乙型肝炎病毒表面抗原突变体稳定表达细胞系的建立和抗原性鉴定

目的 探讨乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)阴性HBV感染的分子机制。方法 在对46例HBsAg阴性但血清HBVDNA阳性感染者的S基因序列进行分析的基础上，构建了6株新的HBsAg变异株(4株联合点突变株，2株插入变异株)的EBO-plpp真核表达载体，并转染了COS7细胞，建立了这6株HBsAg变异株的稳定表达细胞系。分别用酶联免疫法(ELISA)和放射免疫法(RIA)对细胞表达的HBsAg抗原性进行检测。结果 除1例插入变异株可检测到较弱的阳性外，其余5株均检测不到HBsAg的存在。结论 新发现的HBsAg联合点突变和氨基酸插入变异，均对HBsAg的抗原性有负面的影响，是造成HBsAg阴性HBV感染的直接原因。     

MN/CAⅨ基因在肾癌组织中表达的实验研究

MN/CAⅨ基因在肾癌中有特异性的表达 ,是一种肿瘤相关抗原 (TAA) ,在肿瘤诊断以及生物治疗方面具有潜在的应用前景[1] 。我们采用RT PCR方法检测肾癌组织和正常肾组织中MN/CAⅨmRNA表达 ,探讨MN/CAⅨ基因表达作为肾癌肿瘤标记物的可能性 ,现报告如下。对象与方法　 2 0 0 2～ 2 0 0 3年我科肾癌根治手术标本 2 5例。男 16例 ,女 9例。年龄 2 3～ 6 5岁 ,平均 5 1岁。其中透明细胞癌 17例 ,颗粒细胞癌 8例。正常肾组织 2 1例 ,分别取自肾切除和T1肾癌原发灶远处正常肾组织。男 14例 ,女 7例 ,年龄 2 3～ 6 5岁 ,平均 4 9岁。GeneA…     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性,建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法,为SARS的快速诊断提供依据。方法合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物,从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA,经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段,随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100%),而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNI109与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示,该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus,BCV)和鼠肝炎病毒(murinehepatitisvirus,MHV)同源性最高,在氨基酸水平上同源性高达75%。结论SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNI109的保守性极强,适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

多肿瘤标志物蛋白芯片在胃癌手术前后中的应用价值探讨

作者2003-05～2005—10采用多肿瘤标志物蛋白芯片检测技术，对健康体检者、胃癌患者的12种肿瘤标志物进行检测，旨在探讨蛋白芯片诊断系统在诊断胃癌中的临床应用价值。     

拉米夫定长期维持应答患者血清乙型肝炎表面抗原水平的变化特点

目的 了解拉米夫定长期治疗下血清HBsAg的动态变化特点.方法 研究对象为HBeAg阳性、拉米夫定为初始抗病毒治疗且取得快速和持久(从治疗24周至观察期末HBV DNA持续检测不到)病毒学应答的慢性乙型肝炎患者.血清HBsAg定量检测采用雅培Architect方法,HBV基因型用直接测序法确定.结果 3年观察期间有26例(57.8%)患者发生HBeAg转阴(其中1例HBsAg转阴).治疗12周时血清HBsAg水平中位数降至基线的39.5%(P<0.01),但之后下降不明显.血清HBsAg的变化特征在HBcAg转阴或持续阳性的患者间相似.基因B型患者在治疗头12周血清HBsAg水平下降幅度较基因C型更大(75.5%比26.0%,P<0.05).在个体患者中,血清HBsAg的动态变化类型主要有双相型(治疗12和24周HBsAg低于基线的60%)和稳定型(治疗12和24周HBsAg高于基线的80%).基线血清HBsAg水平低(比数比值为0.020,95%可信区间为0.002~0.743,P<0.05)和基因C型感染(比数比值为8.206,95%可信区间为1.070~62.948,P<0.05)是血清HBsAg在拉米夫定长期治疗下下降不明显的主要因素.结论 血清HBsAg在拉米夫定快速和持久抑制HBV复制时主要表现为两种变化类型,并和HBV基因型关系密切.     

