某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核酸定量检测试剂盒的性能评估

目的对某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）核酸定量检测试剂盒（PCR-荧光探针法）的临床应用性能进行评估。方法收集不同HIV感染状态人群的血液样品共计109份,分别使用HIV-1被评估试剂与参比试剂的核酸定量检测试剂盒进行平行对比试验。统计学处理使用Kappa值、R2和Bland-Altman模型。结果被评估试剂检测结果相对于参比试剂,检测结果的总符合率为97.25%（95%CI:92.17%～99.43%）,Kappa值为0.92（P<0.001）,一致性强度为最强。109例样本中,均在被评估试剂与参比试剂定量检测范围内的样本为84例,两种试剂盒检测结果的回归分析表现出较强的相关性（R2=0.853 6）。使用Bland-Altman模型比较两种试剂检测结果的差异均值,结果显示对于未进行抗病毒治疗的HIV感染者样本两种试剂检测结果具有较好的一致性。结论被评估试剂和参比试剂对同一份血浆样本检测结果具有较好的定性符合程度和较强的相关性,对HIV感染者样本两试剂检测结果有较强的定量一致性。     

胰腺癌相关新抑癌基因DPC4的初探

目的：通过对良恶性胰腺组织、胰腺癌细胞的DPC4(Delected in Pancreatic Cancer，Locus4)基因的9个外显子变化的检测，以探索胰腺癌早期诊断的新途径。方法：应用聚合酶链反应(PCR)、复合PCR(Multiplex PCR)、直接基因测序的方法，检测19例胰腺良、恶性组织物、2例正常胰腺组织、3个胰腺癌细胞株DPCA基因的纯合缺失及突变。结果：13例胰腺癌中11例DPCA的9个外显子PCR成功。2例未扩增出产物。经复合PCR证实为DPCA的纯合缺失，缺失率为15．4％(2／13)；3个胰腺癌细胞株中有1例纯合缺失(1／3)。PCR产物直接基因测序示：11例胰腺癌组织中有2例DPCA的第5／6外显子有1个碱基突变(A→T)，突变率18．2％(2／11)，2个胰腺癌细胞株中有1个在同样部位发生碱基突变(1／2)，2例胰岛细胞瘤、2例慢性胰腺炎、2例正常胰腺组织既无DPCA纯合缺失、也未检测到基因突变。结论：DPC4基因可能是胰腺癌候选抑癌基因之一。分析DPCA的变化有助于胰腺癌的诊断。     

中国艾滋病病毒1型流行毒株V3环序列变异性的研究

目的 研究中国艾滋病病毒1型(HIV-1)毒株V3环序列的变异性。方法 对中国1996～2000年491例HIV-1感染者env基因C2-V3区经聚合酶链反应(PCR)扩增并测序,测得的序列经DNA软件编辑后,用Wisconsin公司GCG软件包进行分析。结果 从核酸序列可以看出,V3环的核苷酸存在着点突变和基因的漂移。各亚型流行株V3顶端的四肽特征主要为:GPGQ 72.6％,GPGR 13％,GPGK 7.6％,其它形式6.7％。在V3环氨基酸序列11、25位点未同时出现带正电荷的氨基酸。基因离散率的分析表明呈现逐年递增趋势。结论 中国V3环顶端四肽序列主要为GPGQ,从1990的10％、1993年的29％上升到2000年的72.6％。而GPGR则从1990年的80％、1993年的57％下降到2000年的13％。更加证明了在中国存在着HIV-1毒株V3区顶端四肽由GPGR向GPGQ漂移的现象。从V3环序列的高度变异性分析表明中国正处于HIV快速流行期。     

保存时间对血浆样本HIV-1病毒载量测定值的影响研究

目的观察保存时间对血浆样本艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）病毒载量测定值的影响。方法应用HIV-1核酸序列扩增系统技术（NASBA）对87份-20℃保存的HIV-1抗体阳性血浆样本分组，分别在第0、3、6、11、12、13、14个月进行HIV-1病毒载量检测。结果-20℃保存3个月的样本病毒载量无明显降低，平均下降0．210Log值（P〉0．05），6个月以后的样本病毒载量明显降低，平均下降0．256Log值（P〈0．05），11、12、13个月以后的样本病毒载量明显降低，平均下降大于0．428Log值（P〈0．05），但病毒载量下降幅度与原始病毒载量无关（P〉0．05）。结论血浆样本在-20℃条件下保存6个月以上HIV-1RNA病毒载量水平降低明显，已不能真实反映原始样本病毒载量水平，用于病毒载量检测的血浆样本在-20℃冰柜中不宜超过3个月。     

青海省首次发现的2例HIV感染者HIV—1毒株的基因特征和亚型分析

目的：分析青海省首次发现的HIV感染者HIV－1毒株的基因特征及亚型。方法：从2例感染者外周静脉血淋巴细胞中提取前病毒DNA,使用套式PCR方法,扩增HIV的Env基因,对其Env C2-V3及邻近序列进行分析。结果：两个毒株与国际参考序列的Coon间的基因离散率最小为4．93％,而远离其它亚型,2个毒株间的基因离散率为1．35％,进一步的系统树分析显示,2个毒株与Ccon聚集在一起。结论：2个毒株均为C亚型,而且HIV－1毒株刚进入青海省且流行的时间不长。     

