二氢青蒿素对胰腺癌生长的抑制作用

Objective To investigate the anti-tumor activity of dihydroartemisinin in pancreatic cancer in vitro and in vivo. Methods For cultured cells,cell growth was determined by the MTT assay and apoptosis was evaluated by flow cytometry analysis stained with Annexin V-FITG/PI. The protein expression in BxPC-3 cells was analyzed by Western blot assay. BxPC-3 cells were injected subcutaneously into nude mice to establish pancreatic xenograft tumors and the tumor volume was monitored after exposure to dihydroartemisinin. Ki-67 staining and TUNEL assay were used to assess tumor cell proliferation and apoptosis in tumor tissue. Results After treatment by dihydroartemisinin in vitro, the proliferative inhibition rates of pancreatic cancer cells BxPC-3 and AsPC-1 reached up to (76.2 ± 3.5) % and (79.5 ± 2.9) %, and the apoptosis rates were up to (55.5 ± 3.2)% and (40.0 ± 3.5)%, the differences were significantly (P ＜ 0.01) compared with control [(2.0 ± 1.3) % and (0.9 ± 0.4) %]. Dihydroartemisinin inhibited the growth of pancreatic xenograft tumors in nude mice. The proliferation index and apoptusis index were (49.1 ± 3.9)% and (50.2 ± 4.4)% respectively in dihydroarternisinin 50 mg/kg treatment group, compared to those of (72.1 ± 3.3) % and (9.4 ± 2.9) % in control, the differences were significantly (P ＜0.01). Western blot assay indicated that dihydroartemisinin up-regulates expression of proliferation-associated protein p21WAF1 and down-regulates expression of PCNA, increases expression of apoptosis-associated protein Bax and decreases expression of Bcl-2 and activates caspase-9 in BxPC-3 cells. Conclusions Dihydroartemisinin exerts anti-tumor activity in pancreatic cancer both in vitro and in vivo by proliferation inhibition and apoptusis induction. Dihydroartemisinin can be used as a potential anti-tumor drug in pancreatic cancer.     

小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型的建立

目的 建立小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型并分析损伤评估指标的变化趋势.方法 采用96只7～8周龄的纯系C57BL/6雄性小鼠作为研究对象,建立70％肝脏缺血再灌注损伤模型.按照缺血时间将小鼠分为假手术组和缺血30、60、90 min组,每组24只.各组小鼠分别于再灌注后6、12、24和48 h处死.通过检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-6和巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)水平以及病理组织学评分、细胞凋亡指数等方法评估各组小鼠肝组织的损伤情况.两独立样本比较采用t检验.结果 术后88只小鼠存活,8只死亡,造模成功率为91.7％ (88/96).假手术组、缺血30、60、90 min组ALT水平分别为(35±24) U/L、(1703±442) U/L、(5133±681) U/L和(8233±808) U/L,缺血30、60、90 min组ALT水平显著高于假手术组(t=6.54,12.97,17.56,P＜0.05);AST水平分别为(87±28) U/L、(2667 ±451) U/L、(6333±778)U/L和(9967±1168) U/L,缺血30、60、90 min组AST水平显著高于假手术组(t=9.89,13.89,14.65,P＜0.05);TNF-α水平分别为(14 ±5) μg/L、(83±14) μg/L、(133±17) μg/L和(202±21) μg/L,缺血30、60、90 min组TNF-α水平显著高于假手术组(t=7.78,11.82,15.34,P＜0.05);IL-6水平分别为(32 ±9) μg/L、(493±168) μg/L、(844±166) μg/L和(1345±198) μg/L,缺血30、60、90min组IL-6水平显著高于假手术组(=4.74,8.46,11.48,P＜0.05);MIP-2水平分别为(37±11) μg/L、(102±35) μg/L、(177±32)μg/L和(279±50) μg/L,缺血30、60、90 min组MIP-2水平显著高于假手术组(t=3.05,7.28,8.19,P＜0.05);细胞凋亡指数分别为1.7％±2.1％、22.7％±8.6％、54.3％±11.2％和76.3％±14.8％,缺血30、60、90 min组细胞凋亡指数显著高于假手术组(t=4.10,8.04,8.63,P＜0.05).在缺血时间相同的情况下,随着再灌注时间的延长,各监测指标呈“抛物线”样变化趋势.结论 小鼠肝脏部分缺血再灌注损伤模型能较好地反映小鼠肝组织的损伤情况.随着缺血时间的延长,小鼠肝脏的缺血再灌注损伤程度逐渐加重;随着再灌注时间的延长,ALT、AST、TNF-α、IL-6、MIP-2以及病理组织学评分和细胞凋亡指数均呈现“抛物线”样变化趋势.     

