e抗原阴性重症乙型肝炎患者HBV前C区热点变异研究

目的　研究ＨＢＶ信号肽区热点变异与重症乙型肝炎发生及转归的关系。方法　采用错配聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限 制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析方法检测６８例ＨＢｅＡｇ阴性的重症乙型肝炎病人（其中急性重肝６例、亚急性重肝３８ 例、慢性重肝２４例）及４４例慢性乙型肝炎患者的Ｔ１８６２、Ａ１８９６变异情况。结果　急性重肝的Ａ１８９６、Ｔ１８６２变异分别 为６６．７％（４／６）、０（０／６）;亚急性重肝４２．１％（１６／３８）、１５．８％（６／３８）;慢性重肝 ２５．０％（６／２４）、１６．７％（４／２４）;慢性肝炎 ４５．５％（２０／４４）、２．３％（１／４４）。重症乙型肝炎组与慢性肝炎组比较Ｔ１８６２变异率有显著差异（Ｐ＜０．０１）,Ａ１８９６变异率无显 著差异（Ｐ>０．０５）。结论　提示Ｔ１８６２变异与乙型肝炎的重症化密切相关。而Ａ１８９６变异与乙型肝炎重症化进程是否有 关还不能确定。     

耐拉米夫定乙肝病毒变异株的人工构建及其限制性片段长度多态性分析

目的　建立简便易行的筛检常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株的方法。方法通过PCR定向点突变 ,构建最常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株 (YMDD变异株 ) ,并建立相应的错配PCR结合限制性片段长度多态性分析 (RFLP)检测此变异株。结果PCR成功引入点突变 ,构建了YMDD变异株的克隆 ,同时错配PCR结合限制性片段长度多态性分析可有效区分YMDD变异株和HBV野毒株。结论采用PCR的方法可诱导定向点突变 ,错配PCR结合限制性片段长度多态性分析可用于筛检临床常见的耐拉米夫定乙肝病毒变异株 (YMDD变异株 ) ,为临床监测提供了一种很好的模式。     

错配PCR-RFLP检测乙型肝炎病毒X基因/C基因启动子变异

设计错配PCR-限制性片段长度多态性分析（PCR－RFLP）检测中国HBV每株C基因启动子（BCP）区第2个AT丰富区的一对点突变；核苷酸（nt）1762的碱基由A→T和1764的碱基由G→A变异。结果发现在32例慢性HBV感染者中BCP变异者有10例，总检出率为31．2％．提示在我国HBV毒株BCP区这一联合点突变较常见．PCR－RFLP技术与序列分析结合，对于研究这一新发现的热点变异与临床的关系具有重要的实用价值．     

MXA蛋白抑制HBV复制的体外研究

目的 研究MXA蛋白抑制HBV复制的活性.方法 将pcDNA3.1-MXA重组质粒和PU19-1.24 HBV重组质粒分别按1:1、2:1共转染HepG2细胞(MXA组),对照组使用空pcDNA3.1、Salon DNA和PU19-1.24 HBV重组质粒共转染,3 d后Western blot检测MXA蛋白表达,Abbott法检测细胞上清HBeAg和HBsAg分泌量,定量PCR检测上清和胞内HBV DNA水平,统计学分析结果 .pcDNA3.1-MXA与PU19-1.24HBV重组质粒共转染HepG2细胞,对照组为pcDNA3.1-MXA重组质粒、PU19空质粒和Salon DNA共转染,3 d后裂解细胞Western blot检测MXA蛋白表达.结果 Western blot显示MXA组有MXA蛋白表达;与对照组相比,pcDNA3.1-MXA和PU19-1.24 HBV重组质粒按1:1转染时,MXA组HBeAg下降27%,上清HBV DNA和细胞内HBV DNA分别下降1个log值和0.6个log值;按2:1比例转染时MXA组HBeAg较对照组下降66%,上清HBV DNA和细胞内HBV DNA水平分别下降1.9个和1.7个log值,差异均具有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测显示MXA蛋白抑制HBV组与对照组MXA蛋白表达没有明显差别.结论 MXA蛋白在HepG2细胞具有抑制HBV复制活性,抑制活性与蛋白的表达量相关;在抑制HBV复制过程中MXA蛋白自身可能不发生降解.     

慢性乙型肝炎患者肝内TCR文库在核苷(酸)类似物治疗前后的变化及意义

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者经核苷(酸)类似物(NUCs)治疗前后肝内T细胞受体(TCR)文库变化特征.方法 选取10例接受替比夫定(LdT)治疗的CHB患者,根据治疗104周后是否发生HBeAg血清学转换分为两组.通过高通量测序分析LdT治疗前后肝穿刺组织中TCRβCDR3区,并分析TCR文库特征及其与血清学...     

