配伍前后四逆汤中酯型生物碱的变化规律

目的 研究四逆汤中附子配伍不同药味前后,汤液中酯型生物碱的变化规律.方法 采用HPLC法测定附子单煎液、附子干姜合煎液、附子甘草合煎液和四逆汤中单酯型生物碱及双酯型生物碱成分的含量.结果 附子配伍不同药味之后,苯甲酰乌头原碱等3种单酯型生物碱的含量均升高,依次为四逆汤＞附子甘草合煎液＞附子干姜合煎液＞附子单煎液;仅在附子单煎液中检出次乌头碱,其浓度为0.11 mg·g-1,而在附子干姜合煎液、附子甘草合煎液、四逆汤中均未检测到双酯型生物碱成分.结论 附子在配伍其他药味后,单酯型生物碱成分的含量升高、双酯型生物碱成分的含量减低,为“附子无干姜不热、干姜缓附子之毒”与附子-甘草“相畏/相杀”减毒配伍“毒减而效不减”提供了依据;四逆汤组单酯型生物碱成分的含量上升幅度最大,体现了全方药简力专、大辛大热,使阳复厥回通,共奏回阳救逆之功.     

矿物药玄明粉与无水硫酸钠的构效对比研究

目的 对比研究矿物药玄明粉与无水硫酸钠结构与药效差异,探索二者的作用机制.方法 采用AXIOS型X射线荧光光谱法对二者结构进行比较;采用小鼠胃排空、肠推进模型和复方地芬诺酯所致便秘模型对二者药效进行比较.结果 玄明粉有正交和立方两种晶型,无水硫酸钠只有正交晶型;除共有化学组成外,玄明粉还含有Al2O3、K2O、SrO、ZnO、C1-,无水硫酸钠仅有Fe2O3;药效对比实验中,发现二者对小肠运动的影响具有显著性差异(P＜0.01).结论 玄明粉与无水硫酸钠在结构和药效上存在一定的差异,实验结果可为临床应用提供参考依据.     

抗幽门螺杆菌的胃原籍益生菌株的筛选

目的 筛选体外对幽门螺杆菌有拮抗作用的胃原籍益生菌.方法 从健康志愿者溃疡好发部位取黏膜组织标本按常规厌氧菌分离方法 分离鉴定出多株益生菌,对所分离的菌株通过打孔法检测其体外抑制HP的效果,筛选出有拮抗作用的菌株进行体外与HP共同培养检测其抑菌效果,并进行耐酸、耐胆汁实验.结果 从健康成人胃内分离、鉴定出50株益生菌株,体外抑菌实验发现3株具有拮抗HP的作用、能耐酸、耐胆汁的胃原籍益生菌,编号分别为LF011、JBG012和FB013,经鉴定1株为双歧杆菌,2株为乳酸杆菌.结论 胃内具有独特的菌群体系,分离的3株益生菌能体外拮抗HP并能耐酸、耐胆汁.     

四物汤不同提取工艺对血虚模型小鼠造血功能的影响

目的:探讨四物汤水提工艺、水提醇沉工艺及50％乙醇渗漉工艺对血虚模型小鼠造血功能的影响.方法:将小鼠随机分为6组,即空白对照组、模型组、阳性(复方阿胶浆)组、四物汤药物组1号(水提组)、2号(水提醇沉组)、3号(50％乙醇渗漉组).四物汤药物组每日ig给予四物汤1,2,3号(12 g生药·ks-1),阳性组给予复方阿胶浆(20 mL·kg-1),正常对照组与模型组给予等容量生理盐水,连续给药(生理盐水)8d.除空白对照组外,其余各组分别于第2,5日sc乙酰苯肼20,40 mg·kg-1,从第5日起,每日ip环磷酰胺40 mg·kg-1,连续4d.空白对照组同时注射等容量生理盐水.检测四物汤不同提取工艺药物组对血虚小鼠外周血象、脾脏和胸腺指数、骨髓有核细胞数的作用.结果:四物汤药物组1,2,3号均能升高血虚小鼠红细胞数、血红蛋白含量、白细胞数及骨髓有核细胞数,其中水提组和50％乙醇渗漉组差异性显著(P＜0.05);四物汤药物组1,2,3号均能显著增加血虚小鼠脾脏指数和胸腺指数(P＜0.01),其中水提组、50％乙醇渗漉组有强于水提醇沉组的趋势.结论:由3种提取工艺制得的四物汤对改善血虚模型小鼠的造血功能均有作用,以水提组和50％乙醇渗漉组较优.     

补阳还五汤含药血清抗同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的作用

目的:研究补阳还五汤含药血清对同型半胱氨酸(Hcy)致内皮细胞株(Eahy926)损伤的保护作用及其机制。方法:采用体外培养的内皮细胞株(Eahy926),测定不同的补阳还五汤含药血清对Hcy致内皮细胞活力的影响,检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;荧光显微镜检测核转录因子-κB(NF-κB)的激活及Western blotting法测I-κBα蛋白表达。结果:10%,20%的补阳还五汤含药血清均能明显提高Hcy损伤的内皮细胞的存活率、SOD[分别为(15.87±0.46),(16.31±0.96)U·mL-1]活力,与损伤组(11.44±1.00)U·mL-1相比,P<0.01;降低LDH的释放和MDA[分别为(1.62±0.06),(1.47±0.18)nmol·L-1)的含量,与损伤组(1.89±0.25)nmol·L-1)相比,P<0.05;以及细胞培养液中sICAM-1[分别为(0.93±0.11),(1.00±0.14)μg·L-1]和TNF-α[分别为(63.71±2.64),(66.22±4.43)ng·L-1]浓度,与损伤组(2.32±0.23)μg·L-1,(125.67±2.69)ng·L-1)相比,P<0.05;同时抑制内皮细胞中NF-κB的激活,上调I-κBα蛋白表达量。结论:补阳还五汤含药血清对同型半胱氨酸致内皮细胞损伤具保护作用,其保护作用机制可能与抑制NF-κB的活化有关。     

