肾综合征出血热外周静脉血细胞因子的变化与病情的关系

目的观察肾综合征出血热(HFRS)患者各病期外周静脉血血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR2)、血管生成-素1(ANG-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)水平的变化及其变化与病程中血管渗漏的关系,为研究HFRS的发病机制提供依据。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了68例不同病期HFRS患者外周静脉血上述5种细胞因子,并以20例健康志愿者作为正常对照。同时对20例HFRS患者病程5期连续动态收集的外周静脉血标本中的VEGF进行了测定。结果在所有观察患者中,血浆VEGF水平从发热期开始增高[(337.6±238.0)ng/L],休克期达到峰值[(556.0±185.2)ng/L],少尿期开始迅速下降[(259.0±152.8)ng/L],在多尿期[(223.1±110.6)ng/L]和恢复期[(246.5±202.0)ng/L]回落到正常水平。HFRS患者sVEGFR2、ANG-1水平在休克、少尿、多尿期均低于健康对照组;TNF-α和IFN-γ水平在发热期、低血压休克期、少尿期和多尿期均高于健康对照组,其中大多数与后者比较差异有统计学意义。此外...     

HCV入胞相关分子及其作用机制的研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是一种有包膜的单股正链RNA病毒, 属于黄病毒科丙型肝炎病毒属.包膜病毒感染细胞的初始步骤即是病毒外膜与靶细胞膜相互结合作用的过程, 多种病毒蛋白及宿主细胞分子参与其中.HCV主要的靶细胞是肝细胞, 病毒颗粒首先要通过肝细胞膜进入胞浆才能开始其生命周期.     

体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒感染Huh7.5细胞的透射电镜观察

目的 通过透射电子显微镜技术观察体外培养的嵌合体丙型肝炎病毒(HCV)感染Huh7.5细胞后胞内病毒颗粒的形态学特征及细胞内部超微结构的变化.方法 将含有全长HCV嵌合基因组的质粒pFL-J6/JFH体外转录为HCV RNA,电穿孔转染至Huh7.5细胞,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定培养上清中病毒数量;间接免疫荧光检测病毒蛋白的表达;收取转染后细胞培养上清感染原始Huh7.5细胞,制作超薄细胞切片,透射电子显微镜技术观察被感染细胞中病毒颗粒的形态学特征及细胞超微结构的变化.结果 qRT-PCR显示不同时间点收取的转染后细胞培养上清中含有高水平的病毒量;间接免疫荧光显示病毒NSSA非结构蛋白高表达;透射电子显微镜观察到被感染的Huh7.5细胞内含有大量有包膜或无包膜的病毒样颗粒,细胞质内部分膜性细胞器增生,出现黄病毒科病毒感染后特征性结构及某种未知结构等.结论 体外培养的嵌合体HCV具有HCV颗粒的形态学特征,并能够有效感染人源性肝细胞Huh7.5.     

汉滩病毒感染血管内皮细胞引起TLR4表达上调

目的 探讨汉滩病毒感染血管内皮细胞后,Toll样受体(TRY)分子的表达变化,为抗感染免疫和致病机制研究提供重要资料.方法 分别用LPS,CL097,Poly I:C以及汉滩病毒76-118刺激血管内皮细胞,6 h后提取总RNA,进行反转录获得cDNA,再分别用各自的引物进行PCR反应,产物用1%琼脂糖凝胶电泳分析,并用间接免疫荧光测定汉滩病毒感染血管内皮细胞后TLR4的表达.结果 汉滩病毒刺激感染后,血管内皮细胞TLR2、TLR4转录水平增高,TLR3转录水平降低,细胞膜表面的TLR4表达上调.结论汉滩病毒76-118感染血管内皮细胞后,可以引起TLRs分子转录水平发生改变,其中TLR4表达上调,固有免疫参与了汉滩病毒致病过程.     

HCV结构基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-S的构建、鉴定及表达

目的：构建能表达HCV结构基因（C＋E1＋E2）的腺病毒表达载体的重组骨架质粒,为进一步包装能高效表达HCV结构基因的腺病毒载体做准备,方法：用分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的HCV结构基因上、下游引物,以含有HCVH株基因序列的质粒pBRTM/BCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCV结构基因片段,基因片段回收后,以BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd.CMV-Link.1中CMV启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-S.通过BglⅡ／HindⅢ双酶切、PCV及插入片段序列测定对质粒进行了鉴定。以抗HCVC单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法检测了pAd.HCV-S在人肝癌细胞7721中的瞬时表达。结果：酶切、PCR及测序鉴定证实,pAd.HCV-S插入片段为HCVCE1＋E2区基因片段,免疫荧光法检测表明其可以在7721细胞中瞬时表达。结论：构建的质粒pAd.HCV-S 可以表达HCV结构基因,为包装表达HCV结构基因的腺病毒载体奠定了基础。     

乙型肝炎病毒adr型C区突变调节人类白细胞抗原-Ⅰ的表达

目的研究HBV adr型C区突变对机体HLA-I表达的调节机制。方法构建HBV C区突变株L97、G87、V60的真核表达载体,转染HepG2细胞,检测转染细胞中HLA-I的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1、tapasin的mRNA表达情况。结果各转染细胞株均能有效表达HBeAg,但表达量不同,野生株高于C区突变株;各转染细胞株均有HLA-I的表达,其中以L97突变株表达量最高;TAP1 mRNA表达上调,LMP2 mRNA及tapasin mRNA均未见明显表达。结论HBV C区突变株可降低HBeAg的表达,且均能维持甚至上调HLA-I的表达,TAP1 mRNA的表达上调可能是HLA-I表达增强的原因之一。     

艾滋病西药治疗及其相关问题研究进展

艾滋病(AIDS)流行形势严峻,据联合国AIDS规划署发布的<2009年全球艾滋病流行情况摘要>,截止2009年l 2月31日,全球共有约3330万HIV感染者,2009年新增感染者约260万、死亡约180万[1].国内外治疗AIDS目前最常采用的是高效抗逆转录病毒治疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART),即同时联合应用3种或3种以上抗HIV药物的方法.     

运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度

目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法.方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb) 3G1为一抗,FIX标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比.结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,最低检测的病毒滴度为100 TCID50/ML.结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法.     

适应性免疫在丙型肝炎病毒持续感染中的作用

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种黄病毒属的单股正链嗜肝RNA病毒,是引起慢性肝病的主要病原体.机体在抗HCV感染免疫过程中,固有免疫(innate immunity)与适应性免疫(adaptive immunity)相互依赖,互相协作.     

丙型肝炎病毒感染的不同人群HCV RNA定量研究

目的了解丙型肝炎病毒感染的不同人群血清HCV RNA水平,比较定性和定量PCR结果,探讨HCV RNA含量与血清ALT的相关性.方法采用荧光定量PCR和逆转录巢式定性PCR同时检测136例丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA,并测定定量PCR(+)者血清ALT.用相关系数分析HCV RNA含量与血清ALT的关系.结果定性PCR阳性率为80.88%,定量PCR阳性率为77.94%.两者相对符合率为94.12%.定量PCR(+)血清(106例)HCVRNA含量在107.04～1010.96拷贝·L-1.无症状献血员HCV RNA含量显著低于慢性丙型肝炎、肝硬变和肝细胞癌患者(P＜0.05),肝细胞癌患者血清ALT水平显著低于慢性丙型肝炎(P＜0.05).HCVRNA滴度与血清ALT呈正相关(r=0.61,P＜0.01).结论定性和定量检测结果有很好的一致性.病毒复制水平上升在肝损伤和肝病进展中可能起重要作用.