灵芪蠲肝液治疗慢性病毒性乙型肝炎临床研究

目的:了解灵芪蠲肝液治疗慢性乙型肝炎的临床疗效.方法:60例慢性乙型肝炎轻到重度患者随机分为两组.对照组给予基础保肝治疗;治疗组在对照组基础上加用灵芪蠲肝液.观察两组临床症状及肝功能改善情况.结果:两组患者经治疗后临床症状及ALT、AST、TBIL较治疗前有明显好转(P<0.05).治疗组各项症状改善情况与对照组比较均有显著性差异(P<0.05);治疗组患者ALT、TBIL与对照组比较降低更明显(P<0.05),AST降低无显著性差异.结论:灵芪蠲肝液对慢性乙型肝炎有较好的治疗作用.     

结核菌Mtb8.4基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究

为研究Mtb8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即Mtb8.4基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1(+)组和PBS组。小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。     

反义RNA和反义硫代寡核苷酸抗HBV转基因小鼠病毒疗效的比较

目的　比较人工合成的反义硫代寡核苷酸 (asODN )和反义RNA真核表达质粒 (PCEP4-ac)在乙型肝炎(HBV)病毒转基因小鼠体内的抗病毒作用。　方法　设计合成针对HBV -pre -c/c基因的反义硫代寡核苷酸 5‘ -CAT GCCCCAAAGCCAC -3’。构建HBV -c区反义RNA真核表达质粒 (PCEP4-ac) ,并以半乳糖 -多聚赖氨酸 (Gal15 -PLL)作肝靶向载体。将 2 0只HBV转基因小鼠分为反义寡核苷酸、反义RNA真核质粒表达、生理盐水组。靶向反义硫代寡核苷酸以每只体重 15 0ug剂量 ,反义RNA真核质粒每只 10 0ug剂量 ,尾静脉注射给药 ,对照组用同样体积生理盐水同样方法给药。　结果　注射asODN和PCEP4-aC后 7d血清HBsAg已有所下降 (P <0 .0 5 ) ;14d时显著下降 (P <0 .0 1) ,且血清HBV -DNA转阴率分别为 66.7% ( 4 /6)和 62 .5 % ( 5 /8) ,而生理盐水组无明显变化。　结论　反义硫代寡核苷酸和反义RNA真核表达质粒均能在乙肝转基因小鼠体内抑制HBV复制和表达 ,且两者在抑制作用上无明显差异性。     

含信号肽Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用

目的研究含信号肽MTB8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用。方法雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即含信号肽的MTB8.4(MS)基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1 组和PBS组。ELISA检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,观察小鼠部分肺和脾组织的病变程度;Z-N染色查结核杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用。结果MS基因疫苗能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;免疫组小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。结论结核病MS基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护作用,但尚需进一步提高。     

Notch1在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化中的表达和意义

目的:探讨Notch1蛋白及其mRNA在TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化(KTECT)中的动态表达及意义.方法:以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株( HK-2)为研究对象,实验分为空白对照组及TGF-β1( 10 ng/mL)诱导组.加入TGF-β1作用后分别于12 h、24h、48 h及72 h在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;用细胞免疫组化染色法检测α-平滑肌肌动蛋白( α-SMA)、E-钙黏连素(E-cadherin)和Notch1蛋白表达的变化;用RT-PCR法检测α-SMA mRNA、Ecadherin mRNA和Notch1 mRNA表达的变化.结果:与空白对照组相比较,在加入TGF-β1作用后12 h、24h、48 h及72h,TGF-β1诱导组α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加(P＜0 05);Notch1蛋白及其mRNA在TGF-β1作用后的24h、48h、72 h表达逐渐增加(P＜0.05);E-cadherin蛋白及其mRNA表达在24h、48 h、72 h明显减少(P＜0.05);Notch1蛋白及其mRNA的表达与E-cadherin蛋白及其mRNA的表达呈负相关(r蛋白=-0.937;rmRNA=-0.921;假设检验结果(P＜0.05),与α-SMA蛋白及其mRNA的表达呈正相关(r蛋白=0.958;rmRNA=0.944;假设检验结果(P＜0.05).结论:Notch1极有可能参与了TGF-β1诱导的KTECT.     