血小板活化因子乙酰水解酶对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的影响

目的探讨血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的影响。方法将45只雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=15):sham组、SAP组和PAF-AH干预组。PAF-AH干预组于造模1、24h后经阴茎背动脉注射PAF-AH(5mg/kg体重)。各组于造模48h后测定血清中血小板活化因子(PAF)、内毒素、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;对肺组织进行病理学评分。结果与SAP组比较,PAF-AH干预组血PAF(7.91±0.12)pg/L、内毒素(0.28±0.02)EU/ml、TNF-α(1.46±0.76)μg/L含量及肺组织MPO活性(5.24±1.34)U/g、肺组织病理学评分(4.88±1.35)显著降低(P<0.05)。结论应用PAF-AH可从改善微循环障碍、保护肠道屏障功能和抑制急性炎症反应等方面减轻SAP并发肺损伤。     

携带Vasohibin基因的8型重组腺相关病毒的制备及在肌肉组织中的表达

目的克隆Vasohibin基因，包装制备成8型重组腺相关病毒，感染肌肉组织，并观察其在肌肉组织中的表达。方法以Vasohibin基因全长cDNA为模板，应用聚合酶链反应（PCR）方法扩增出Vasohibin基因，采用三质粒磷酸钙共转染HEK293细胞，包装制备成8型重组腺相关病毒，感染小鼠（6只）肌肉组织，免疫组织化学方法检测Vasohibin基因的表达，肌肉组织内染有棕色信号者为阳性。结果成功克隆Vasohibin基因，并制备成8型重组腺相关病毒，感染肌肉组织后实验组小鼠肌肉组织切片呈现广泛棕黄色阳性信号，阳性率为100％（6／6），对照组呈阴性（0／6），未见有阳性表达。结论8型重组腺相关病毒能够有效介导Vasohibin基因在小鼠肌肉组织中的表达。     

5-HT2C受体基因cys23ser多态性与单相抑郁症的相关性

目的 探讨5-HT2C受体基因cys23ser多态性与单相抑郁症及其症状群的遗传关联性,搜寻中国汉族人单相抑郁症可能的易感性基因.方法 应用聚合酶链式反应扩增技术与限制性片断长度多态性分析技术(PCR-RFLP),对132例单相抑郁症患者和180名正常对照者进行关联分析;采用汉密顿抑郁量表(HAMD)评定病例组症状群,分析单相抑郁症症状群与基因型的关联性.结果 病例组与对照组的基因型总体分布差异有显著性(χ2=7.089,P =0.029),但进一步按性别分层分布差异无显著性(女性:χ2=1.891,P =0.389;男性:χ2=0.879,P =0.348);病例组HAMD各因子评分基因型分布差异无显著性(P ＞0.05).结论 5-HT2C受体基因cys23ser多态性可能与中国汉族人单相抑郁症有关联.     

小鼠血管抑素基因的克隆、测序与真核表达载体的构建

目的：克隆小鼠血管抑素（mAS)基因，测序并构建其真核表达载体。方法：从小鼠肝组织中提取总RNA，用RT－PCR方法将mAS的cDNA扩增出，克隆到pcDNA3真核表达载体中，测定其DNA序列。结果：测序结果表明我们克隆的血管抑素基因，其序列与GenBank中鼠的mAS基因序列有4个碱基不同，所编码的氨基酸有3个发生突变。结论：已成功构建鼠mAS的真核表达载体，为进一步应用AS进行肿瘤基因治疗研究打下基础。     

活性氧在梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用研究

目的 探讨活性氧在梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用.方法 测定利用体外原代培养的大鼠肝细胞和大鼠梗阻性黄疸模型中还原型谷胱甘肽、活性氧、谷胱甘肽过氧化物酶活性、活性氧以及肝细胞凋亡指数等指标变化,并行统计学分析.结果 体外实验中肝细胞与终浓度为甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)后培养2h和4h后细胞凋亡率达(43.50±7.09)%和(53.38±5.24)%,其内源性还原型谷胱甘肽消耗呈时间依赖性.梗阻性黄疸模型建立后,随着胆盐水平升高,单纯梗阻性黄疸组大鼠肝组织丙二醛水平上升,还原型谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶活性进行性下降.Tunel染色发现大鼠肝组织细胞出现凋亡,并随时间延长而增多.亚硒酸钠治疗组上述指标变化趋势与单纯梗阻性黄疸组相似,但其各时间点丙二醛水平和凋亡率显著低于单纯梗阻性黄疸组,而还原型谷胱甘肽水平和谷胱甘肽过氧化物酶活性则明显高于后者.结论 ROS在肝脏功能损害中起着重要的作用.亚硒酸钠是一种颇有应用潜能的肝细胞凋亡拮抗剂.     

