水仙环素通过调控PLK1/AKT信号通路诱导三阴性乳腺癌细胞细胞周期阻滞和凋亡

摘 要：目的 研究水仙环素（Narciclasine，Nas）对人三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer，TNBC）细胞周期和凋亡的抑制作用及分子机制。方法 采用细胞增殖-毒性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）、克隆形成、Transwell、流式细胞术等实验分析Nas对TNBC细胞株MDA-MB-231细胞增殖和侵袭能力的抑制作用，及对细胞周期和凋亡的诱导作用；利用免疫印迹（Western blot，WB）实验分析Nas对MDA-MB-231细胞株cle-Caspase-3、PARP、cle-PARP、PLK1、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、CDK1、Cyclin B、Cyclin A、p-21、p-27、p-62、LC3、γ-H2AX等蛋白质的影响。结果 不同浓度的Nas（浓度分别为0.5 μmol/L、1.0 μmol/L、2.0 μmol/L）能抑制MDA-MB-231细胞株的克隆形成（48 h抑制率分别为15.99%、24.76%和54.17%）、侵袭能力（48h抑制率分别为0.68%、23.20%和45.27%），可将细胞周期阻滞于G2期（48 h阻滞率分别为75.50%、140.56%和316.06%），可对细胞凋亡起到诱导作用（48 h凋亡诱导率分别为105.39%、199.73%和375.74%；72 h凋亡诱导率分别为104.45%、244.96%和709.60%）。分子机制实验显示Nas可以显著促进cle-Caspase-3、cle-PARP、γ-H2AX、p-21及p-27等蛋白质的表达，显著抑制PLK1、p-PI3K、p-AKT、CDK1、Cyclin B等蛋白质的表达水平，而对PARP、p-62、LC3-II/I、PI3K、Cyclin A等蛋白质的表达水平影响不明显。结 论 Nas能抑制MDA-MB-231细胞株的克隆形成、侵袭能力，对凋亡起到诱导作用，并将细胞周期阻滞于G2期，该机制可能通过调节PLK1/AKT信号通路来实现。     

雷公藤甲素促进三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究雷公藤甲素（Tpl）对人三阴性乳腺癌（TNBC）细胞凋亡的促进作用及可能的分子机制。方法体外培养TNBC细胞株MDA-MB-453细胞并分为4组,对照组正常培养,Tpl低、中、高剂量组分别添加10、20和40nmol/L的Tpl;MDA-MB-453细胞分别转染胎盘特异性8基因（PLAC8）过表达质粒和空载体质粒,添加或不添加20nmol/L处理,分别记作过表达组、过表达+Tpl组、空载组、空载+Tpl组。采用细胞增殖和毒性检验（CCK-8）法检测细胞增殖能力,采用克隆形成实验分析克隆形成能力,采用Transwell实验分析细胞迁移能力;应用流式细胞术检测细胞凋亡情况;利用Westernblot法分析切割型半胱氨酸蛋白酶（Cle-Cas-pase）-3、Cle-Caspase-9、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、PLAC8、Wnt3a及β-连环蛋白（β-catenin）相对表达量。结果与对照组比较,低、中、高剂量组细胞克隆形成率及迁移率均降低,凋亡率均升高,Cle-Caspase-3、Cle-Caspase-9、Bax蛋白相对表达量均升高,Bcl-2、Wnt3a、β-catenin、PLAC8蛋白相对表达量均下降（均P＜0.05）。与空载组比较,空载+Tpl组的上述指标表达趋势一致,过表达组上述指标表达均相反（均P＜0.05）。与过表达组比较,过表达+Tpl组各指标差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论Tpl能促进MDA-MB-453细胞株凋亡,该机制可能与PLAC8介导的Wnt/β-catenin信号通路有关。