隐孢子虫病常用病原学诊断方法的探讨

隐孢子虫 (Cryptosporidium)是一种危害广泛的人兽共患寄生原虫。隐孢子虫病 (cryptosporidiosis)是由寄生于人或其他动物胃肠道和呼吸道的隐孢子虫所引起的 ,可造成哺乳动物尤其是反刍动物和人的严重腹泻[1] 。对于人体 ,隐孢子虫病已被列为世界最常见 6种腹泻病之一 ,在婴幼儿、营养不良者、器官移植者、化疗的癌症患者、长期住院治疗病人等免疫低下者和免疫缺陷患者中感染率高且危害严重 ,是公认的引起人类腹泻的重要原因 ,其引起的腹泻是艾滋病 (AIDS)患者主要死亡因素之一。我国首例病例是由韩范 1 987年在南京地区发现的[2 ] 。为进…     

环介导等温扩增检测恶性疟原虫的应用研究

目的探讨环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测恶性疟患者血中疟原虫的敏感性和特异性。方法收集恶性疟患者和健康人血液样品,分别用LAMP、镜检法和巢式PCR检测恶性疟原虫,计算LAMP的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,并与巢式PCR进行比较。结果共检测78份恶性疟患者和30份健康人血样,其中72份患者血样LAMP检测为阳性,以镜检法为金标准,LAMP筛检的灵敏度为92.3%,特异度为100%,阳性预测值和阴性预测值分别为100%和83.3%;以巢式PCR为参考,LAMP筛检的灵敏度为97.2%,特异度为94.4%。结论 LAMP方法检测恶性疟原虫的敏感度和特异度与巢式PCR方法相近,可应用于现场恶性疟检测。     

细粒棘球绦虫感染小鼠肝脏髓源抑制性细胞 与调节性T细胞比例动态变化

目的　分析细粒棘球蚴感染小鼠肝脏髓源抑制性细胞（MDSCs）和调节性T（Treg）细胞比例动态变化,探讨其可能的生物学意义。方法　将30只6 周龄雌性BALB/c 小鼠随机分为感染组和对照组,每组15只。感染组每只小鼠腹腔注射细粒棘球绦虫原头节约2 000个,对照组注射等体积生理盐水。感染后3、6、12个月（感染早、中、晚期）收集小鼠肝脏白细胞,采用流式细胞术检测其中MDSCs 及其亚型M?MDSCs、PMN?MDSCs 与Treg细胞比例。结果　感染组小鼠感染后3、6、12个月肝脏白细胞中MDSCs 比例分别为（1.61 ± 0.36）%、（5.68 ± 0.69）%和（16.18 ± 0.69）%,对照组分别为（2.19 ± 0.42）%、（0.99 ± 0.07）%和（4.18 ± 0.84）%,感染后6个月和12个月两组差异均有统计学意义（P均 < 0.01）;感染组小鼠感染3、6、12个月后肝脏白细胞中M?MDSCs 比例分别为（0.69 ± 0.27）%、（5.30 ± 0.72）%和（10.75 ± 0.29）%,对照组分别为（0.42 ± 0.24）%、（0.69 ± 0.02）%和（2.12 ± 0.13）%,感染后6个月和12个月两组差异均有统计学意义（P 均< 0.01）;感染组小鼠感染后3、6、12个月肝脏白细胞中PMN?MDSCs 比例分别为（0.93 ± 0.23）%、（0.32 ± 0.02）%和（5.14 ± 1.03）%,对照组分别为（1.77 ± 0.26）%、（0.28 ± 0.05）%和（1.99 ± 0.90）%,感染后3个月和12个月两组差异均有统计学意义（P均 < 0.05）。感染组小鼠感染后3、6、12个月肝脏白细胞中Treg细胞比例分别为（3.35 ± 0.14）%、（6.24 ± 0.38）%和（3.41 ± 0.07）%,对照组分别为（3.48 ± 0.46）%、（3.65 ± 0.45）%和（3.12 ± 0.12）%,感染后6个月和12个月两组差异均有统计学意义（P均＜0.01）。结论　小鼠感染细粒棘球蚴6个月和12个月后,其肝脏白细胞中MDSCs与Treg细胞比例增加,前者比例变化更加明显,以M?MDSCs为主;以上提示M?MDSCs可能在小鼠感染细粒棘球蚴中后期发挥主要免疫抑制作用。     

