LPS刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体(TLR)4及肿瘤坏死因子α表达的变化(英文)

革兰阴性菌败血症休克的发生主要是因为免疫系统对细菌LPS应答,产生过量细胞因子和炎性介质从而引起组织和器官损害。研究发现与果蝇Toll蛋白类似的哺乳动物Toll样受体家族在宿主防御中起重要作用,其中TLR4介导针对LPS的免疫应答。它们对病原体的保守结构产生应答并且激活单核细胞和中性粒细胞产生细胞因子和炎性介质。本研究观察LPS刺激后体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR4表达及最重要的炎性细胞因子之一的肿瘤坏死因子α分泌水平的变化。方法常规方法从BALB/C小鼠腹腔中分离出巨噬细胞(Mφ),细胞分为6组,分别加入LPS使其终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml,5%CO2,37℃孵育2h。流式细胞术测定Mφ表面TLR4的表达。同时取培养液上清采用ELISA方法检测TNFα。实验重复三次。结果①经0.01μg/mlLPS刺激的MφTLR4-PE阳性率与0μg/mlLPS组相比,P<0.05。其它浓度刺激组TLR4阳性率则与对照组无差异,P>0.05。Mφ细胞TLR4MFI随着LPS浓度的升高而增强,除了10μg/mlLPS组,其余各组MFI与对照组相比,P<0.05。②随着LPS浓度增加,...     

大胚龄人神经干细胞长期冻存后的复苏培养

目的探讨长期冻存后的大胚龄人胚神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的生长及其生物学特性。方法分别于冻存后6、12及24个月,快速解冻复苏胚龄为16～20周的胎脑细胞,采用无血清培养液悬浮培养,观察培养细胞的活性及成球时间,采用免疫细胞化学方法鉴定这些细胞球及其分化成熟后的细胞表面标志。结果培养传代的细胞透亮﹑成球时间短,与取自新鲜胎脑的神经干细胞无明显区别。细胞球Nestin染色阳性,成熟分化后神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及2＇,3＇-环腺苷酸-3＇-磷酸二酯酶（CNPase）抗原呈阳性。结论长期冻存后的人大胚龄神经干细胞仍具有较强增殖能力及多分化潜能。     

定向诱导的骨髓基质细胞移植后在大鼠缺血脑组织中的分布

目的探讨人骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）源神经细胞体内移植后的分布状况。方法采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离、纯化人MSCs。MSCs经bFGF预诱导24h及阿魏酸钠（Sodium Ferulate）诱导24h后用于移植。采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型．缺血2h后行再灌注，24h后经栓塞侧颈内动脉注入诱导后的MSCs（5×10^6/0．8ml）（n=61。2w后取脑组织行冰冻切片．通过检测人细胞核特异抗体MAB1281来鉴定移植的人MSCs。结果MSCs经阿魏酸钠诱导后．细胞逐渐圆缩并伸出突触．呈现神经细胞样形态。在移植大鼠脑内可检测到MAB1281呈阳性表达的人MSCs．且MSCs主要分布在缺血侧损伤灶的周围，明显高于对侧同部位及其它脑区。结论人MSCs源神经细胞移植后在大鼠脑内存活并主要聚集在脑内缺血灶的周围。     

小鼠胚胎干细胞在胎肾微环境中共培养后表达肾标志物

胚胎干（ES）细胞是一种多潜能细胞具有分化成为来自三个胚层各种细胞甚至包括生殖细胞的能力。最新的研究表明，胚胎于细胞在与胚胎脏器细胞共培养后可以定向分化为多种特定细胞表型，他们包括肝细胞、心肌细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞．并在某些情况下甚至可能形成成熟的器官组织结构。已有研究报道说明ES细胞通过在体外环境中直接形成拟胚体（EBs）可以分化成为肾细胞．并且最新的研究成果表明分离自这些EBs的细胞移植入体内后可以形成肾近端小管样结构并且未在其周同发现畸胎瘤形成。但是ES细胞是否可以通过和胎肾细胞相互作用继而获得定向分化并未见诸报道。在实验中我们发现．在与小鼠胎肾细胞共培养后．ES细胞分化成为了肾系细胞。处理后的ES细胞可以检测到与肾发育相关的特征基因．如WT-1、exm-2和Wnt-4基因的表达．我们也发现了终末分化的肾细胞标志物．如podocalyxin、Nephl和RSOR基因的表达。在实验前后，我们同样探寻了ES细胞多分化潜能标记分子的基因表达情况，结果显示共培养后分化的ES细胞Oct-4、Nanog和Klf-4基因表达明显减弱。综上，胎肾细胞微环境可能促使ES细胞定向分化为肾系细胞，提示胚胎器官细胞微环境在ES细胞转分化过程中可能扮演了重要作用。     

自体骨髓细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区新生血管形成的作用

背景：骨髓细胞移植是一种简单而有效的促进新生血管生长的治疗手段。同样新生血管的形成和血液循环的再建立，对于脑缺血区域受损而未死亡神经元的修复以及为植入的组织与细胞的成活和分化提供必要的环境条件均具有重要意义。而自体骨髓细胞移植是否会促进脑缺血区新生血管的形成进行血运重建目前尚不清楚。目的：探讨经颈动脉移植自体骨髓细胞对脑缺血区新生血管形成的影响。设计：以实验动物为研究对象，随机对照的验证性研究。单位：一所大学医院的神经外科和泌尿外科研究所。材料：实验于2002-09／2003-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室，江西医学院泌尿外科研究所完成。选择雄性SD大鼠10只，体质量250～300g，清洁级。干预：复制局灶性脑缺血大鼠模型，经颈动脉注入自体骨髓细胞。动物随机分为实验组5只，经颈动脉注入自体骨髓细胞，对照组5只注入生理盐水。通过免疫组织化学染色方法进行微血管计数。观察脑缺血区血管增生状况。主要观察指标：微血管密度。F8因子免疫组化染色。结果：自体骨髓细胞移植后大鼠在皮质缺血区的微血管密度为(159．15&;#177;40．4)血管数／mm^2，明显较对照组大鼠(81．70&;#177;32．18)血管数／mm^2多，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。骨髓细胞移植组皮质缺血区可见很多散在的单个内皮细胞。而相应的脑缺血对照组少见散在的单个内皮细胞。结论：经颈动脉注入的自体骨髓细胞能够促进脑缺血区新生血管的形成。     

