miR-210对血管内皮细胞VEGF-Notch信号通路的调控

目的: 观察过表达miR-210对血管内皮细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-Notch信号通路相关分子表达的影响,探讨miR-210调控血管新生的分子机制。方法: 采用常规方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)。通过转染LV- miR-210-GFP重组慢病毒载体上调内皮细胞miR-210表达,实验分为miR-210过表达组(LV- miR-210-GFP)和对照组(LV-GFP)。采用real-time PCR检测miR-210的表达变化,流式细胞术检测ephrin-A3的表达,采用real-time PCR、Western blotting、免疫荧光细胞化学染色法分别检测VEGF-Notch信号通路相关分子VEGF、VEGF 2(VEGFR 2)、Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果: Real-time PCR结果显示,与对照组相比,miR-210过表达组miR-210表达水平上调了(32.10±1.26)倍;流式细胞术结果显示,miR-210过表达组阳性细胞率 较对照组 明显增加(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,miR-210过表达组 VEGF、VEGFR2、Notch1 mRNA分别较对照组上调了(7.40±0.67)、(2.50±0.10)、(9.70±0.72)倍,P<0.05;免疫荧光结果显示,miR-210过表达组VEGF和VEGFR2红色荧光信号均显著强于对照组(P<0.05)。Western blotting 结果显示,miR-210过表达组血管内皮细胞中Notch1的蛋白表达量(4.22±0.60)较对照组明显升高(P<0.05)。结论: miR-210过表达可显著上调VEGF-Notch信号通路分子的表达水平。     

microRNA-1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的研究microRNA-1(miRNA-1)能否诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化。方法构建大鼠miRNA-1表达载体,分离扩增培养及鉴定大鼠MSCs。脂质体法转染大鼠第4代MSCs,实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测转染miRNA-1质粒后MSCs的miRNA-1表达水平。分别于转染2、4和6 d后用RT-PCR检测心肌重要转录因子GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达,免疫荧光检测心肌特异蛋白I(cTnI)的表达。结果 90%以上的MSCs表达MSCs重要标志物CD29、CD44;未检测到造血前体细胞标志抗原CD34、白细胞标志抗原CD45的表达。转染miRNA-1质粒后,miRNA-1表达水平明显上调。转染miRNA-1质粒2、4和6 d后,GATA4、NKx2.5和MEF2C的mRNA表达逐渐增强。第4和6天后可见cTnI阳性表达细胞。结论 miRNA-1能诱导大鼠MSCs向心肌样细胞分化。     

多囊肾患者家系血清miRNA-15a和miRNA-17表达水平的比较

目的 观察比较miRNA-15a和miRNA-17存多囊肾患者家系中的表达水平,探讨miRNA与多囊肾病发生发展的可能关系.方法 采用实时定量PCR技术检测多囊肾患者及其家系成员与正常人血清中miRNA-15a和miRNA-17的表达水平.结果 所检测的多囊肾患者家系中已出现肾功能损害的多囊肾患者血清miRNA-15a...     

人真皮多能干细胞移植后在缺血性损伤脑组织中的迁移与分布

目的探讨经股静脉移植的大鼠真皮多能干细胞在缺血性损伤脑组织中的存活、迁移及分布情况。方法分离培养人真皮来源的多能干细胞(skin-derived precursors,SKPs),采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h后行再灌注,于再灌注24h后将CM-DiI标记的人真皮来源的SKPs经大鼠股静脉输入动物模型体内,植入后分别在第1、3、5d处死大鼠,作冰冻切片,采用免疫组织荧光染色法,检测SKPs在脑缺血大鼠体内的存活、迁移及分布情况。结果在移植了SKPs后的MCAO大鼠脑组织冰冻切片中,荧光显微镜下可见移植的SKPs。静脉移植的细胞主要分布在缺血灶的周围,健侧脑组织中偶见移植细胞。结论经股静脉移植的SKPs,能够在宿主缺血的脑组织中存活,并向损伤部位迁移。     

TNF-α诱导宫颈癌细胞增殖、转移和耐药相关基因表达的时效分析

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF-α）对宫颈癌Hela细胞增殖、转移和化疗耐药相关基因表达的影响。方法以外源性TNF-α作用于宫颈癌Hela细胞。作用不同时间点（0—24h）取样分析细胞周期蛋白cyclinD1,锌指蛋白A20,钙调神经磷酸酶CaN,基质金属蛋白酶（MMP-1,MMP-9）,金属硫蛋白（MT-1,MT-2）等表达的时间一效应。结果TNF-α作用宫颈癌Hela细胞不同时间段（20min,1h,6h,24h）,cvclinD1、A20、CaN、MMP-1、MMP-9、MT-1、MT-2 mRNA的表达都有不同程度改变。RT—PCR检测宫颈癌Hela细胞经TNF-α作用后cyclinD1、MMP-1、MT-2 mRNA的表达6小时达高峰24小时回落,A20、CaN、MMP-9、MT-1 mRNA表达1小时达高峰24小时回落。结论TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞cyclin D1、A20、CaN、MMP-1、MMP-9、MT-1、MT-2 mRNA的表达具有时效性。TNF-α可能促进宫颈癌Hela细胞增殖、转移及耐药。     