日本血吸虫HGPRT重组抗原与不同佐剂联合应用对小鼠免疫保护作用的研究

目的:观察日本血吸虫(大陆株)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl-transferase, HGPRT)重组抗原(reSjc HGPRT)与ISA206或弗氏佐剂联合免疫对小鼠诱导抗日本血吸虫感染的保护作用. 方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为5组:reSjc HGPRT加ISA206佐剂免疫组、reSjc HGPRT加弗氏佐剂组、ISA206佐剂对照组、弗氏佐剂对照组和感染对照组.20 μg重组抗原和ISA206或弗氏佐剂乳化后小鼠项背部多点皮下注射,共免疫3次,每次间隔2周.佐剂对照组小鼠仅注射ISA206或弗氏佐剂和生理盐水,感染对照组不注射任何重组抗原或生理盐水.于末次免疫后3周,每只小鼠经腹部皮肤感染(30±1)条日本血吸虫尾蚴,6周后剖杀小鼠,门脉灌注收集成虫,计数成虫数、雌雄合抱数和小鼠肝组织虫卵数.在免疫前、攻击感染前和小鼠剖杀前分别采血并分离血清,用ELISA检测血清中特异性IgG抗体. 结果:重组抗原加ISA206佐剂或弗氏佐剂免疫组均诱导小鼠产生特异性IgG抗体应答,与感染对照组和弗氏佐剂对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);诱导小鼠产生的减虫率、减雌雄合抱率和肝组织减卵率分别为53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%,与感染对照组和2种佐剂对照组相比均有统计学意义(P<0.05).结论:reSjc HGPRT与ISA206或弗氏佐剂联合免疫,可诱导小鼠产生抗血吸虫感染保护作用.     

恶性疟原虫MAL13P1.129基因的抗原表位预测及免疫学分析

目的 对恶性疟原虫MAL13P1.129基因的抗原表位进行预测,表达其重组蛋白并进行免疫学鉴定.方法 利用生物信息学分析方法对MAL13P1.129基因的线性抗原表位进行预测,从亲水性、表面可及性、柔韧性及二级结构等方面对抗原表位进行筛选.人工合成经密码子优化的MAL13P1.129基因,构建至PET32a(+)表达载...     

临床腹泻患者贾第虫感染和分子特征研究

目的初步了解临床腹泻患者贾第虫的感染情况及分子特征。方法以2014年5-7月上海市某医院临床腹泻患者为研究对象,收集粪便样本95份,进行卢戈氏碘液染色,用光学显微镜检查贾第虫包囊。采用巢式PCR法扩增贾第虫磷酸丙糖异构酶基因(tpi),扩增产物测序后用BLAST、Clustal X 1.83和MEGA6.0软件进行同源性和系统发育分析。结果形态学观察发现1例腹泻患者感染贾第虫,阳性检出率为1.05%。其粪便样本经卢戈氏碘液染色后显微镜下可见清晰的包囊。对样本进行PCR检测,扩增片段大小约为530 bp,测序结果显示为贾第虫。经序列比对分析,并以tpi基因构建系统发育树,分析鉴定该分离株为集聚体B,与已报道的人源贾第虫分离株(KF271445)同源性为100%。结论临床腹泻患者中存在贾第虫感染,本研究结果可为了解贾第虫基因型特点及贾第虫病流行病学研究提供参考。     

浅析儿科轮转护士的专科培训带教方法及效果评价

目的：探讨儿科新入科轮转护士的规范化培训的方法与成效,提高护士的专业水平和综合素质,满足临床对护理工作的需要。方法：根据规范化培训的计划,从入科培训的目的、培训的方式、培训的内容、培训的时间安排以及考核评价方法等方面,对新入科护士从医院各项制度、儿科常见病的护理常规、专科操作流程进行系统的带教和阶段性进行考核。结果：观察组理论考试（93.24 ± 4.76分）优于对照组（86.1　±　5.08分）,观察组操作考核（95.3 ± 03.68分）优于对照组（90.16　±　4.21分）。结论:该科轮转护士的专科培训带教方法使新人科护士从理论到护理技术操作都得到提升,具有良好的效果,值得临床推广应用。     