乙型肝炎e抗体阳性的无症状携带与慢性活动性肝炎的乙型肝炎病毒X及前C基因变异

抗 ＨＢｅ阳性的ＨＢＶ感染者存在两种临床现象 ,即表现为ＨＢＶ低复制水平的无症状携带 (ＡｓＣ)和ＨＢＶ高复制水平的慢性活动性肝炎 (ＣＡＨ)。两者均可存在ＨＢＶ前Ｃ终止密码的变异[1] 。可能在ＨＢＶ基因中 ,存在其他重要变异而导致此两种不同的临床现象。本研究旨对抗 ＨＢｅ阳性的ＡｓＣ和ＣＡＨ各 14例ＨＢＶＸ区序列测定 ,研究Ｘ基因变异与病变活动的关系。一、资料与方法1.病人 :14例ＡｓＣ和 14例ＣＡＨ均为我院 1998～ 1999年门诊或住院收治的病人 (表 1)。ＡｓＣ和ＣＡＨ组病例均为ＨＢｓＡｇ( )、抗 ＨＢｅ( )。诊断符…     

HBV基因型和S基因序列特点与慢性乙型肝炎患者HBsAg/抗-HBs共存关系

目的探讨HBV基因型及S基因序列特点与慢性乙型肝炎（CHB）患者HBsAg和抗-HBs共存的内在相关性以及HBsAg＋/抗-HBs＋的发生机制及意义。方法共收集49例HBsAg＋/抗-HBs＋CHB患者的血清HBVDNA样本,采用PCR-RFLP及测序法鉴定其基因型,并与267例HBsAg＋/抗-HBs-CHB患者的HBV基因型分布进行比较。对6例HBsAg＋/抗-HBs＋CHB患者（Ⅰ组）的HBVS基因进行克隆测序,并与HBsAg＋/抗-HBs-CHB患者（Ⅱ组）进行对比,分析变异种类及频率等的差异。结果 HBsAg＋/抗-HBs＋CHB患者HBV基因型B、C及B/C混合感染的构成比分别为63.3%（31/49）、26.5%（13/49）、10.2%（5/49）,而对照组上述构成比分别为52.8%（141/267）、46.1%（123/267）、1.1%（3/267）,两组构成比差异有统计学意义（P〈0.01）。Ⅰ组HBsAg各区段,特别是主要亲水区（MHR）的变异位点明显多于Ⅱ组;发现了若干新变异、少见的W196和C69终止突变,1例患者检测到G145R变异。某些患者HBsAgMHR-2（包含a决定簇）并未发现变异。结论 HBV基因型的差异及HBsAg变异增多可能是部分CHB患者出现HBsAg＋/抗-HBs＋的原因之一;基因型B或B/C混合感染相对更易出现HBsAg＋/抗-HBs＋。HBsAg变异增多是CHB患者出现HBsAg＋/抗-HBs＋的重要机制之一。某些患者HBsAgMHR-2并无变异,提示HBsAg/抗-HBs共存还存在其他机制。     

新疆维吾尔族慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型及亚型分布特点

目的 了解新疆维吾尔自治区(简称新疆)维吾尔族慢性HBV感染者基因型、基因亚型分布情况及其与预后的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法,分析109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者感染病毒的基因型及基因亚型.多标本均数比较采用单向方差分析.结果 109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎88例,乙型肝炎肝硬化17例,肝癌4例.13基因型HBV感染者9例,占8.3%,C基因型感染者50例,占45.9%,C/D基因型重组体32例,占29.4%,D基因型感染者18例,占16.5%,C基因型、C/D基因型重组体为主要基因型.经过聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析及测序检测,鉴定9份B基因型HBV,均为Ba亚型.50例C基因型HBV感染者病毒基因亚型分布情况:Cl亚型27例,占54%,C2亚型23例,Cl亚型比C2亚型感染者多.在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中,HBV Ba基因亚型感染者分别为8例(9.1%)、1例(5.8%)和0例;C2基因亚型感染者分别为17例(19.3%)、8例(47.5%)和2例(50%);C/D基因型感染者分别为29例(33.0%)、2例(11.9%)和1例(25%),随着病情加重,Ba基因亚型和C/D基因型感染者所占比例呈下降趋势,C2基因亚型感染者所占比例增加.结论 新疆地区维吾尔族慢性HBV感染者以Cl基因亚型为主,新疆维吾尔族慢性HBV感染者存在C/D基因型重组体.C2基因亚型HBV感染预示病情严重,预后差.     

宁夏地区乙型肝炎病毒基因型分布及D基因型的测序鉴定

为确定乙型肝炎病毒Ｄ基因型在我国的存在,建立我国ＨＢＶ Ｄ基因型的参照序列,作者用聚合酶链式反应结合限制性片段长度多态性分析技术,调查了可能存在Ｄ基因型的我国宁夏地区ＨＢＶ基因型分布。对９０例ＨＢｅＡｇ阳性ＨＢＶ感染者的血清进行前Ｓ区ＲＦＬＰ基因型分型。结果发现：Ｃ基因型８６．７％（７８／９０）‘;Ｄ基因型１０％（９／９０）无Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型不能明确分型者３．３％（３／９０）。２例ＲＦＬＰ分型为Ｄ     

中国乙肝病毒B基因亚型的分布

目的调查乙肝病毒B基因亚型在我国的分布情况。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法并结合测序法,对来自全国7个中心的共511份B基因型感染血清样本进行了检测。结果511份B基因型样本经亚型分析,确定全部为Ba亚型,未发现Bj亚型的存在。结论流行于我国南方及北方地区的乙肝病毒B基因型毒株绝大部分为Ba亚型,Bj亚型非常罕见。