FMU100抗体的超高效液相色谱法定量检测方法的建立

目的 建立UPLC-protein A定量检测FMU100单克隆抗体的方法.方法 使用Waters UPLC超高效液相色谱仪,Applied Biosystem的PA ImmunoDetection Sensor Cartridge(2.1×30 mm,20μm)色谱柱,柱温30℃,检测波长280 nm,进样体积10μL,以流动相A(10 mmol/L PBS含0.15 mmol/L NaCl,pH 7.2)-流动相B(0.15 mmol/L NaCl,pH 2.6)进行梯度洗脱,流速0.5 mL/min.结果 在0.034~2.200 mg/mL浓度,线性相关系数r2为0.9999,浓度与峰面积间呈良好的线性关系;检测限为0.01 mg/mL,定量限为0.07 mg/mL;回收率为98.18%~99.16%;重复性RSD为0.1%~1.9%;在8 h内,每个2 h测定发酵液中抗体的含量,FM U100抗体峰面积RSD为1.8%;在流动相A pH变化±0.2、流动相B NaCl比例变化±5%、柱温变化±5℃ 、检测波长变化±5 nm、流速相对值变化±20%时,FM U100抗体峰峰面积RSD为1.7%(n=12);检测方法符合系统适应性要求.     

研究人员发现能有效将脂肪细胞转化成肝细胞的方法

2013年10月21日,斯坦福大学医学院的科学家在《Cell Transplantation》上揭示了一种再生医学中极具潜力的现代炼金术——快速有效的细胞转化法,代替常规的抽脂法。研究人员通过小鼠实验成功地将人体中抽取的脂肪性干细胞转化成人类肝细胞样细胞。与常见的研究不同,本研究使用的是脂肪性干细胞,而非胚胎干细胞及诱导多能干细胞（ips细胞）。胚胎干细胞及ips细胞可以分化成各种类型细胞,但具有形成肿瘤的风险。然而将脂肪性干细胞转变成肝细胞技术过程中,因不存在体细胞相和多能干细胞相中间的多能相,因此目前尚无迹象表明存在形成肿瘤的风险。     

肝癌患者血清和腹水可溶性肿瘤坏死因子受体-p55的测定

目的 进一步了解肝癌患者的异常免疫状态,探讨血清、腹水中可溶性肿瘤坏死因子受体-p55（sTNFR-p55）检测的临床意义。方法　以双单抗夹心酶免疫吸附法检测了25例肝癌患者和25例肝硬化患者的血清、腹水中血清sTNFR-p55水平并以正常人为对照。结果肝癌病人血清sTNFR-p55浓度[（0.74±0.50）ng/ml]显著高于正常人[（0.37±0.03）ng/ml]和肝硬化患者和[（0.35±0.02）ng/ml],P<0.01。肝癌病人腹水sTNFR-p55浓度[（1.11±1.25）ng/ml]亦显著高于肝硬化患者[（0.33±0.03）ng/ml],P<0.01。肝癌、肝硬化患者血清与腹水的sTNFR-p55水平显著相关。肝癌患者血清sTNFR-p55水平与外周血TBil和AFP呈正相关（r=0.524,P=0.01和r=0.234,P=0.03）。结论　sTNFR-p55的检测对反映肝癌患者的异常免疫状态和肿瘤诊断具有实用价值。     

中医骨折三期治疗对家兔骨折骨膜组织中VEGF及VEGF mRNA表达的影响

目的:研究中医骨折三期治则对家兔桡骨骨折愈合过程中内外骨膜及骨髓组织VEGF及VEGFmRNA表达的影响,探讨中药治疗骨折的分期治疗的合理性。方法:140只雄性新西兰白兔,无菌状态下手术,在家兔双侧桡骨下1/3段,造成3mm完全骨质缺损的骨折愈合模型。采用计算机产生随机数字的方法,将家兔随机均分为4组:中药三期治疗组、中药一期治疗组、阳性药物对照组以及模型对照组,分别给予三期治疗、一期治疗、阳性药物治疗以及等量蒸馏水。于术后3、6、9、14、28、42、56d每组随机处死5只家兔,取左侧桡骨标本作为观察对象,采用免疫组化和原位杂交方法检查外骨膜、内骨膜和骨髓组织中VEGF及VEGFmRNA表达,通过图像分析测量各种组织中VEGF及VEGFmRNA表达强度。结果:各中药治疗组对于术后骨折端外骨膜、内骨膜和骨髓组织VEGF和VEGFmRNA表达均有促进作用,三期治疗组有高于其他三组的趋势(P0.05)。结论:中药分期治疗对骨折愈合过程中外骨膜、内骨膜和骨髓组织VEGF及VEGFmRNA表达的促进作用更加明显,骨折分期治疗是必要的。     