中国乙型肝炎病毒毒株X基因／C基因启动子发现热点变异

目的：HBV／X基因存在调控HBV复制的调节序列．X基因变异将影响这些调节序刊功能，研究中国HBV毒株X基因／C基因启动子(BCP)区变异情况。方法：通过对25例中国HBV毒株BCP区测序．推测中国HBV毒株BCP区第2个AT丰富区的一对点突变，核苷酸(nt)1762碱基由A→T和1764碱基由G→A变异可能为热点变异。在此基础上．进一步设计BCP下游反义链错配引物，将点突变附近的一个碱基(nt1767)由A→T，则正好可在BCP变异株中引进一个BclⅠ(T↑GATCA)酶切位点，结合限制性片段长度多态性分析(RFLP)筛检143例中国人感杂的HBV毒株BCP区变异．并与前C区变异比较。结果：114倒血清HBVDNA阳性慢性HBV感染者．BCP区和(或)前C变异者49倒(43％)．BCP变异者37例(32％)。BCP变异无论在HBeAg阳性或阴性慢性肝炎病例的发生率均显著高于HBV无症状感染者。BCP可与前C终码变异共存或单独出现。结论：在中国HBV毒株BCP区存在热点变异。HBV毒株BCP变异可能影响HBV前C基因组mRNA转录，是HBV感染持续和肝病变进展的原因之一。     

HBeAg阳性和阴性慢性乙型肝炎患者YMDD的变异

目的研究YMDD变异在HBeAg阳性和HBeAg阴性乙型肝炎病毒（HBV）感染者中发生的情况.方法对我科接受拉米夫定治疗的247例慢性乙型肝炎患者进行定期随访,检测肝功能和HBV病毒学指标,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测YMDD变异,利用实时定量PCR检测HBV DNA定量以及利用Abbott试剂检测HBV标志物,对比分析HBeAg阳性和HBeAg阴性患者中YMDD变异的发生情况.结果247例患者中共有42例出现YMDD变异,YMDD变异的累积发生率随着时间的延长逐年增加.与治疗前HBeAg阴性患者相比,治疗前HBeAg阳性患者YMDD变异的发生率明显高于治疗前HBeAg阴性患者.结论HBeAg阳性患者YMDD变异年累积发生率高于HBeAg阴性患者.     

乙型肝炎病毒基因型对拉米夫定治疗早期血清乙型肝炎表面抗原水平变化的影响

目的了解血清乙型肝炎表面抗原（HBsAg）水平在拉米夫定治疗早期的变化特点及乙型肝炎病毒（HBV）基因型在其中的作用。方法乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性且拉米夫定为初始抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者87例,雅培HBsAg Architect方法定量检测治疗基线和第12周血清HBsAg水平;采用聚合酶链反应联合限制性片段长度多态性分析的方法确定HBV基因型。结果所有患者治疗第12周血清HBV DNA水平下降（中位数4．31log10拷贝／ml,P〈0．001）。总的血清HBsAg下降至基线的57．99％（P〈0．001）,但主要发生在HBV基因B型患者（43例,P〈0．001）,在HBV基因C型患者变化不明显（43例,P=0．378）。血清HBsAg和HBV DNA变化（基线和12周）之间的正相关关系仅存在于基因B型（Rs=0．577,P〈0．001）,而在C型患者中不明显（Rs=0．068,P=0．686）。基线HBsAg水平低（比数比值为0．387,95％可信区间为0．188～0．794,P=0．010）和HBV基因C型感染（比数比值为4．083,95％可信区间为1．362～12．236,P=0．012）是导致32．2％（29例）患者血清HBsAg水平未下降的主要因素。结论在拉米夫定治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的早期,超过30％的患者血清HBsAg水平并没有随着HBV DNA复制水平下降而下降,HBV基因C型感染和基线HBsAg水平低是其主要因素。     

回族乙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）分为8种不同的基因型。其型别与患者的病情严重程度及预后等有密切关系，其分布也存在一定的区域及民族差异。为进一步明确回族人群HBV基因型分布情况及其临床意义，进行了此项研究。     

肾癌肿瘤相关抗原G250/MN/CAⅨ基因的克隆、表达及鉴定

目的报道G250/MN/CAⅨ基因的克隆,蛋白表达及鉴定。方法从肾癌组织中提取总RNA,采用RTPCR法扩增G250/MN/CAⅨ全长cDNA,将获得的cDNA片段插入pET22b(+)表达载体,转化BL21大肠杆菌中,以IPTG诱导进行蛋白表达,SDSPAGE凝胶电泳观察结果,实验验证。结果克隆的G250/MN/CAⅨ基因经测序证实序列正确,构建重组质粒pET22b(+)/G250并在原核系统中表达G250/MN/CAⅨ重组蛋白,该蛋白具有较好的抗原性和特异性。结论成功完成G250基因克隆,为在G250蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据。