴道热敏凝胶剂经阴道给药后药物在家兔阴道内的药代动力学特征,探索适合阴道用药的新剂型。方法 3 ml含乙酸36.23 mg的乙酸阴道热敏凝胶剂推入家兔阴道内,给药后0.25,0.5,1,1.5,2,4,8,12,16,20和24 h,对家兔阴道进行灌洗并测定灌洗液中乙酸的含量、用微电极插入阴道测定阴道pH值、取阴道组织匀浆后测定组织中乙酸含量。采用非线性最小二乘法进行计算机拟合获得药动学参数。结果乙酸阴道热敏凝胶剂置入家兔阴道后,阴道pH值由给药前中性(pH 6.67)转变为酸性(pH 3.56),阴道pH 3.5～4.0可保持约6 h;pH 3.5～4.5可保持约12 h;pH 3.5～5.0可保持19 h;给药后24 h,pH值为5.32±0.24,乙酸含量为(0.38±0.15)g.L-1,为给药量的11%。阴道组织中乙酸浓度峰值为600μg.g-1,达峰时间为2 h,平均保留时间为7.73 h,药物动力学参数符合二室模型。结论乙酸阴道热敏凝胶剂符合阴道用药的要求。     

糖尿病肾病患者血液透析的护理

血液透析是终末期糖尿病肾病患者维持生命的一种安全、可靠的肾脏代替疗法之一。终末期糖尿病肾病并发症多,合并小血管病变及脂质代谢紊乱,均对透析效果产生负面影响,透析过程中还易发生低血糖、高血压、低血压等,影响患者的生存质量。同时对于动静脉内瘘的穿刺、护理都带来一定的难度     

玻璃体腔注射熊果酸对小鼠氧诱导视网膜新生血管的抑制作用

背景 视网膜新生血管疾病严重影响视功能,目前虽然有较多的抗新生血管药物,但多针对单一的干预靶点,疗效有限.研究证实,熊果酸具有多种生物学效应,其中包括抗血管新生作用,但其对眼科血管疾病的疗效尚不清楚. 目的 观察熊果酸对小鼠氧诱导视网膜新生血管形成的抑制作用. 方法 采用随机数字表法将7日龄清洁级C57BL/6J小鼠60只随机分为6个组,即空白对照组、PBS对照组、阳性对照组和低、中、高剂量熊果酸组.空白对照组小鼠在正常环境中喂养,其他各组小鼠与哺乳的母鼠置于体积分数(75±2)％的高氧环境中连续饲养5d,小鼠12日龄时将模型小鼠及其哺乳母鼠返回正常空气环境中,以诱导视网膜新生血管产生.造模成功后按照分组不同分别于小鼠玻璃体腔注射无菌PBS 3μl、曲安奈德注射液(1 ml∶40 mg)3μl或1.5、3.0、6.0μg熊果酸各3μl.小鼠17日龄时过量麻醉法处死,摘除双侧眼球制备视网膜组织切片.采用组织病理学方法检查各组小鼠视网膜血管新生情况,计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数目;采用逆转录PCR(RT-PCR)法分别检测和比较各组小鼠视网膜组织中血管内皮生长因子(VEGF) mRNA、环氧合酶-2(COX-2)mRNA及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA的相对表达量. 结果 视网膜切片后苏木精-伊红染色显示,PBS对照组小鼠视网膜中突破内界膜的新生血管内皮细胞核数为(18.65±3.24)个/视野,明显高于空白对照组的(0.78±0.11)个/视野,差异有统计学意义(t=2.24,P＜0.05);中剂量熊果酸组、高剂量熊果酸组小鼠视网膜突破内界膜的新生血管内皮细胞核数分别为(13.32±1.87)个/视野和(8.93±1.09)个/视野,明显少于PBS对照组和低剂量熊果酸组的(18.65±3.24)个/视野和(15.44±2.02)个/视野,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而高剂量熊果酸组小鼠视网膜突破内界膜的新生血管内皮细胞核数与阳性对照组的(9.14±1.13)个/视野接近,差异无统计学意义(t=1.17,P＞0.05).RT-PCR检测表明,PBS对照组小鼠视网膜组织中COX-2 mRNA、VEGF mRNA和MMP-2 mRNA相对表达量均明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(t=13.45、12.49、14.32,均P＜0.05),且高剂量熊果酸组小鼠视网膜组织中COX-2mRNA、VEGF mRNA和MMP-2 mRNA相对表达量均明显低于PBS对照组和低剂量熊果酸组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而高剂量熊果酸组与阳性对照组间的差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 熊果酸以剂量依赖的方式下调氧诱导的缺血小鼠视网膜组织中VEGF、COX-2及MMP-2的表达,从而抑制视网膜新生血管的产生.     

海军部队医院建设与管理的几点思考

师医院(通常称部队医院)是直接为部队服务的重要卫生力量,是卫生保障的前沿。我军卫生工作方针、政策在基层的贯彻落实,很大程度在要靠它们实行面对面的卫勤保障得以实现。在整个分级救治链中,部队医院处于     

老年慢性肺炎护理分析

目的：研究探讨老年慢性肺炎的临床护理效果。方法随机抽取我院2011年4月—2013年4月收治的老年慢性肺炎患者100例作为研究对象。并将其随机分成对照组和观察组,每组患者分别为50例。观察组患者采用人性化护理措施,对照组患者实施常规护理措施,比较两组患者在相应的护理措施下的治疗效果。结果护理结果显示,观察组话患者护理有效率先后组高于对照组患者。观察组患者护理有效率为88%,对照组话患者护理有效率为72%,数据符合统计学差异( P<0.05)。结论老年慢性肺炎在临床上具有非典型性,发病较为隐匿,患者在患有慢性肺炎期间合并慢性并发症与基础型疾病较多,患者肺部体征均无明显地特征。治疗老年慢性肺炎应趁早诊断,及时治疗。在患者治疗期间实施相应的护理措施有助于患者的康复,提高老年患者的生活质量。     

双能x线骨密度测定在全髋关节置换术后的应用进展

随着社会老龄化及其他原因,老年患者行全髋关节置换术（total hip replacement,THR）日益增多。假体松动是影响THR远期疗效的主要并发症,由应力遮挡和磨损微粒引起的骨吸收、骨溶解与这一并发症相关。