输注鼠基因工程Treg细胞抑制小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病

目的 探讨输注慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠又状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4~+ CD25~-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,实验分4组进行:(1)工程Treg组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个+基因工程Treg细胞5×10~6个;(2)移植对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5x10~6;(3)单纯照射组经受鼠尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2ml;(4)空载体对照组经受鼠尾静脉输注供鼠骨髓细胞5×10~6个+脾细胞5×10~6个十空载体转导的CD4~+ CD25~-T 淋巴细胞5×10~6个.每天观察受鼠存活情况;记录GVHD的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60d)的受鼠骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(8.8±0.6)d、(36.7±2.5)d、(51.6±4.0)d和(34.1±2.3)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05).移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Treg组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度.     

Evi1基因表达在慢性粒细胞白血病急性变中的意义

目的　探讨Evi1基因表达在慢性粒细胞白血病 (慢粒 )急性变中的意义。方法　应用半定量RT -PCR方法检测了HEL白血病细胞系、87例慢粒患者 (慢性期 5 8例 ,加速期 4例 ,急性变期 2 5例 )及 10名正常对照的Evi1基因的表达。结果　 10名正常对照骨髓单个核细胞中未测到Evi1mRNA ;HEL细胞系Evi1阳性 ;87例慢粒中 ,慢性期组、加速期组、急性变组、急性髓性变组Evi1基因表达的阳性率分别为 3 .5 % (2 5 8)、5 0 .0 % (2 4)、48 0 % (12 2 5 )、66.7% (12 18) ) ;但加速期及急性变组的Evi1基因表达率高于慢性期组 (P <0 .0 1) ,而加速期组和急性变组的阳性率无显著性差异 (P =1.0 0 ) ,急性髓性变组的阳性率高于急淋变组 ,差异显著 (P <0 .0 1) ;慢性期组的阳性率较正常对照相比差异无显著性 (P =1.0 0 ) ;Evi1基因阳性表达与慢粒临床分期、急性变分型及预后相关 ,而急性变期Evi1阳性表达与年龄、性别、外周血象、bcr abl融合基因无关。结论　Evi1基因是预测慢粒患者发生急性变的一个有用的基因标志 ,可看做是一个由慢性期向急性期转化的信号 ,并对慢粒急性髓性变或急淋变有鉴别诊断意义     

一种检测异基因骨髓移植后供体植活的巢式PCR方法

目的　利用BALB C(H - 2Kd)和C5 7BL 6 (H - 2Kb)小鼠H - 2K等位基因不同 ,建立一种检测异基因骨髓移植 (allo -BMT)后供体植活的方法。方法　分别以供鼠 (BALB C)和受鼠 (C5 7BL 6 )及allo -BMT后小鼠骨髓和脾细胞DNA为模板进行巢式PCR ,并用琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物。结果　以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞DNA行巢式PCR可扩增出约 42 1bp的特异性片段 ,而未经移植的C5 7BL 6小鼠无此条带 ,与预期结果相符。结论　巢式PCR可敏感检测到不同品系小鼠H - 2K基因间的差异 ,可作为异基因骨髓移植后检测异基因是否嵌合的方法     