rhIL-lra对大鼠实验性肝纤维化的影响

目的 :探讨rhIL -lra对实验性肝纤维化的作用。方法 :rhIL -lra为基因工程产物 ,模型采用CCL4 复合因素制备 ,rhIL -lra组同时肌肉注射rhIL -lra ,另设阳性对照组。结果 :免疫组化证明rhIL -lra可抑制I、Ⅲ型胶原和LN的合成及沉积 ;rhIL -lra治疗组血清纤维化指标PcⅢ、CⅣ、LN及HA含量明显下降。结论 :rhIL -lra具有抗肝纤维化作用。     

促红细胞生成素减轻窒息新生儿血清诱导人肾小管细胞损伤

目的 研究促红细胞生成素（EPO）对新生儿窒息后血清导致人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤的保护作用。方法 以HK-2为研究对象，分为对照、窒息和EPO干预组（每组n=8），以200mL／L窒息血清作为攻击因素，观察各组细胞形态、LDH漏出率和细胞存活[四甲基偶氮唑蓝（MTT）法]变化。结果 与对照组比较，窒息组细胞形态发生改变，LDH漏出率增加，细胞存活减少，差异有显著性（P〈0．05）；而与窒息组比较，除EPO 1 IU／mL组外，EPO组细胞形态明显得到改善，LDH漏出率降低，细胞存活增加，差异具有显著性（P〈0．05），且具有剂量依赖性。结论 EPO有减轻窒息后血清所致HK-2细胞损伤作用。     

新生儿窒息后血清对人肾小管细胞抗Bcl-2蛋白、Bcl-2联接X蛋白表达的影响

目的 探讨窒息后新生儿血清对人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内促凋亡蛋白抗Bcl-2蛋白(BAD)、Bcl-2联接X蛋白(BAX)表达的影响.方法 以人HK-2为研究对象,分为对照、窒息和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组.对照组:每组培养液换成不含窒息血清的DMEM;窒息组:每组培养液换成20 mL/L窒息血清的DMEM窒息培养液;PDTC干预组:每组培养换成20 mL/L窒息血清的DMEM培养液后,加40 μmol/L PDTC.采用免疫组织化学(SP)法检测各组细胞BAD、BAX 水平的表达.采用单因素方差分析进行统计学处理.结果 用HSCORE系数作半定量评分,与对照组BAD、BAX的表达[(1.97±0.26)和(1.77±0.11)]比较,窒息组[(2.73±0.20)和(2.44±0.13)]和PDTC干预组[(2.38±0.13)和(2.17±0.08)]均明显增加,差异具有显著性;但与窒息组比较,PDTC干预组BAD、BAX的表达显著减少,差异有显著性[F(BAD)=28.61,F(BAX)=15.51 Pa<0.01)].结论 新生儿窒息后血清可诱导人HK-2细胞BAD、BAX的表达上调,其胞内信号机制涉及到核因子-κB活化.     

高糖、胰岛素对大鼠肝星状细胞增殖影响

目的 通过观察不同浓度葡萄糖以及定量胰岛素与不同浓度葡萄糖并存时大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响,以进一步探讨糖尿病性肝纤维化的发生机制,为临床糖尿病相关性肝纤维化的发生和防治提供理论和实验依据.方法 将体外培养的大鼠肝星状细胞株以不同浓度葡萄糖及不同浓度葡萄糖加定量胰岛素干预72h,以甘露醇作为高渗透压对照.采用CCK-8法测定各组细胞的吸光度值以明确HSC的增殖数目,3H-胸腺嘧啶掺入法(3H-TDR掺入法)测肝星状细胞DNA的DNA掺入量(Cpm)值以明确HSC的增殖状态.结果 ①HSC吸光度值较正常糖组及高渗透压组显著增加,且呈葡萄糖浓度依赖性增加.②HSC DNA的Cpm值与正常糖组相比显著上升,呈葡萄糖浓度依赖性增加,并且相同糖浓度的加胰岛素糖组显著高于未加胰岛素糖组值(P<0.05).甘露醇组较正常糖组变化不明显,胰岛素甘露醇组Cpm值高于胰岛素正常糖组值.结论 高糖、高胰岛素环境下,HSC被激活、增殖、DNA合成增加,可能是糖尿病肝纤维化的机制之一.     

抑毒调平液对Th1/Th2细胞平衡的调节及其抗乙型肝炎病毒活性的研究

抑毒调平液是从丹参,黄精、贯众、党参、虎杖等中药中提取有效成分精制而成的纯中药制剂。临床应用表明,它对慢性乙型肝炎(CHB)患者具有保肝、降酶、抗纤维化等作用。研究从细胞、分子水平上对其作用及机制进行探讨。