抑癌基因RUNX3在膀胱癌T24细胞株中的表达以及对凋亡的影响

目的 明确RUNX3抑癌基因在正常膀胱组织和膀胱癌T24细胞株的甲基化状态,并将野生型RUNX3基因转染T24细胞,探讨RUNX3基因恢复表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响. 方法应用RT-PCR、甲基化特异性PCR和非甲基化PCR检测正常膀胱组织、膀胱癌T24细胞中RUNX3基因的表达以及基因启动子区域CpG岛的甲基化状态.构建真核载体的RUNX3-EGFP-pDest质粒,在LipefectamineTM2000介导下转染膀胱癌T24细胞,转染实验设立3组:空白对照组、空质粒EGFP-pDest转染组以及RUNX3-EGFP-pDest转染组.Western blot检测RUNX3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡情况. 结果正常膀胱组织RT-PCR可检测出1248bp的RUNX3基因条带,而膀胱癌T24细胞中无法检测出RUNX3基因的表达.正常膀胱组织RUNX3基因甲基化PCR检测阴性,非甲基化PCR阳性;T24细胞反之.正常膀胱粘膜组和RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组Western blot检测,均表达RUNX3蛋白,而膀胱癌T24细胞未表达RUNX3蛋白.流式细胞仪检测,空白对照组的凋亡率为(3.1±0.46)%,而EGFP-pDest转染组和RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组的凋亡率分别为(10.1±1.62)%、(41.20±1.53)%,应用方差分析的LSD法和SNK法进行均数的多重两两比较,RUNX3-EGFP-pDest质粒转染组与EGFP-pDest转染组、空白对照组凋亡率之间的差异均具有显著性,P<0.01.结论 正常膀胱组织RUNX3基因正常表达,未发生启动子区域CpG岛甲基化,而膀胱癌T24细胞可能因RUNX3基因启动子区域CpG岛发生甲基化,致RUNX3基因无法表达.转染野生型RUNX3抑癌基因后促进了膀胱癌T24细胞的凋亡.     

HPLC-MS/MS快速测定人血浆中奥司他韦和羧酸奥司他韦的浓度

目的 建立高效液相色谱联用质谱测定人血浆中奥司他韦和羧酸奥司他韦浓度的方法.方法 内标选用奥司他韦-d3和羧酸奥司他韦-d3,血浆样品处理采用甲醇直接沉淀蛋白的方法,色谱柱为Venusil C18 Plus,2.1 mm×50.0 mm,5.0 μm,以含0.1％乙酸水溶液和纯乙腈为流动相,梯度洗脱;应用电喷雾离子化,...     

抗癌药物IAP拮抗剂可能会导致骨癌

凋亡抑制蛋白(IAP)可以直接与caspase-3、caspase-7及caspase-9结合而产生抑制细胞凋亡作用,是与肿瘤发生、发展密切相关的分子。近年来,以IAP为靶点研制高效低毒的抗癌基因药物备受关注。近日,美国圣路易斯华盛顿大学医学院的研究人员发现IAP拮抗剂具有增加肿瘤向骨扩散的风险。     

深圳市中央空调冷却塔水军团菌AFLP分型研究

目的 了解深圳市中央空调冷却塔水中军团菌的多态性，分析优势种群和菌型分布，为建立军团菌分子型别库提供资料。方法 运用The European Working Group for Legionella Infections（E．W．G．L．I）组织制定的扩增片断长度多态性分型（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）方法，对深圳市中央空调冷却塔水中军团菌进行分子分型。结果 按照血清分型方法，将冷却塔水中军团菌分为Lp1、Lp2-14以及非嗜肺型，运用AFLP技术对50株军团菌菌株分型，结果将22株Lpl血清型分为7种AFLP型，分别记为AFLP1—7，以AFLP2型与AFLP5型为主要型别；20株Lp2-14血清型分为7种AFLP型，分别记为AFLPⅠ—AFLPⅦ，以AFLPⅠ、Ⅱ为主要型别；9株非嗜肺军团菌血清型分为5种AFLP图谱。结论 AFLP分型技术能初步分析深圳市军团菌优势种群，为对军团菌监测及致病性军团菌型别的分析提供基本资料。     

四逆汤合参附汤治疗慢性心力衰竭阳虚血瘀证

目的探讨四逆汤合参附汤治疗广西地区慢性心力衰竭(CHF)阳虚血瘀证患者的临床疗效和生活质量,为中医药指导CHF提供资料。方法纳入7家医院CHF阳虚血瘀证患者病例,随机分为治疗组26例、对照组27例,治疗组在对照组治疗基础上加服四逆汤合参附汤加减。疗程为6个月。比较2组患者的心功能指标(6MWT、LVEF、NT-proBNP)、中医四诊要素积分临床疗效、中医四诊要素积分、明尼苏达心力衰竭生活质量调查表(MLHFQ)。结果治疗组心功能分级、中医四诊要素积分临床疗效有效率较对照组高,中医四诊要素积分、6MWT、LVEF、NT-proBNP、MLHFQ各领域积分改善均优于对照组(P0.05)。结论四逆汤合参附汤可改善广西地区CHF阳虚血瘀证患者的心功能和提高生活质量。