丙肝抗体酶联诊断试剂盒的研制和应用

丙型肝炎由丙型肝炎病毒(HCV)引起,在全世界广泛流行。我国属丙肝高发区,感染情况十分严重。丙肝极易慢性化,继而发展为肝硬化、肝癌,对人类健康造成严重危害。丙肝主要经血液及血液制品传播。建立敏感、特异、稳定、快速的检测方法,对献血员进行筛     

快速血浆反应素试剂灵敏度与稳定性的检测及其在梅毒血清学诊断中的应用

我们用自制的ＲＰＲ试剂（ＲＰＲ３０２）、ＴＲＵＳＴ试剂（ＴＲＵＳＴ３０２）检测５０份质控参比血清，结果（灵敏度、特异性及定性符合率）与检定所制备的ＲＰＲ及ＴＲＵＳＴ试剂完全相符。稳定性试验表明ＲＰＲ３０２４℃至少稳定１２个月，ＴＲＵＳＴ３０２可稳定在１８个月，并且本试剂检测结果不受性病混合感染影响，无生物学假阳性反应。     

合成肽抗原抗人免疫缺陷病毒1/2型抗体酶联试剂盒的研制

根据人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）的基因结构和氨基酸序列，采用固相法合成了ＨＩＶ－１ｇｐ４１（ＳＰ１）、ｇｐ１２０（ＳＰ２）、ｐ２４（ＳＰ３）和ＨＩＶ－２ｇｐ３６（ＳＰ４）的４条多肽，混合包被酶标板做为固相抗原，采用间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），建立了检测抗－ＨＩＶ－１／２ＩｇＧ抗体的酶联诊断试剂盒。检测卫生部药品和生物制品检定所提供的４１份质控参比血清，其特异性、敏感性均为１００％，变异系数小于１０％。检测１８６份其它病种病人血清均为阴性，与华怡、巴斯德、金豪等公司的ＨＩＶ诊断试剂比较检测了９０份ＨＩＶ感染者和１４０份正常人血清，除与华怡试剂的阴、阳性及总符合率分别为９９２９％（１３９／１４０）、９８９０％（９０／９１）和９９５７％（２２９／２３０）外，其余均为１００％。３７℃放置４天后试剂的检测结果不受影响。     

噬菌体随机十肽库的构建

目的采用丝状噬菌体表达载体,构建表达于丝状噬菌体尾丝蛋白P3N末端的随机十肽库。方法人工合成编码随机十肽的寡核苷酸片段及两条分别有SfiI和Notl酶切位点的引物,通过PCR反应得到其双链片段,将其克隆入载体pHEN1中,将重组产物转化入大肠杆菌TG1,构建成随机肽库。结果所建肽库含 1×10~9个集落形成单位(cfu)。随机挑取8个克隆测序,其核苷酸序列及推断出的氨基酸序列均随机。结论成功构建了有较高库容量的噬菌体随机十肽库。     

人工合成HIV多肽的抗原性比较研究

为了建立检测HIV感染的敏感方法,根据文献报道的HIV-1和HIV-2基因组核苷酸序列、氨基酸序列,利用计算机分析其亲水性和抗原决定簇位点,自行设计合成了HIV-1gp41、gp120、P24和HIV-2pg36区域的10条多肽,以此多肽作抗原包被反应板,建立了检测HIV抗体的间接ELISA方法,同时检测10份抗HIV-1阳性病人血清和4份抗HIV-2     

庚型肝炎病毒IgM抗体检测方法的建立及其临床意义

目的建立一种早期、快速诊断庚型肝炎的血清学检测方法。方法以辣根过氧化物酶标记庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽ＮＳ３,ＮＳ５区段抗原,建立了捕获酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,用于检测血清中ＨＧＶＩｇＭ抗体。结果本法不受特异性ＩｇＧ的竞争和类风湿因子的干扰;与其它致肝炎的病毒（ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶ）无交叉反应。检测４６例非甲、乙、丙、戊型肝炎患者血清,抗－ＨＧＶＩｇＭ阳性１４例,阳性率３０．４３％,其中,６例同时为ＨＧＶＲＮＡ阳性,阳性符合率为４２．８６％（６／１４）,检测１２例庚型肝炎病人双份血清,其中,急性期血ＨＧＶＩｇＭ抗体均为阳性。结论该法检测ＨＧＶＩｇＭ抗体特异性强,敏感性高,且简便快速,适用于临床对庚型肝炎新近感染的早期诊断,有推广应用价值。     

检测抗HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制

目的 建立更敏感的检测人免疫缺陷病毒（HIV）抗体的方法,并研制检测试剂盒。方法 根据HIV－1／2型的基因序列及其所编码氨基酸结构,采用固相法合成了HIV－1型的gp41.1、gp41.2、gp120、p24和HIV－2型的gp36五条多肽,混合包被酶标板作为固相抗原。用辣根过氧化物酶标记以上多肽抗原作为标记物,建立检测血清中抗HIV－1／2抗体的双抗原夹心ELISA法。同时,应用该方法制备检测HIV抗体的试剂盒,并检测三批中国卫生中药品和生物制品检定所HIV诊断试剂国家参比品。结果 建立了检测HIV－1／2抗体的双抗原夹心法。用检定所参比品检测,该方法特异性、灵敏度均为100％,变异系数小于10％。与间接法相比较其灵敏度、特异性均高于间接法（P＜0．05）。检测210份其他病种患者血清均为阴性。与GBI公司的HIV抗体诊断试剂比较,检测40份卫生部药品和生物制品检定所提供的质控参比品（阳性20份,阴性20份）,GBI试剂阴、阳性符合率及总符合率分别为100%(20/20)、85％（17／20）及92．5％（37／40）,而应用该方法所研制的诊断试剂盒、阳性符合率及总符合率为100％。该试剂已通过国家卫生部质检。与雅培公司HIV诊断试剂比较检测90份献血员血清和88份HIV－1／2型感染者血清,符合率为100％。试剂盒于37℃放置4d后的检测结果的阴、阳性判定不受影响。结论 本法特异性强、灵敏度高、稳定性好,适用于献血员的筛选和临床HIV感染的检测。     

诊断丙型肝炎病毒感染的3种ELISA的比较研究

将新建立的检测血清中抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）总抗体的双抗原夹心ＥＬＩＳＡ（夹心法）与普遍采用的检测抗ＨＣＶ－ＩｇＧ的间接ＥＬＩＳＡ（ＩｇＧ间接法）及检测抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的间接ＥＬＩＳＡ（ＩｇＭ间接法）进行比较研究。检测１５份ＩｇＭ间接法阳性、ＩｇＧ间接法阴性（ＩｇＭ单阳）血清及２０份ＩｇＧ间接法阳性、ＩｇＭ间接法阴性（ＩｇＧ单阳）血清,夹心法均为阳性,这３５份血清经ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ均阳性。夹心法可同时检出ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体,检出率高于后两者。检测２０份ＨＣＶＲＮＡ阴性血清,３种方法均阴性。用生物制品检定所检测ＨＣＶ－ＩｇＧ抗体的质控血清为标准品,夹心法和ＩｇＧ间接法均可达到检测标准