负性刺激分子PD-L对T细胞介导小鼠L929肿瘤细胞免疫效应的影响

目的：探讨负性刺激分子在肿瘤细胞逃避免疫效应中的作用.方法：以L929细胞为靶细胞,体内致敏C57BL/6小鼠,注入PD-L1、PD-L2抗体阻断,并设立未致敏对照组.分离小鼠脾细胞,体外采用3H-TdR掺入法、荧光标记双染色FCM以及PI染色FCM法分别检测淋巴细胞增殖反应、活化诱导的细胞凋亡以及脾细胞及其培养上清对肿瘤细胞的杀伤效应.结果：L929细胞表达PD-L1,而不表达PD-L2.体内与体外联合应用PD-L1抗体,能显著增强L929肿瘤细胞诱导的致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和特异性杀伤效应,并可抑制活化诱导的T细胞凋亡;PD-L1抗体亦可增加L929细胞诱导的未致敏组小鼠脾细胞的增殖活性和促进其脾细胞培养上清对L929细胞的杀伤效应.结论：PD-L1抗体可通过阻断PD1/PDL途径促进初始T细胞和致敏T细胞介导的抗瘤效应.     

Survivin特异性siRNA诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的 观察survivin特异性siRNA对胰腺癌细胞株Panc-1细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外构建Survivin特异性siRNA表达载体p-Survivin-siRNA,转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞系,RT-PCR和Western印迹法检验其对胰腺癌细胞株Panc-1细胞的RNA干扰(RNAi)效果.采用MTT法分析其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响.同时,采用Western印迹法检测半胱氨蛋白酶 3(caspase 3)的表达变化.结果 p-survivin-siRNA表达质粒高效而特异地剔降胰腺癌细胞株Panc-1细胞中survivin的表达,抑制肿瘤细胞增殖(P<0.01),阻断胰腺癌细胞株Panc-1细胞在G1期.随着survivin基因被沉默,caspase 3表达升高(P<0.01).结论 靶向survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制胰腺癌细胞株Panc-1细胞增殖,促进细胞凋亡.     

人白细胞介素2受体α链在因第三内含子的克隆与核苷酸序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体ａ链（ＩＬ２Ｒα）基因第三内含子２５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳＳＫ载体中。构建了一系列亚克隆并测定了２５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其数据已被ＧｅｎＢａｎｋ接受，接受号为Ｕ５６３８９。通过计算机分析发现ＩＬ２Ｒα基因第三内含子具有典型的Ｇ↓ＧＵ……Ｐｙｒｉｃｈ（∽１５ｂｐ）ＮＣＡＧ↓Ｇ结构特点，但在３’剪接点５’上游５００ｂｐ范围内未发现分支点结构，该序列的确定为进一步了解ＩＬ２Ｒα基因组的结构和变异剪接的机理奠定了基础     

抗血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa Fab抗体的原核表达及其生物活性

目的：研制抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa Fab抗体。方法：通过问接免疫荧光试验和血小板聚集抑制试验，选取鼠源抗血小板糖蛋白Ⅱb／Ⅲa单克隆抗体(mAb P140)。从分泌该mAb的杂交瘤细胞株(P140)中，克隆到抗体轻链基因和重链Fd段基因，构建原核表达重组质粒p3MH／P140x-Fd，并在XLI-Blu菌株中进行表达。采用钴亲和层析法对P140 Fab抗体进行纯化，用SDS-PAGE、ELISA和Western blot等方法，对P140 Fab抗体进行检测，并通过血小板聚集抑制试验，观察P140 Fab抗体的抗栓活性。结果：SDS-PAGE和Western blot表明，纯化的P140Fab抗体的相对分子质量(Mr)约为47000。ELISA的结果显示，P140 Fab抗体可与人血小板特异性结合。在体外ADP诱导的血小板聚集试验中，P140 Fab抗体对血小板聚集的抑制作用成剂量依赖性，IC50的平均值为16．85mg/L。结论：成功地研制出具有抗栓活性的抗血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa的Fab抗体。     

