血清apo A1,apoB及其比值在冠心病临床应用的初步分析

本文观察了冠心病(CHD)患者血清apoA1、apoB、TC、HDL-C、LDL-C、VLDL-C、TG含量,并作临床应用的初步分析。结果表明:(1) apoA1明显降低,apoB和apoB/A1比值明显升高;(2) HDL-C明显降低,LDL-C、VLDL-C和TG明显升高。而TC变化不明显;(3) 在77例患者中、TG升高为33例(42.86%),TC升高为10例(12.99%);(4) apoB/A1比值作为CHD诊断的生化指标阳性符合率最高(72.73%)。     

聚合酶链反应在MLCK表达载体构建中的应用

用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法扩增 出含有Ｓａｌ Ⅰ位点和转录起始点ＡＴＧ的肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎ Ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）ｃＤＮＡ片段，并入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，构建成能在宿主细胞中表达的表达本，并通过酶切图谱、ＳａｌⅠ位点ＤＮＡ序列是到证实。为进一步研究ＭＬＣＫ的表达奠定基础。     

MEK转染的内皮细胞表达人内皮细胞特异性分子-1的初步研究

目的人内皮细胞特异性分子-1(Human endocellular-specific molecule-1, ESM-1)表达载体的构建及其体外表达,表达产物的纯化及多克隆抗体和单克隆抗体的制备.重组MEK基因的真核转染,转染的内皮细胞中ESM-1的表达. 方法用PCR方法扩增ESM-1的基因片段,扩增产物与T-Vector连接,构建克隆载体pGEM-T- ESM-1.在宿主菌中扩增重组质粒,提取质粒并进行酶切纯化,将目的基因插入pET-28b中构建成表达载体,再次转化入大肠杆菌XL1-blue,蓝白选择、耐药性标记粗筛并挑取阳性克隆,经限制性内切酶酶谱分析、DNA序列分析两种方法鉴定.然后提取质粒,转化入大肠杆菌BL-21,用IPTG诱导表达.表达产物行SDS-PAGE,割下所需条带,用电洗脱方法纯化得到所需目的蛋白.免疫新西兰纯种大白兔,制备多抗,并用免疫双扩散法测定抗体效价;免疫BALB/C小鼠,制备抗人ESM-1的单克隆抗体.用重组MEK( )基因转染人脐静脉内皮细胞ECV304,加以鉴定,并检测转染细胞中ESM-1表达的改变. 结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为pET-28b-ESM-1重组质粒,SDS-PAGE证实获得的融合蛋白分子量为24 ku,表达量约占菌体总蛋白的24%.所得多抗效价为1:16(免疫双扩散),单抗效价为1:6000(ELISA).重组MEK基因转染成功,用Western blot和免疫荧光的方法检测显示,转染不同活性型重组MEK基因的ECV304其ERK-2的表达量不同, ESM-1的表达量在转染不同活性型重组MEK基因的细胞中也不同,都是转染高活性型的细胞中表达量最高,转染野生型的细胞中次之,未转染的ECV304中表达最少. 结论成功获得ESM-1的表达载体, 并在大肠杆菌中获得表达,成功制备了抗ESM-1的多克隆抗体和单克隆抗体.在转染了不同活性型重组MEK基因的ECV304细胞中,ESM-1的表达量有改变,在转染高活性型重组MEK基因的细胞中表达量最高,转染野生型重组MEK基因的细胞次之,未转染的ECV304中ESM-1的表达量最少.说明ESM-1可能是MAPK信号转导通路上的一个重要的成分,并在肿瘤转移以及肿瘤血管生成中发挥作用.     