个性化护理干预在糖尿病足患者护理中的应用效果

目的总结分析个性化护理干预在糖尿病足患者护理中的应用效果。方法选择2016年6月至2018年7月我院收治的66例糖尿病足患者的临床资料进行研究,根据其所选择的护理方案不同进行分组,观察组36例选择个性化护理,对照组30例选择常规护理,观察两组护理效果。结果观察组护理后SAS评分(40.1±1.3)分、SDS评分(41.2±1.6)分明显低于对照组,组间差异明显(P0.05);观察组足部伤口愈合有效率(91.67%)以及护理满意度评分(92.5±1.3)分均明显高于对照组,组间差异明显(P0.05)。结论个性化护理干预在糖尿病足患者护理中的应用效果肯定,有助于更好地改善患者负面情绪,促进足部伤口愈合,值得推广应用。     

安氏隐孢子虫热休克蛋白编码基因的克隆、表达和分析

目的 克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr 70 000热休克蛋白（CaHSP70） 的部分编码基因。 方法 依据公布的CaHSP70基因序列设计引物，以江苏徐州安氏隐孢子虫（XZ-BOV）总RNA为模板，反转录PCR（RT-PCR）扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后，亚克隆入pET28a原核表达载体，构建重组质粒pET28a-CaHSP70，转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并获得纯化的重组蛋白（简称为rCaHSP70）。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、蛋白质印迹（Western blotting）和ELISA对该重组蛋白进行分析和鉴定。采用相关生物信息学软件对序列进行分析。 结果 根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的CaHSP70一致。SDS-PAGE和Western blotting分析显示，重组蛋白（rCaHSP70） Mr约为43 000（含6个组氨酸），以包涵体的形式存在，可被辣根过氧化物酶标记的抗组氨酸抗体、安氏隐孢子虫感染的小鼠血清、微小隐孢子虫感染的儿童血清和rCaHSP70免疫小鼠血清识别。rCaHSP70存在多个功能位点和潜在的抗原决定簇。种系发生分析表明XZ-BOV与安氏隐孢子虫进化关系最近。ELISA检测结果表明，rCaHSP70免疫的C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠血清特异性抗体滴度均显著高于免疫前。 结论 XZ-BOV HSP70部分编码基因的克隆获得成功，研究获得的重组蛋白具有一定的免疫原性和免疫反应性。     

T载体的构建及日本血吸虫肌动蛋白基因PCR产物的快速克隆

目的构建快速高效克隆PCR产物的克隆载体(T载体),并对日本血吸虫肌动蛋白全长编码基因PCR产物进行快速克隆.方法日本血吸虫肌蛋白全长编码基因的扩增采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法.质粒pGEM5Zf ( )经限制性内切酶EcoR V 酶切,在仅含有脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的PCR缓冲液中于70 ℃作用2 h,在每个片段的3'端加上一个脱氧胸苷(dT)碱基,构建成T载体.根据PCR扩增产物3'端存在一个非模板依赖的脱氧腺苷(dA)原理,将扩增产物直接克隆入T载体并测序.结果阳性克隆经琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切分析、PCR及DNA序列测定等均证实克隆获得成功,且效率很高.与曼氏血吸虫肌动蛋白比较,核苷酸和推断的氨基酸的同源性分别是92.5%和99.7%.结论构建的pGEM5Zf-T载体对日本血吸虫肌动蛋白编码基因的PCR产物直接克隆既经济、简便,又快速、高效,所构建的T载体由于在插入位点两侧具有pUC/M13测序引物序列,可直接测定重组质粒中插入片段的核苷酸序列.所获得的日本血吸虫(大陆株)肌动蛋白编码基因与曼氏血吸虫有极高的同源性.