大鼠非细菌性前列腺炎模型的复制

目的探讨大鼠非细菌性前列腺炎模型的制备方法,为非细菌性前列腺炎的治疗研究提供组织学依据。方法将弗氏完全佐剂（CFA）直接注射SD（Sprague-Dawley）雄性大鼠前列腺内,手术后3、7、10 d分批解剖,进行外观和组织学观察。结果形成典型的非细菌性前列腺炎动物模型。结论弗氏完全佐剂（CFA）可以成功制做大鼠非细菌性前列腺炎,为本病的治疗提供一种可靠的动物模型,并为本病的进一步研究提供一条实验性途径。     

大量输血时血浆与浓缩红细胞不同比例输注对产后大出血患者凝血功能的影响

目的:探讨早期榆注不同比例血浆和浓缩红细胞对产后大出血患者凝血功能的影响.方法:回顾性分析我院2003年1月至2009年6月间41例产后大出血患者进行大量输血时第一个24 h血浆与浓缩红细胞的输注情况,根据输注的血浆量和浓缩红细胞量的不同比例,将患者分为3组:低比例组(血浆/浓缩红细胞=1/7),中比例组(血浆/浓缩红细胞=1/2.5),高比例组(血浆/浓缩红细胞=1/1.2),并比较产前与输血后凝血相关的实验室数据.结果:低比例组输血后PT、AP几明显延长(P<0.01),Fb明显下降(P<0.01);中比例组输血后PT、APTT无延长(P>0.05),但Fb下降(P<0.01);高比例组输血后PT、APTT、Fb保存正常水平(P>0.05).结论:产后大出血患者大量输血时血浆与浓缩红细胞的比例过低可造成血液稀释性低凝,建议大量成分输血时将血浆与浓缩红细胞配为1:1比例榆注.     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖及Notch1表达的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖的影响及Notch1表达的变化.方法 用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组.采用免疫荧光细胞染色法检测各组缺血侧室管膜下区Nestin、Ki-67及Noteh1的表达.结果 (1)BMSC移植组缺血侧室管膜下区Nestin和Ki-67阳性细胞数较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高;(2)BMSC移植组缺血侧室管膜下区Notch1的表达明显高于单纯缺血组和假手术对照组.结论 BMSC移植可促进脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖,且可能与促进Notch1表达有关.     

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

背景:缺血性脑损伤后,如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复?脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤。阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生。而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用?目的:探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:江西医学院第二附属医院神经外科,江西医学院生理教研室,江西医学院泌尿外科研究所。材料:实验于2001-05/2002-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成。雄性Wistar大鼠85只,体质量250～300g。方法:大鼠随机分为四组:①非缺血对照组(10只):仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉。②缺血对照组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉10min。③缺血预处理组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉2min后24h再次夹闭颈总动脉10min。④阿魏酸钠联合缺血预处理组(25只):缺血预处理后,再次夹闭颈总动脉前30min,尾静脉注射阿魏酸钠(200mg/kg)。非缺血对照组分为再灌注后2,7d二个亚组(各5只);缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6,12,24h,2,7d五个亚组(各5只)。各组在相应时点将大鼠断头取脑,于视交叉后2.2mm切取冠状脑片,观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数的影响。主要观察指标:皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数。结果:实验大鼠85只均进入结果分析。①大脑皮层及海马CA1神经元计数:缺血7d时,缺血预处理组和阿魏酸钠 缺血预处理组高于缺血对照组(268±8.5,244±12.5,135±5.6,P<0.01)。②大脑皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞计数:阿魏酸钠 缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组(12h:1.2±0.8,15.5±2.1,39.8±3.9;24h:1.8±1.6,39.3±11.8,191.3±19.1;2d:2.8±1.2,68.3±13.6,328.4±24.0,P<0.01);缺血预处理组低于缺血对照组(P<0.01)。结论:缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数,阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

多囊肾患者家系血清miRNA-15a和miRNA-17表达水平的比较

目的观察比较miRNA-15a和miRNA-17在多囊肾患者家系中的表达水平,探讨miRNA与多囊肾病发生发展的可能关系。方法采用实时定量PCR技术检测多囊肾患者及其家系成员与正常人血清中miRNA-15a和miRNA-17的表达水平。结果所检测的多囊肾患者家系中已出现肾功能损害的多囊肾患者血清miRNA-15a的表达水平明显高于正常人及肾功能正常的多囊肾患者;而miRNA-17在多囊肾患者家系未表达。结论多囊肾患者血清miRNA-15a表达水平与正常人不同,提示miRNA在多囊肾的发生发展过程中可能起重要调控作用,值得深入研究。