福建省艾滋病感染的流行病学和病毒亚型 之间相互关系的研究

目的通过分子流行病学调查,明确福建省人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)流行毒株亚型与艾滋病(AIDS)流行的关系.方法通过艾滋病监测网络发现全省HIV/AIDS病例,应用核苷酸序列分析技术确定HIV-1亚型,结合流行病学资料分析福建省AIDS的流行状况.结果截至2000年底,全省累计发现188例HIV感染者,其中AIDS59例(已死亡53例).经异性性接触感染占65.4%,经血途径感染占9.0%,境外感染占44.1%,其中在东南亚等国家感染约占83.1%,境内感染占39.9%.41例HIV/AIDS病例的HIV-1亚型分析表明福建省存在A、B、C和E4种亚型,E亚型占75.6%(31/41),均为经异性性接触途径感染;B亚型17.1%(7/41),主要经血途径感染.A和C亚型分别为1和2例.E亚型基因离散率为(12.245±3.894)%,B亚型基因离散率为(10.762±2.707)%.表明福建省E亚型流行株的来源复杂,与感染地点、时间有关.结论福建省AIDS流行速度正在加快,病毒感染者主要经异性性接触途径感染,HIV-1流行毒株主要为E亚型.     

静脉吸毒人群中血浆抗-HCVEIA法、WB法与HCVRNA荧光定量PCR法比较

目的了解吸毒人群中抗-HCV EIA法、WB法与HCV RNA检测分析的符合性,选取适合高危人群的HCV实验室诊断策略。方法使用2种EIA试剂进行筛查试验,初检阳性者用另一种抗体试剂复检和用FQ-PCR(荧光定量PCR)法检测HCV RNA,抗体复检阳性的样品用HCV WB检测试剂进行确认。结果血清学试验115份样本初检结果阳性108份,阴性7份;对初检阳性者进行复检,结果阳性90份,阴性18份。复检阳性者使用WB确认,89份阳性,1份不确定;EIA抗-HCV结果S/CO≥3.8有71份,与WB阳性符合率为98.6%。EIA复检阳性样本中HCV-RNA检出率为82.22%,复检阴性样本中有HCV RNA的检出率为77.78%(14/18)。结论抗-HCV并不与HCV RNA同时出现。吸毒人员HCV感染的检测,在EIA筛查基础上,对阴性样本检测HCV-RNA,阳性样本用WB试验进行确认,确保检测的准确性。     

基于8E5细胞的HIV-1病毒载量能力验证质控品制备及评估

目的制备及评价基于8E5细胞的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus 1,HIV-1)病毒载量能力验证质控品的均一性、稳定性和反复冻融性。方法将8E5细胞上清原液10倍梯度稀释得到浓度依次为10⁶、10⁵、10⁴、10³拷贝/ml的4组HIV-1病毒载量能力验证质控品,应用病毒载量分析仪进行检测,将病毒拷贝数其换算成lg值,计算均值(xˉ)、标准差(s)、变异系数(coefficient of variation,CV)、变化趋势,并对质控品的均一性、稳定性和反复冻融性进行评价。结果在4个浓度梯度的均一性评价中,各浓度组质控品的CV分别为1.2%、2.6%、1.8%和3.2%。稳定性评价实验中,在-20℃条件下,各组质控品在5个月评价期间内,检测结果不随时间延长而改变(P>0.05)。在4℃条件下,各组质控品在5周评价期间内,检测结果随时间延长而未改变(P>0.05)。在25℃条件下,各组质控品在15 d评价期间内,检测结果随时间延长而减少(P<...     

胎儿脑组织中12种元素的含量和分布

分析了１１８例１６～３８周流产胎儿脑组织１２种无机元素（锌、铜、铁、钙、镁、铝、钠、钾、磷、锰、镉、铬）的含量和变化。结果表明：在脑中八个部位（颞叶、额叶、顶叶、枕叶、小脑、脑干、延髓、海马）中，锌、铁、钙在小脑中含量较高；钠、钾、磷在大脑皮层的含量较高；在脑发育期间，小脑中的锌含量，颞叶、顶叶中的铁含量及除脑干外的脑中七个部位铜的含量持续升高。并给出了正常胎体脑组织１２种元素的含量和分布。     

滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价

目的 探索滤纸固定艾滋病病毒Ⅰ型核酸(HIV-1 DNA)的稳定性、均一性,评价滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的敏感性、特异性.方法 套式PCR扩增HIV-1的env、gag、pol三区.不同环境条件下保存的滤纸片干血斑,分别在不同的时间段检测;滤纸片干血斑的中心及圆斑的上下左右4个边缘,随机打取5个2.5mm圆片用于检测.采自新疆现场的94份阴性样本和90份阳性样本,分别制成滤纸片干血斑样本和全血样本,比较两者的HIV-1DNA检测结果.结果 滤纸片干血斑-20℃或4℃放置1年或室温放置3个月,或在37℃放置两天或冻融2次,实验的敏感性未见下降;37℃放置3天或冻融3次,已经有样本不能检出.滤纸干血斑不同位点随机打取圆片扩增,4个样本中,中点均阳性,但在上点、左点、右点分别出现一份阴性结果.滤纸干血斑法和全血法检测HIV-1前病毒DNA比较,敏感性是96.1%,特异性是98.9%.结论 滤纸干血斑在室温条件下运输是可行的,推荐尽量靠近滤纸干血斑的中间位点打取圆片扩增;该方法操作简便、经济、敏感、特异.