Alu-LTR PCR方法检测HAART治疗系列各细胞亚群的整合型HIV-1 DNA

目的应用Alu-LTR PCR方法对高效抗反转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)系列的CD4+T,CD8+T及B细胞进行检测,明确不同细胞亚群及HAART治疗的不同阶段是否存在整合的HIV-1 DNA。方法收集20例HIV-1感染患者HAART治疗过程中0、4、12周及10例健康对照的抗凝血标本,纯化CD4+T,CD8+T及B细胞并提取DNA,应用Alu-LTR PCR方法进行检测。结果 20例HIV-1感染者HAART治疗系列中CD4+T细胞及CD8+T细胞成功扩出目的片段,CD8+T细胞所扩条带亮度均低于CD4+T细胞,HAART治疗系列0、4、12周标本所扩条带亮度没有明显差异。B细胞及10例健康者均为阴性。结论 CD4+T及CD8+T细胞存在整合型HIV-1 DNA,HIV储藏库主要存在于CD4+T细胞内。B细胞内不存在整合型HIV-1 DNA。随着HAART治疗的进程,整合型HIV-1 DNA仍然存在,进一步证明HAART不能根除HIV储藏库。     

AIDS患者γδ T 细胞能够杀伤自体HIV感染和未感染的CD4 T细胞

 目的：建立自体人类免疫缺陷病毒 (Human Immunodeficiency Virus, HIV) 感染的CD4 T细胞模型,检测获得性免疫缺陷综合症 (Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS) 患者γδ T 细胞对自体HIV感染和未感染的CD4 T细胞的杀伤作用。方法：分离健康志愿者和未治疗的AIDS患者外周血单个核细胞 (PBMCs),磁珠分选获得高纯度的CD4 T细胞,加入植物血凝素（Phytohemagglutinin, PHA）和白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2) 共同培养,建立自体HIV感染的CD4 T细胞模型。流式细胞术检测HIV-p24+ CD4 T细胞的比例。乳酸脱氢酶 (Lactate dehydrogenase, LDH)法测定γδ T 细胞的细胞毒作用。结果：培养到第10 d时,HIV-p24+CD4 T细胞的比例达到最高值。AIDS患者的γδ T 细胞能够杀伤自体HIV感染和未感染的CD4 T细胞（细胞溶解率分别为71.1 ± 9.7和24.2 ± 18.2）。而健康志愿者γδ T 细胞对自体的CD4 T细胞没有杀伤作用（细胞溶解率为4.3 ± 10.1）。结论：AIDS患者γδ T 细胞能够杀伤自体HIV感染的CD4 T细胞,为采用γδ T 细胞过继免疫治疗AIDS提供了依据。     

男男性接触者HIV早期感染CD4+T细胞亚群的动态分析

目的 分析北京市男男性接触(men who have sex with men,MSM)人群人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)早期感染者CD4+T细胞及其亚群的动态变化规律.方法 选择HIV阴性对照组12例和HIV急性期感染者18例,均来自于北京佑安医院所建的MSM队列和HIV急性期感染者队列.取HIV急性期感染者随访第4,12,24和48周外周血,监测CD4+T细胞的变化.流式细胞术检测CD4+T细胞表面CCR7和CD45RA分子的表达.结果 与HⅣ阴性对照组相比,HIV急性期感染者CD4+T细胞的数量、效应记忆CD4+T细胞(effector memoryT cell,Tem)的比例和绝对数均显著减少,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).CD4+ Tem绝对数的变化与CD4+T细胞绝对数呈显著正相关(r=0.5768,P=0.0001),而与血浆病毒载量呈负相关(r=-0.2962,P=0.0296).结论 效应记忆性CD4+T细胞数量的下降也可作为HIV早期感染者疾病进展的早期预测指标.     

HIV感染中的浆细胞样树突状细胞研究进展

浆细胞样树突状细胞(pDC)是体内产生干扰素(IFN)-α最有力的细胞,并且是固有免疫和适应性免疫之间的重要联系.HIV-1感染者产生IFN-α不足,循环中pDC数量减少并且功能缺陷,其机制尚不明确.IFN-α在HIV感染中是有益还是有害目前仍存在争论.pDC数量和功能的平衡在HIV发病中起重要作用,利用pDC绝对计数...     

HAART对HIV辅助受体的影响研究

目的 探讨在HIV-1感染过程中,高效抗反转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)与病毒嗜性的关系.方法 从治疗前和治疗24周患者的外周血单个核细胞中提取基因组DNA,克隆HIV-1 env区的C2-V5区并测序.基于V3区氨基酸序列,通过Gen02pheno...     

HIV-1病毒储存库在HIV持续感染中的作用

清除HIV-1的一个重要的障碍就是在HIV感染的过程中,病毒能够潜伏在某个亚群的细胞中.这些亚群细胞的易感性、生命周期、繁殖能力及其在细胞生理和免疫条件改变的情况下周期性产生病毒的能力对病毒的持续存在都是很重要的影响因素.记忆性CD4+T淋巴细胞、骨髓来源的单核-巨噬细胞及造血祖细胞都被认为是HIV-1前病毒DNA的储...     

建立反向PCR检测HIV-1整合位点的方法

高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy,HAART）可降低艾滋病的发病率和死亡率,使感染者血浆中HIV-1RNA降至常规方法检测不到的水平,但用敏感度高的方法仍可检测到病毒基因和低水平的病毒复制,这是因为存在HIV-1潜伏库,含有整合HIV DNA的静止性CD4^＋T细胞是最主要的HIV-1潜伏库。     

调节性CD4~+T细胞及非调节性CD4~+T细胞与HIV/AIDS患者疾病进展关系的研究

目的分析比较中国HIV感染者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+regulatory T cells,Treg)及非Treg细胞与疾病进展的关系,探讨Treg细胞在HIV感染过程中的作用。方法选取76例HIV/AIDS患者,根据其CD4+T细胞计数水平不同分为3组,A组CD4<200个/μL,B组CD4200～400个/μL,C组CD4>400个/μL。采用流式细胞仪胞内染色技术检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的水平,并分析其与CD4计数及病毒载量的相关性。结果随着疾病的进展,Treg细胞百分比逐渐升高,各组间差异有统计学意义;Treg细胞及非Treg细胞的绝对计数均明显下降,且以非Treg细胞下降为主;Treg绝对计数与病毒载量呈负相关(P<0.05)。结论中国HIV感染者随着疾病进展,辅助性T细胞等非Treg细胞的数量下降,对机体免疫保护能力降低,而Treg细胞数量及功能的下降使其对机体的过度免疫活化的抑制作用减弱,病毒复制,加剧病情进展。     

北京市部分男男同性恋人群中HIV-1分子流行病学研究

目的了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的最新流行情况。方法提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag基因P17-P24区,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,确定基因亚型。结果17例患者中,共存在CRF01-AE、B亚型和CRF07-BC3种亚型,其中CRF01-AE9例(52.94%),B亚型5例(29.41%),CRF07-BC3例(17.65%)。结论小样本量的流行病学调查显示,北京地区部分男男同性恋人群中主要存在CRF01-AE、B和CRF07-BC3种亚型;CRF01-AE已取代B亚型而成为北京市MSM人群中HIV主要流行亚型,CRF07-BC重组亚型在北京市MSM人群中增长迅速。