脑梗死患者与其血浆同型半胱氨酸水平及MTHFR基因关系的研究

目的探讨脑梗死(CI)患者与其血浆同型半胱氨酸(homocystine,HCY)水平及N5+10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因的关系.方法应用高效液相色谱仪和电化学检测法测定1998-02-2001-02收治的84例CI患者和78名正常老年人血浆总HCY水平,运用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测MTHFR基因多态性,同时测定血浆叶酸及维生素B12水平.结果CI患者血浆总HCY水平显著高于正常对照组MTHFR基因型有3种,即纯合子(T/T)型、杂合子(T/C)型、纯合子(C/C)型.3组基因型和等位基因频率相比,差异均无显著性;CI组血浆叶酸及维生素B12水平明显低于正常对照组(P＜0.05).结论高HCY血症可能是CI患者发病的一个新危险因素.     

血必净通过上调血红素氧合酶-1减轻脓毒症诱导肺损伤

目的 探讨血必净（XBJ）是否能通过上调血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）的表达,来减轻脓毒症小鼠的肺损伤（ALI）。方法 本实验在哈尔滨医科大学附属第一医院肝脾外科中心实验室进行。采用改良盲肠结扎穿孔法（CLP）制作脓毒症小鼠模型。48只雄性C57BL/6小鼠,随机分为假手术组（Sham组,n=12）、模型组（CLP组,n=12）、血必净组（XBJ+CLP,n=12）和HO-1抑制剂组（XBJ+ZnPP+CLP组,n=12）。血必净进行干预时,造模前2h经尾静脉注射血必净（2ml/kg）,HO-1特异抑制剂锌卟啉ZnPP（40μmol/kg）在给予血必净1h后经腹腔注射,其余各组给予等体积的生理盐水。术后12h后处死,光镜下观察肺组织的形态学改变,检测肺组织的湿干重比值（W/D）,测定小鼠血清中的炎性介质（TNF-α、IL-6）,采用Western blot法以及免疫组化法检测肺组织HO-1的表达情况,Western blot法检测HO-1上游转录因子——核因子E₂相关因子2（Nrf-2）的表达情况。用单因素方差分析（ANOVA）进行4组间比较,再进行Turkey检验,进行两组间多重比较差异有统计学意义（P<0.05）。结果 与参照组（Sham组）相比,CLP组血清中TNF-α、IL-6水平均明显增加（32.45±9.62 vs 573.51±105.26,47.38±11.84 vs 853.72±198.56pg/ml,P<0.05）,光镜下观察肺损伤及炎性细胞浸润程度明显加重（肺损伤评分：3.24±1.38 vs 12.32±3.45,P<0.05）,肺组织W/D比值增加（4.52±0.34 vs 5.98±0.85,P<0.05）,蛋白印迹法及免疫组化法检测结果显示肺组织中HO-1、Nrf-2的蛋白表达含量均轻度的增加（P < 0.05）。给予血必净（XBJ）干预后,与CLP组相比,血清中TNF-α、IL-6释放均减少（573.51±105.26 vs 327.45±68.52,853.72±198.56 vs 504.72±113.28pg/ml,P<0.05）,肺组织病理损伤及炎性细胞浸润程度减轻（肺损伤评分：12.32±3.45 vs 6.34±1.68,P<0.05）,肺组织W/D比值减少（5.98±0.85 vs 4.75±0.56,P<0.05）,肺组织中HO-1、Nrf-2蛋白表达含量均明显增加（P<0.05）。XBJ对于肺组织的上述保护作用被HO-1抑制剂ZnPP所逆转,HO-1抑制剂组的肺损伤程度与CLP组差异无统计学意义（肺损伤评分：12.32±3.45 vs 11.45±2.85,P>0.05;肺W/D值：5.98±0.85 vs 5.73±0.64,P>0.05）。结论 血必净对于脓毒症小鼠所诱发的急性肺损伤具有保护作用,其可能机制为上调HO-1通路减轻炎性反应,继而减轻肺损伤。     

β-FIBRINOGEN PROMOTER -455 G/A(HaeIII)POLYMORPHISM PREDICTION OF PLASMA FIBRINOGEN BUT NOT OF ISCHEMIC CEREBROVASCULAR DISEASE

ANelevatedplasmafibrinogenlevelisariskfactorforcardiovasculardiseaseincidenceandmortality.12β-fi-brinogengenepolymorphismsinfluenceplasmafibr-Ainogenlevels.3SurveysgenerallybutnotuniformlyindicatedadultswiththeAalleleforthe-455G/ApolymorphismHaeⅢhaveincreasedfibrinogenlevels.4-7Somestudiesobservedassociationof-455Aallelewithelevatedplasmafibrinogenwaspredomin-antinsmokers89butotherstudiesalsofoundthisas-sociationtoonlybeobservedincurrentnonsmokers.10TheassociationbetweenpresenceoftheAalle…