淋巴细胞经TCR－CD3活化增殖作用的分析

本文探讨了抗ＣＤ３单抗诱导的淋巴细胞活化增殖及有关影响因素。实验结果表明：①淋巴细胞内钙升高是淋巴细胞活化增殖的重要条件，ＣＤ３ＭｃＡｂ引起的早期胞浆游离钙迅速升高主要由内质网释放钙离子所致，而淋巴细胞增殖不仅需要细胞内钙释放，还需要细胞外钙内流；②ＧＴＰ结合蛋白是淋巴细胞激活过程的一重要环节，经Ｇ蛋白作用物霍乱毒素作用后，淋巴细胞ＤＮＡ合成显著降低；③新霉素和ＰＳＳ可抑制ＰＬＣ和ＰｋＣ的活性，对淋巴细胞ＮＤＡ合成造成剂量依赖性抑制作用。此外，抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导的淋巴细胞ＤＮＡ合成需要辅佐细胞的存在，高度纯化的Ｔ细胞对ＣＤ３ＭｃＡｂ的刺激不发生增殖反应。     

可与肝癌细胞系HepG2特异性结合的单链抗体的表达及其特性

目的:在原核细胞中表达经噬菌体抗体库筛选可与HepG2细胞特异性结合的单链抗体(scFv),并对其特性进行鉴定。方法:采用正常肝细胞系L02和肝癌细胞系HepG2,从人源噬菌体抗体库中筛选可与HepG2细胞特异结合的scFv。对scFv DNA测序后,以其阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在IPTG诱导下表达scFv并以金属离子螯和层析(IMAC)进行纯化,用100g/L SDS-PAGE、Western blot及ELISA分析纯化的scFv。将纯化的scFv与HepG2细胞共孵育后,观察其对细胞生长的影响。结果:经筛选获得的2个相对特异性的scFv,分别命名为SLH04及SLH10。经IPTG诱导获得可溶性scFv的表达。Western blot分析证明,表达产物的相对分子质量(Mr)均为36000左右,与理论预期值相符。ELISA检测表明,纯化的scFv能与HepG2细胞特异性结合,并抑制HepG2细胞的生长。结论:从人源噬菌体抗体库中,筛选出能与HepG2细胞特异性结合的scFv,并在大肠杆菌中表达,有望用于肝癌生物治疗的实验研究。     

不同反应靶细胞中IL—6对STATl激活的比较

探讨不同反应靶细胞中白细胞介素6(IL—6)对信号转导子与转录激活子1(STATl)的激活。方法：利用抗STATl和抗酪氨酸磷酸化STATl的抗体，进行免疫印迹分析。结果：IL—6可促进7TDl和TFl细胞生长，但在这两种细胞中对STATl的酪氨酸磷酸化水平没有明显影响。M1、R2和U937细胞在IL—6诱导下生长停止并向巨噬细胞方向分化，而IL—6在这3种细胞中均可激活STATl，且激活效应有剂量与时间依赖性。结论：STATl的活化可能与抑制效应有关。我们的数据有助于解释为什么IL—6在不同效应靶细胞中有不同的生物学效应。     

下颌骨的应力迹线与骨小梁构筑的关系

根据下頜光弹的等倾线图,描绘出主应力迹线规迹。在下颌侧位X线照片和去除唇侧及颊侧密质骨板的标本上,观察骨密质和松质的配布,以及骨小梁的排列和方向,试行探讨骨小梁方向与主应力迹线的关系。用光弹法求得的主应力迹线有两个系列:S_1系在下颌体近水平方向,在下颌支近垂直方向分布;S_2系力线与S_1系诸力线呈正交。在标本和X线照片上,主应力迹线规迹不同程度地在骨小梁的排列上有所反映。     

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定

本文应用人胎盘酸性铁蛋白免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经细胞融合制备出３株抗人胎盘酸性铁蛋白（ＰＡＦ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测证明，此单抗对人胎盘酸性铁蛋白的酸性部分反应较强，而与碱性部分反应较弱；间接免疫荧光法检测此单机与体外培养的肝癌细胞株７７２１起反应，而与白血病细胞株Ｄａｕｄｉ、肺癌细胞株９２６，以及外周血单个核细胞均不起反应。     

化学交联的抗TNF和抗CALLA双功能抗体的制备及其导向功能研究

本文探索了用抗 CALLA 和抗 TNF 的双功能抗体导向 TNF 杀伤 CALLA 阳性白血病细胞的可行性.用化学交联剂 SPDP 制备了抗 TNF 和抗 CALLA 抗体的交联物,经鉴定为双功能抗体;与 TNF 联合使用,在 CALLA 阳性白血病细胞系 nalm—6上进行体外杀伤实验。MTT 比色法测定杀伤效果。我们发现经双功能抗体导向后,nalm—6细胞对 TNF 的敏感性明显增加。