志贺毒素B(ShT-B)亚单位在两种表达载体中表达形式的分析

用KpnⅠ和HindⅢ双酶切pGEM -TB3 克隆质粒 ,得到为大小约为 2 2 5bp的ShT -B基因片段 ,分别将其插入到经双酶切的 pQE4 0和 pQE30表达载体中 ,构建了两个ShT -B的重组表达质粒pQE4 0 -B3 和 pQE30 -B2 ,分别转化到E .coliM15。经IPTG诱导后 ,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中 ,pQE4 0 -B3 和pQE30 -B2 ,分别化到E .coliM 15 ,经IPTG诱导后 ,重组质粒目的蛋白均得到表达。其中 ,pQE4 0 -B3 表达蛋白约占菌体总蛋白的 37% ,主要为包涵体形式。pQE30 -B2 表达蛋白约占菌体总蛋白的 16 % ,主要为可溶性形式 ,约 9 2 %。为重组抗原的制备提供了必要的物质基础。     

PCR结合长臂光敏生物素探针检测粪便中志贺氏菌

本文报告了聚合酶链反应(PCR)结合长臂光敏生物素探针检测出腹泻病患者粪便中志贺氏菌。选择志贺氏菌和侵袭性大肠杆菌(EIEC)共有的DNA序列;质粒编码的侵袭相关焦点(ial)作为靶序列,PCR检测9株志贺氏菌,均扩增出320bp DNA片段,。19株非志贺氏菌均阴性。敏感试验显示其最小检菌量为100 cfu。58份粪际本中,23份阳性(39.6％),粪培养18份阳性(31％)。PCR敏感性高于粪培养8.6％。用长臂光敏生物素标记福氏2a扩     

PCR在沙门氏菌肠炎快速诊断中的应用

选择沙门氏菌共同的侵袭基因(invA)作为靶序列,用聚合酶链反应(PCR)直接检测腹泻病粪便中沙门氏菌。PCR检测10株沙门氏菌,均扩增出invA基因中284bp DNA片段,20株非沙门氏菌均阴性。敏感试验显示,其最小检菌量为8个细菌/ml,DNA最小检出量为100fg。PCR检测84份腹泻粪标本,13份阳性,其中10份粪培养阳性,3份粪培养阴性。     

3种MALDI⁃TOF MS微生物鉴定系统的比较研究

目的 比较基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的3个微生物鉴定系统[法国生物梅里埃公司的VITEK MS(包括IVD和RUO)、德国布鲁克公司的Biotyper和国内融智生物科技公司的QuanID]对各种致病微生物的鉴定效果.方法 采用直涂法对33个属75个种共121株常见致病微生物菌株进行鉴定...     

我国主要沿海地区O1群霍乱弧菌分子分型特征分析

目的 采用MLST方法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术研究我国主要沿海地区192株O1群霍乱弧菌的种群结构、进化趋势及流行特性.方法...     

正常下颌骨放射性核素骨显像特征分析

目的 探讨下颌骨不同部位的放射性核素骨显像生长发育特征.方法 测量39例正常人下颌骨不同部位的放射性计数.将39例正常人分成3个年龄组A组：年龄＜18岁,11例;B组：年龄18～20岁,8例;C组：年龄＞20岁,20例,比较下颌骨髁突、下颌骨升支、下颌体不同部位的99mTc-MDP吸收比值和99mTc-MDP摄入量的差异值.结果 39例正常人的下颌骨髁突、下颌骨升支、下颌体99mTc-MDP吸收比值左右两侧无统计学差异（P＞0.05）.下颌骨髁突、下颌骨升支、下颌体99mTc-MDP摄入量差异值均＜10％.三组的下颌骨骨髁突部位99mTc-MDP吸收比值分别为（1.15±0.27）、（1.39±0.35）;（0.97±0.37）、（1.16±0.27）;（0.69±0.36）、（0.75±0.27）.A组的下颌骨髁突部位99mTc-MDP吸收比值明显高于B组和C组的数值,差异有统计学意义（P＜0.05）.三组中下颌骨髁突处99mTc-MDP吸收比值最高,与下颌骨升支、下颌体99mTc-MDP吸收比值差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 生长发育期下颌骨髁状突、升支、体部的生长活性随年龄的增长逐渐递减,其变化以髁状突最为显著.放射性核素骨扫描能够评价下颌骨的生长活性特点,对下颌骨疾病的诊断和治疗具有积极的指导意义.     

利用groupⅡ intron构建产气荚膜梭菌突变体

目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼脂培养基和脑心浸液培养基（4%卵黄）平板上的形态变化,进行阳性筛选。蛋白质免疫印迹分析α毒素蛋白活性。结果 PCR检测到α毒素突变体的plc基因中,存在Mobile groupⅡintron片段,并且观察到该菌在哥伦比亚鲜血琼脂平板培养基上的α毒素溶血环消失,在脑心浸液培养基（4%卵黄）平板上无白晕。蛋白质免疫印迹分析表明,plc突变体不表达α毒素蛋白。结论成功构建C.perfringensα毒素突变体,为后期探索C.perfringens口服疫苗打下了重要基础。     

新型隐球菌脑膜炎1例

1 病历简介 患者,女,60岁.2001年4月9日出现右侧上肢不自主震颤,3小时后出现右侧偏瘫,浅昏迷,颈强(++++),克氏征(+),右下肢巴彬斯基(+),腹部扣诊有移动性浊音.腰穿检查:脑脊液压力1.60kPa,脑脊液外观微黄,细胞数108×106,蛋白2.0g/L,糖2.2mmol/L,氯化物90mmol/L.墨汁染色未见新型隐球菌.血氨65mmol/L.腹部超声诊断:肝硬化,腹水.     

甲状腺区畸胎瘤1例

甲状腺区畸胎瘤１例赵彤王景林马去非呼和浩特铁路局中心医院（呼和浩特０１００１０）患者男性，１０岁。出生时颏下即有豆粒大小肿物，无任何症状，现肿物明显增大，影响外观，要求手术而住院。查体：全身浅表淋巴结无肿大，颏下正中可见一约２．０ｃｍ×２．０ｃｍ×１...     

重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)蛋白的表达、纯化与鉴定

目的：克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT／ALC)片段，为BoNT／A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法：以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT／A轻链基因，直接插入pGEM—T载体，测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达栽体pET21a-轻链，转化E.coli BL21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达，用Western印迹鉴定重组：BoNT／A轻链。结果：经PCR获得的：BoNT／A轻链序列与GenBank中的BoNT／A轻链基因序列的一致性达99．9％以上。表达工程菌BL21／pET21a—A LC于37℃：经0.7mmol／LIPm诱导6h，目的蛋白获得高表达，约占菌体总蛋白的23％。经过镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析一步纯化，重组BoNT／A轻链的纯度可达97％以上。Western印迹结果表明，重组BoNT／A轻链与抗天然：BoNT／A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应。结论：成功克隆、表达并纯化了：BoNT／A轻链片段，其抗原性良好。