p16基因第二外显子纯合性缺失检测对肺癌所致胸液的临床价值

目的　探讨p16基因第二外显子纯合性缺失检测对肺癌所致胸腔积液的临床价值。方法　用PCR技术检测 31例肺癌胸液及 21例结核性胸腔积液中p16基因第二外显子纯合性缺失的情况,同时送检胸液脱落细胞学作为对照分析。结果　表明所检 21例结核性胸液无p16基因第二外显子纯合性缺失, 31例肺癌胸液标本中有 12例出现第二外显子纯合性缺失,缺失率为 38 7% ( 12 /31 )。同时 16例脱落细胞学检测阳性,阳性率为 51 62% (16 /31)。在 15例脱落细胞学阴性中,有 6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失,两者联合检测阳性率提高至 70 97% (22 /31),明显高于单独检测(P<0 05)。另外,p16基因第二外显子纯合性缺失与肿瘤细胞的组织学类型、转移、预后相关。本组研究表明鳞癌出现p16基因第二外显子缺失的机率虽高于腺癌但差异无显著性;而有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0 005)。同时,在 12例p16基因纯合性缺失的患者中有 9例已发生一处以上的肺外转移,预后极差。结论　检测胸液p16基因第二外显子纯合性缺失对肺癌胸腔积液的诊断有重要价值,且特异性高;与脱落细胞学联合检测,可补充和提高其诊断阳性率,对鉴别癌性和结核性胸腔积液及判断肺癌的预后有一定的参考意义。     

糖尿病大鼠组织中微量元素分析

目的 研究糖尿病大鼠组织内微量元素与糖尿病的关系。方法 用原子吸收分光光度法测定实验大鼠肝、骨、毛发、皮中的微量元素Cu、Fe、Mg、Zn、Ca。结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠体重减少（P〈0．01）,肝钙降低（P〈0．01）、肝锌升高（P〈0．01）、毛铜降低（P〈0．05）、毛镁升高（P〈0．05）、骨铁锌升高（P〈0．05）、皮锌升高（P〈0．01）。结论 糖尿病大鼠伴有体内严重的的钙流失,锌在肝、骨、皮中,铁在骨中有代谢障碍而导致沉积。     

蛋白酶体激活因子REGγ的重组表达及其体外功能的初步探讨

目的蛋白酶体激活因子11S调节蛋白复合物γ亚单位（11S regulator complex gamma subunit,REGγ）的重组表达,初步探讨其与骨形成负调控分子酪蛋白激酶-2相互作用蛋白-1（caseinkinase-2interactingprotein-1,CK-IP-1）的相互作用。方法首先以质粒pCMV-Myc-REGγ为模板,通过聚合酶链反应（PCR）扩增出765bp的REGγcDNA片段,然后亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-2并转化入大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,表达产物超声破碎后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定,进而通过GSTPull-down实验验证REGγ是否与CKIP-1存在相互作用。结果通过测序证实原核表达载体pGEX-4T-2-REGγ构建成功,进一步表达鉴定发现GST-REGγ蛋白主要以可溶性的形式存在于裂解上清中;GSTPull-down实验表明REGγ与CKIP-1存在明显的相互作用。结论REGγ与CKIP-1在体外存在相互作用,为进一步深入研究REGγ对CKIP-1的调控作用奠定了基础。     

肺腺癌所致恶性胸腔积液中Survivin蛋白的表达及临床意义

目的 探讨Survivin蛋白在肺腺癌所致恶性胸腔积液中的表达及其临床意义.方法 采用免疫细胞化学和蛋白印迹技术检测49例恶性胸腔积液和25例良性胸腔积液中Survivin蛋白的表达,同时送检胸液脱落细胞学作为对照,分析Survivin与肺腺癌所致恶性胸腔积液的临床特征和疗效之间的关系.结果 Survivin在恶性胸腔积液中的阳性表达率为81.6%(40/49),明显高于胸液细胞学检查的阳性率57.1%(28/49),二者比较差异有显著性(P＜0.05),联合检测阳性率达87.7%;同时也显著高于良性组8.00%(2/25)(P＜0.05).Survivin的表达在患者性别、年龄、吸烟、有无淋巴结转移和远处转移中差异无显著性;在恶性组中,胸水Survivin蛋白表达阳性患者治疗有效率为52.5%(21/40),明显低于阴性患者的88.8%(8/9)(P＜0.05);但细胞质和细胞核之间差异无显著性(P＞0.05).结论 肺腺癌所致恶性胸腔积液中Survivin蛋白的表达明显增高,检测胸水Survivin的表达可作为恶性胸腔积液早期诊断的一个新的生物标记物,对鉴别良恶性胸腔积液和预测恶性胸腔积液疗效有一定的参考价值.