案例教学在病理学教学改革中的应用

案例教学是近年来流行的一种行之有效的启发式教学方法。它可以通过教学案例的引导,增强学生的学习主动性和积极性,培养学生的综合能力。针对病理学教学的特点和授课学生本身的接受能力,阐述了案例教学在病理学教学中的优势所在、实施措施以及相应的注意问题和建议。     

转染Zbtb7a基因对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 观察转染Zbtb7a基因对人胃癌细胞系SGC7901增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将pcDNA3.1-Zbtb7a和pSilencer 3.1-H1-mk用Lipofectamine2000转染SGC7901细胞,采用RT-PCR和Western Blot法检测MK mRNA及蛋白表达,CCK-8试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V-PI染色检测细胞凋亡.结果 转染Zbtb7a后,SGC7901细胞中MK表达水平明显升高,细胞增殖能力明显增强（P＜0.05）,并且0.5ng/mL TRAIL诱导的细胞凋亡受到抑制（P＜0.05）.Zbtb7a高表达后干扰MK的表达,细胞增殖及克隆能力则明显降低（P＜0.05）,TRAIL诱导的细胞凋亡数也明显增加（P＜0.05）.结论 Zbtb7a可以通过上调MK的表达,促进SGC-7901细胞增殖以及抑制TRAI诱导的细胞凋亡.     

右美托米啶对β-淀粉样肽引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的:探讨右美托米啶(dexmedetomidine,Dex)对β-淀粉样肽(amyloid-βpeptide,Aβ)引起的SH-SY5Y细胞(神经母细胞瘤细胞)凋亡的影响作用。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,随机分为4组:阴性对照组,不同浓度Aβ25-35组(2.5、5.0、10.0μmol/L组),观察不同浓度的Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的作用。同时进一步观察Dex与Aβ联合应用对SH-SY5Y细胞的作用,实验随机分为5组:阴性对照组,Aβ组(10.0μmol/L Aβ25-35),Aβ+Dex 0.1组(10.0μmol/L Aβ25-35+0.1μmol/L Dex),Aβ+Dex 1.0组(10.0μmol/L Aβ25-35+1.0μmol/LDex)和Aβ+Dex 10.0组(10.0μmol/L Aβ25-35+10.0μmol/L Dex),分别处理24 h后,采用DAPI荧光染色法计数凋亡细胞数,计算凋亡率。结果:Aβ25-35可以促进SH-SY5Y细胞的凋亡,且呈时间和浓度依赖性;而在Aβ25-35中同时加入Dex作用后,细胞凋亡明显受到抑制,细胞凋亡率明显下降(P<0.05),但仍明显高于阴性对照组。结论:Dex可以有效的抑制Aβ25-35引起的SH-SY5Y细胞的凋亡。     

Midkine shRNA对胃癌SGC7901细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究shRNA 干扰midkine对胃肿瘤细胞SGC7901生物学特性的影响.方法:构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染SGC7901细胞,检测细胞的增殖和克隆形成能力以及细胞凋亡情况.结果:与对照组相比,转染重质粒后1-5天, SGC7901细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01),细胞形成克隆数明显降低(P＜0.01),并且有明显的亚二倍体峰出现(P＜0.05).结论:针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞SGC7901 midkine表达,细胞增殖及克隆形成能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine 基因靶向治疗提供一定的实验依据.     

人胃腺癌BGC823细胞Midkine高表达前后基因表达谱芯片分析

目的：用基因芯片技术分析、筛选Midkine高表达前后胃腺癌相关基因谱的差异表达。方法：建立Midkine高表达BGC823胃腺癌细胞系,提取细胞总RNA,逆转录Cy3、Cy5标记cDNA探针,应用晶芯唧表达谱芯片,分析差异表达的基因。结果：发现Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞有显著性表达差异的基因共有550个,其中上调基因407个,下调基因143个。对550条差异表达基因进行初步功能分类分析,结果表明这些基因与Midkine促进胃腺癌发病机制存在相关性。结论：Midkine高表达前后BGC823胃腺癌细胞部分功能基因存在显著的表达差异,多数差异表达的基因参与细胞黏附、细胞骨架形成、细胞周期以及细胞代谢等过程。     

干扰人乳腺癌MDA-MB-231细胞 EPCR表达对内皮细胞增殖､迁移及脉管形成的影响

目的 :通过观察干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞内皮蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)表达对内皮细胞的增殖、迁移、脉管形成能力的变化,分析EPCR在肿瘤血管形成中的作用。方法:采用si RNA方法降低人乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR的表达,通过RT-PCR及Western blot技术检测EPCR干扰效果,实验分为EPCR干扰组、无关序列组及未处理组。制备肿瘤条件培养基模拟肿瘤微环境培养HUVECs细胞,通过CCK-8法检测各组内皮细胞增殖能力,Transwell小室检测内皮细胞迁移能力,Matrigel检测内皮细胞脉管形成能力。结果:与未处理组及无关列序组相比,EPCR干扰组细胞的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低(P<0.05)。结论:干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞EPCR的表达能够抑制内皮细胞增殖、迁移及脉管形成能力,提示EPCR可能在肿瘤血管形成中起重要作用。     

Midkine特异的shRNA对胃肿瘤细胞BGC823增殖及凋亡的影响

目的研究shRNA干扰midkine对胃肿瘤细胞BGC823增殖能力及凋亡的影响。方法构建midkine基因的特异性小RNA干扰质粒,采用脂质体2000转染BGC823细胞,运用CCK-8检测细胞的增殖能力,PI染色检测细胞凋亡情况。结果成功转染重组体的BGC823细胞增殖明显受到抑制（P〈0.01）细胞形成克隆数明显降低（P〈0.01）,并且有明显的亚二倍体峰出现（P〈0.05）。结论针对midkine基因的特异性小RNA干扰质粒在体外能有效抑制人胃癌细胞BGC823 midkine表达,细胞增殖能力减弱,细胞凋亡增加,为midkine基因靶向治疗提供一定的实验依据。     

人缺失型Midkine重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备

目的获得兔抗人缺失型Midkine(t MK)的多克隆抗体,并将其初步应用于临床检测。方法将人t MK蛋白经亲和层析法纯化,并将其作为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗人血清,经饱和硫酸铵纯化,获得初步纯化的兔抗人t MK多克隆抗体,用免疫组织化学和蛋白印迹(Western blot)试验检测抗体的灵敏度和特异性。结果获得初步纯化的兔抗人t MK特异性多克隆抗体,该抗体能识别天然人t MK蛋白。结论制备的t MK多克隆抗体可初步用于临床检测。     

人胃癌组织中期因子的克隆表达及其对NIH3T3细胞生长促进作用

根据GenBank报道的序列,设计一对引物,通过RT-PCR从胃肿瘤患者肿瘤组织中获得了Midkine(MK)成熟肽DNA编码序列,与pMD18T-vector连接测序后,将该片段克隆入大肠杆菌表达载体pET30(a+)中,转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),筛选得到可诱导表达MK重组蛋白的工程菌株pEMK,经IPTG低温诱导表达产生的总可溶蛋白用Heparin结合的亲和柱纯化,并用MTT法验证表明大肠杆菌表达产生的可溶性MK蛋白具有促进NIH3T3细胞增殖的作用。