HSV-sr39TK-GCv/ACV系统抑制小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病

目的 研究突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶一更昔洛韦/阿昔洛韦(HSV-sr39TK-GCV/ACV)系统对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 采用改良的磷酸钙沉淀法,以携带HSv-sr39TK基因的慢病毒感染C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞.制得sr39TK+T淋巴细胞.以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者进行骨髓移植,受者移植前接受60>Coγ射线照射.实验分6组进行:(1)GCV组共30只小鼠,均于骨髓移植的同时输注sr39TK+T淋巴细胞.其中10只于骨髓移植当天至第6天腹腔注射GCV 0.5 mg/d,10只于骨髓移植后第7～13天腹腔注射GCV0.5 mg/d,10只于骨髓移植后第12～18天腹腔注射GCV 0.5 nag/d;(2)ACV组共30只小鼠,骨髓移植与sr9TK+T淋巴细胞输注同GCV组,其中10只于骨髓移植当天至第6天腹腔注射ACV 0.5mg/d,10只于骨髓移植后第7～13天腹腔注射ACV 0.5 mg/d,10只于骨髓移植后第12～18天腹腔注射ACV 0.5 mg/d;(3)移植对照组仅行骨髓移植;(4)脾细胞对照组行骨髓移植和脾淋巴细胞输注;(5)GCV对照组在脾细胞对照组的基础上于骨髓移植后第7～13天腹腔注射GCV 0.5 mg/d.(6)sr39TK对照组行骨髓移植和sr9TK+T淋巴细胞输注.观察各组受者的存活时间、GVHD的发生情况及程度.结果 GCV对照组、sr9TK对照组、睥细胞对照组和移植对照组小鼠均于骨髓移植后19 d内死亡.GCV组移植当天用药者、第7天用药者和第12天用药者的存活时间分别为(36.70±5.20)d、(40.30±4.69)d和(27.10±4.85)d.ACV组移植当天用药者、第7天用药者和第12天用药者的存活时间分别为(36.50±5.26)d、(46.20±3.61)d和(30.90±5.21)d.GCV组和ACV组受者的存活时间均长于4个对照组(P<0.01),GCV组和ACV组中第7天用药者的存活时间和5(1 d存活率优于其它各时间用药者,差异有统计学意义(P<0.05),而ACV组第7天用药者又明显优于GCV组第7天用药者(P<0.05).4个对照组小鼠移植后10～12 d均开始出现Ⅲ～Ⅳ级GVHD.GCV组和ACV组死亡小鼠可见Ⅱ～Ⅳ级GVHD.而该两组中长期存活受者仅有Ⅰ～Ⅱ级GVHD.结论 HSV-sr9TK-GCV/ACV系统对小鼠异基因骨髓移植后的GVHD有一定的抑制作用;ACV的效果优于GCV;移植后7 d时应用ACV的效果较佳.     

沙美特罗替卡松联合脑心通治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期50例临床观察

目的探讨沙美特罗替卡松联合脑心通治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期的临床治疗效果。方法选取2008年11月—2011年11月慢性阻塞性肺疾病稳定期患者100例,随机分为观察组与对照组,观察组给予沙美特罗替卡松联合脑心通药物治疗,对照组给予氨茶碱口服药物治疗。结果观察组治疗后1s用力呼气容积(FEV1)、FEV1/用力肺活量(FVC)以及FEV1占预计值的百分比与治疗前以及对照组比较均明显升高(P<0.05),稳定期急性复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论沙美特罗替卡松联合脑心通治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期临床效果显著。     

非清髓性异基因外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病七例

非清髓性异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)应用剂量相对较低的骨髓非清除性预处理，移植后形成混合嵌合体，减少了移植相关并发症和相关死亡，特别是年龄较大或器官功能异常的患者也可耐受。我们对7例恶性血液病患者采用以氟达拉滨(Flu)为基础的预处理，然后行异基因外周血造血干细胞移植，现报道如下。     

合成新药靛Ⅲ治疗慢性粒细胞白血病及真性红细胞增多症的观察

三十多年来,慢性粒细胞白血病(慢粒)的治疗进展缓慢,马利兰自五十年代初用于临床,至今仍是治疗慢粒慢性期的首选药物。真性红细胞增多症(真红)迄今尚无满意的治疗方法。靛玉红属吲哚类,我国首创用吲哚类治疗慢粒。靛玉红治疗慢粒有腹痛、腹泻、便血、恶心、呕吐等消化道副作用。因此有必要找出疗效更高,副作用更小的类似化合物,靛Ⅲ即为该类化合物之一。我们所用的靛Ⅲ是中国医学科学院药物研究所合成,经卫生部药品检定所审核,     

血友病基因治疗的研究进展

血友病是由于编码凝血因子的基因异常引起的出血性疾病，基因治疗有望成为治愈血友病最理想的治疗措施。本文就基因治疗中的转基因载体、靶细胞的选择、免疫反应作一综述。     

肝癌患者体内检测出血衍吗啡素-6

组织特异性肽池的含量和成分是组织状态的重要特征，由组织中供酶解的蛋白底物的含量及其可利用率，以及蛋白酶的活性决定的。一些病变可伴有组织中功能蛋白降解片段的含量和成分的改变。因此，组织特异性肽池的变化常常可以反应出机体的某些病变。本研究利用液质联用技术从1例肝癌患者体内检测出一条天然的阿片类肽——Leu—Val—Val（LVV）—血衍吗啡素—6，并观察肝癌组织和正常肝组织的组织特异性肽池间是否存在差异。