缺血性脑损伤后MicroRNA 210及其靶基因ephrinA3的表达变化

Mir-210为缺氧特异性微小RNA(microRNA),缺氧环境下表达稳定上调~([1]);且有证据表明内皮细胞中过表达mir-210可下调其靶基因ephrinA3的蛋白表达,进而显著促进内皮细胞形成血管~([2]).我们通过构建大鼠急性脑缺血模型,观察脑缺血后各时间点缺血皮质区mir-210及其靶基因ephrinA3的表达变化,对其在脑缺血后血管新生过程中可能起到的调控作用进行了初步探讨.     

芳香/脂肪共聚酯生物材料与大鼠骨髓间充质干细胞的相容性实验*

背景：芳香族聚酯生物降解性很差,不能单独作为降解材料使用,南昌大学材料科学与工程学院通过对苯二甲酰氯、双酚A、己二醇和低聚乳酸通过熔融共缩聚和酯交换的方法合成出一种新型生物可降解材料——芳香/脂肪共聚酯,已申请专利。 目的：观察芳香/脂肪共聚酯生物材料与大鼠骨髓间充质干细胞的相容性。 设计、时间及地点：细胞-材料学体外实验,于2006-04/2007-04在南昌大学第一附属医院泌外研究所完成。 材料：健康雄性SD大鼠5只,由江西中医学院实验动物中心提供。生物可降解聚酯材料为本项目小组正在研制的一种新的脂肪族/芳香族共聚脂。 方法：通过溶液浇铸法将可降解聚酯(聚对苯二甲酸双酚A酯-co-对苯二甲酸己二酯-co-乳酸)材料制备成共聚酯生物膜,同法制备聚氯乙烯生物膜。将共聚酯生物膜消毒后浸于细胞培养基中,收集材料浸提液,过滤灭菌保存,同法制备聚氯乙烯浸提液。取第三四代大鼠骨髓间充质干细胞,以2×107 L-1密度接种于96孔板中,以1.3×105个/孔接种于含上述制备的无菌共聚脂生物膜的24孔板内。分为3组：①阴性对照组,单纯加入DMEM培养基。②实验组,在加入DMEM培养基的基础上,分别加入12.5%,25%,50%,100%的材料浸提液。③阳性对照组,在加入DMEM培养基的基础上,加入聚氯乙烯浸提液。 主要观察指标：通过中性红摄取法、碱性品红染色法、MTT还原检测法,对材料毒性进行评价,电镜观察细胞在生物膜上的生长情况。 结果：培养1,3,5,7 d后,阳性对照组细胞活力及代谢能力有不同程度的下降(11%~16%);实验组与阳性对照组吸光度值比较差异有显著性意义(P < 0.001),随培养时间延长,细胞活力、数量及代谢能力均稍有增强(1%~4%);实验组与阴性对照组吸光度值比较无明显差异(P > 0.05)。电镜扫描及吖啶橙/溴化乙啶染色结果显示,接种第1天骨髓间充质干细胞即可附着在共聚酯生物膜表面呈梭形生长,随时间的延长细胞逐渐增多,表现出良好的附着性,凋亡及坏死率较低。 结论：初步证明芳香/脂肪共聚酯生物材料对细胞生长无毒性作用,且具有较好的细胞相容性,基本符合生物材料的应用要求。 关键词：芳香/脂肪共聚酯;生物材料;组织工程;细胞相容性     

氯化镧对内毒素/脂多糖诱导巨噬细胞株一氧化氮合酶表达的抑制作用

目的了解氯化镧（LaCl3）对内毒素／脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响，并探讨其机制。方法将小鼠巨噬细胞株RAW264．7分为空白对照组、LaCl、组、LPS组和LaCl3＋LPS组。前3组细胞分别用常规培养液、含2．50μmol／L LaCl3的培养液、含1mg／L LPS的培养液培养24h，LaCl3＋LPS组用含2．5μmol／LLaCl，的培养液培养24h后，换为含1mg／L LPS的培养液培养24h。采用免疫细胞化学染色法检测iNOS在各组细胞中的表达强度；蛋白质印迹法检测iNOS的蛋白表达水平；反转录一PCR测定iNOS的mRNA表达水平；硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清液中一氧化氮（NO）含量。结果免疫细胞化学染色结果显示，iNOS主要分布于各组细胞的胞质中，空白对照组和LaCl3组荧光强度极弱；LPS组荧光强度最强，阳性细胞百分率为44．4％，明显高于LaCl3＋LPS组（11．8％，P〈0．05）。LPS组iNOS蛋白及其mRNA表达量和细胞培养上清液中NO含量均高于其余各组（P〈0．05）。结论LaCl3可在mRNA水平和蛋白水平抑制LPS诱导的iNOS过度表达，减少NO生成，提示LaCl3能拮抗LPS诱导的iNOS过度活化。