补阳还五汤抗动脉粥样硬化作用与紧密连接蛋白的关系

目的: 探讨补阳还五汤对同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(AS) 的保护作用与紧密连接蛋白表达的关系. 方法: 将40只雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠随机分为模型组、补阳还五汤低、中、高剂量组,Rho激酶抑制剂Y-27632组.以正常雄性C57BL/6J小鼠设正常组,每组8只动物.模型组和治疗组均采用0.1 g·kg^-1·d^-1的Hcy造模,造模同时,治疗组分别补阳还五汤(5,10,20 g·kg^-1·d^-1)组,Y-27632 50 mg·kg^-1组,ig.8周后采用Western-blot检测主动脉组织claudin蛋白的表达变化和反转录PCR(RT-PCR)检测连接蛋白包括咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白(claudin)、带状闭合蛋白(zonula occludens, ZO)、连接黏附分子(junction adhesion molecule, JAM)的mRNA的表达变化. 结果: 与正常组对比,Western-blot检测模型组AS病变明显,模型组与正常组比claudin蛋白表达明显减少,RT-PCR检测模型组与空白组相比,claudin,JAM,Zo,Occludin的mRNA的表达明显降低,不同剂量的补阳还五汤改善AS病变的同时上调血管组织中Claudin,JAM,Zo,Occludin的表达水平. 结论: 补阳还五汤能显著的增加血管组织中Claudin,occludin,JAM,Zo表达量,说明补阳还五汤抗hcy所致的AS与增强血管组织中紧密连接蛋白有关.     

补阳还五汤对LPS诱导巨噬细胞活化与自噬的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路在补阳还五汤抗脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞活化与自噬中的作用。方法:细胞增殖毒性检测(CCK-8)法筛选诱导RAW264.7巨噬细胞活力值的最适LPS浓度。在最适LPS浓度下,利用PI3K阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(5 mmol·L~(-1)),Akt阻断剂MK2206(5μmol·L~(-1)),m TOR阻断剂Rapamycin(10μmol·L~(-1)),Beclin-1阻断剂Spautin-1(5μmol·L~(-1))及不同剂量的补阳还五汤含药血清(5%,10%,20%)处理RAW264.7巨噬细胞24 h后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测RAW264.7巨噬细胞炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定磷酸化(p-)PI3K,p-Akt,p-mTOR通路蛋白的表达及微管轻链蛋白3(LC3),泛素结合蛋白1(p62),Beclin-1的水平。自噬双标腺病毒转染检测RAW264.7细胞自噬流的变化。结果:CCK-8结果显示10 mg·L~(-1)LPS作用时,细胞活性显著增强。模型组IL-1β,IL-6,TNF-α浓度显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著升高IL-6浓度,其他给药组均可降低IL-1β,IL-6,TNF-α的水平(P0.05,P0.01)。模型组p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量明显低于空白组(P0.05),LC3,p62蛋白表达量显著高于空白组(P0.01),与模型组比较,Rapamycin显著降低p-Akt蛋白表达量,不影响p-mTOR表达,补阳还五汤各剂量组与其他各阻断剂组均可明显升高p-Akt,p-PI3K,p-mTOR蛋白表达量(P0.05,P0.01),降低LC3,p62蛋白表达量(P0.05,P0.01),各组Beclin-1蛋白表达量均无显著性差异。与空白组比较,模型组中有明显的自噬体斑点形成,自噬流顺畅;与模型组比较,补阳还五汤含药血清组,3-MA,Spautin-1组自噬斑点的形成明显减少或消失,MK2202,Rapamycin组自噬体斑点大小明显减小,但自噬活力仍较强。结论:补阳还五汤抗LPS诱导巨噬细胞活化与自噬与抑制巨噬细胞炎症反应,调控PI3K/Akt/m TOR信号通路,抑制自噬的过度发生有关。     

不开颅光化学诱导兔脑皮层梗死模型的建立

目的 建立一种不开颅的光化学诱导兔脑皮层梗死模型，以期为脑梗死疾病提供更为为仿真的实验研究手段。方法 兔30只，制备去除外板和板障而保留内板、直径为5mm的颅骨骨洞，耳缘静脉注射荧光剂后应用LG-150B冷光源照射骨洞处30min，24h后进行5分制临床评价，48h后处死取脑，常规病理切片。结果 模型制作成功率96．3％，病理切片显示梗死灶典型，可见组织片状坏死。结论 此模型建立方法方便可行，损伤小，维持了模型动物颅内环境的稳定，能更好地体现临床上脑梗死疾病的真实情况。     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的 :探讨脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)信号转导分子TLR4(Toll likereceptor 4 ,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法 :小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织 ,HE染色观察病理改变 ,RT PCR法检测肝组织TLR4mRNA的表达。结果 :腹腔注射LPS后 2 4h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死 ,肝组织TLR4mRNA的表达在注射LPS后 6 ,1 2h明显抑制 ,2 4h则基本恢复。结论 :LPS致肝损伤呈时间依从性 ;LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用     

N-乙酰半胱氨酸对小鼠实验性结肠炎的作用及与对氧磷酶1的关系

溃疡性结肠炎(UC)是慢性反复发作的炎症性肠病(IBD).有研究发现,抗氧化剂可有效治疗实验性结肠炎.抗氧化治疗能调控促氧化与抗氧化间的平衡,具抗氧化活性的物质可作为潜在的治疗IBD药物[1].