慢性肝病患者血清VitD3水平与骨代谢的关系

检测了部分慢性乙型肝炎（下简称慢乙肝）及肝硬化患者的血清1，25（OH）2D3，骨钙素（BGP），甲状旁腺素（PTH），钙，磷及尺桡平均密度（BMD），并与对照组比较，结果两组患者血清1，25（OH）2D3，BGP及BMD值均明显下降，肝硬化组下降尤为显著，肝硬化组血清PTH显著升高，两组患者血钙明显降低，而血磷三组间无差异，1，5（OH）2D3水平与BGP，BMD呈显著正相关；PTH与血钙，BMD无相关性。提示慢性肝病患者存在以骨形成减少为主的骨代谢紊乱，其中血清1，25（OH）2D3减少为关键因素，PTH虽升高，但与肝病患者骨密度变化无相关。     

CD3AK杀伤机理及其杀伤活性调控效应的初步研究

应用抗CD3单抗和人rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞制备人CD3AK细胞(CDAK).采用LDH释放法、ABC-CELISA法、流式细胞术等方法观察了CD3AK杀伤癌细胞的机理及人rIFN-α、rIFN-γ、rTNF细胞因子、化疗药顺氨氯铂(CDDP)和阿霉素(ADM)对CD3AK杀伤活性的调控效应.结果表明,①粘附分子ICAM-1/LFA-1参与CD3AK的杀瘤过程,并且rIFN-α、rTNF的促CD3AK杀伤效应亦是通过上述途径实现的.③CD3AK通过分泌可溶性杀伤因子间接杀伤癌细胞.③CD3AK通过膜相关TNF参与杀伤效应.④CD3AK介导癌细胞凋亡.⑤化疗药CDDP和ADM处理癌细胞后,提高其对CD3AK杀伤活性的敏感性,CDDP促杀伤效应与其上调癌细胞表面ICAM-1、HLA-ABC抗原表达有关.     

HLA-G反义基因增强免疫效应细胞杀伤活性的研究

目的:研究HLA-G反义寡核苷酸逆转肿瘤细胞免疫逃逸,提高免疫效应细胞识别杀伤活性的作用和机制.方法:采用反义核酸技术合成HLA-G反义寡核苷酸(ASODN),硫代化修饰与脂质体形成复合物,转导入高表达HLA-G的绒毛膜癌细胞系JEG-3.采用RT-PCR方法检测HLA-G mRNA表达水平的变化;流式细胞术检测细胞表面HLA-G蛋白表达水平的变化;MTT法检测:NK杀伤活性、CD3AK杀伤、增殖活性的变化;ELISA方法探讨ASODN调节CD3AK细胞因子IFN-γ产生的变化.结果:HLA-G ASODN可显著抑制HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,逆转可溶型HLA-G分子对NK细胞杀伤活性的抑制作用;可部分逆转HLA-G分子对CD3AK细胞产生IFN-γ的抑制作用,并增强CD3AK的增殖活性,增强JEG-3细胞对CD3AK的杀伤敏感性.结论:HLA-G ASODN通过抑制肿瘤细胞HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,增强NK,CD3AK的杀伤作用和机制,发挥逆转肿瘤细胞免疫逃逸作用.     

淫羊藿苷、黄芩苷联合多柔比星抑制肝癌细胞APRIL表达和逆转肿瘤免疫逃逸

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(icarrin,ICA)、黄芩苷(baicali,BAI)联合化疗药多柔比星(doxorubicin,又称ADM)抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体(proliferation-inducing ligand,APRIL)的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖和逆转肿瘤细胞免疫逃逸的作用和机制。方法:MTT法检测25μg/ml ICA、200μg/ml BAI、2μg/ml ADM以及12.5μg/ml ICA 1μg/ml ADM、100μg/ml BAI 1μg/ml ADM等5个用药处理组与未用药对照组HepG2细胞的增殖活性;RT-PCR检测APRIL及其受体HSPG、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平;MTT法检测CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)对用药处理组和未用药对照组HepG2细胞的杀伤活性。结果:ICA、BAI以及ADM对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈时间依赖效应;ICA、ADM、ICA ADM、BAI ADM组作用96 h抑制率最高,分别为(29.30±6.62)%、(63.60±1.35)%、(99.03±0.10)%、(98.89±0.18)%(均P<0.01)。HepG2细胞高表达APRIL及其受体HSPGmRNA。ICA、BAI以及ADM下调HepG2细胞APRILmRNA以及凋亡相关蛋白bcl-2 mRNA的表达水平。ICA、BAI、ADM以及ICA ADM、BAI ADM能增加HepG2细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性,杀伤率由对照组的(30.00±4.50)%分别增加到(97.23±5.11)%、(93.12±9.88)%、(60.45±5.71)%、(43.87±8.2)%、(47.25±2.68)%(均P<0.01);且经CD3AK作用后,HepG2细胞bcl-2 mRNA的表达进一步下调。结论:ICA、BAI联合ADM抑制HepG2细胞APRIL、bcl-2 mRNA的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖;同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。     

干扰素在肿瘤细胞凋亡信号传导通路中的作用及影响

干扰素(IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子。近年来研究发现, IFN与肿瘤细胞表面受体结合后,主要通过JAK／STAT信号途径来调节一系列IFN刺激基因的表达,影响肿瘤细胞凋亡传导通路及某些凋亡调节因子,增强肿瘤细胞对凋亡信号的敏感性,诱导肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤效应。     

淫羊藿苷体内抑瘤作用及其机制

目的：探讨淫羊藿苷（icariin，ICA）对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及其机制。方法：肝癌细胞株H22右腋皮下接种C57BIM6小鼠，建立小鼠体内荷移植瘤模型。接种H22细胞后24h，用高、中、低不同剂量（9、4．5、2．25mg／ml）的ICA和环磷酰胺（cyclophosphamide，Cy）（30mg／kg）进行局部注射治疗，待荷瘤对照组肿瘤长至1g左右，各组小鼠称重，处死。留自凝血，取血清检测TNF—α；依次取脾脏及肿瘤组织称重；取1／2脾脏和肿瘤组织制成单细胞悬液，剩余的用10％中性甲醛溶液固定，做病理切片和H—E染色以及TUNEL实验；脾单细胞悬液用流式细胞术（FACS）检测CD3、CD4、CD8、DX5等抗原分子的表达；肿瘤单细胞悬液用AnnexinV／PI双染检测肿瘤细胞的早期与晚期凋亡情况，同时取适量的瘤细胞用70％乙醇固定以FACS检测肿瘤细胞周期各时相的分布情况。结果：Cy治疗组抑瘤率为67．16％，ICA高、中、低剂量治疗组抑瘤率分别为24．63％、32．84％、5．22％。AnnexinV／PI双染结果表明，Cy治疗组与ICA治疗组早期凋亡细胞率均高于荷瘤对照组[Cy组为（9．11±1．584）％，ICA组为（7．14±1．376）％，荷瘤对照组为（3．6±2．38）％]。TUNEL结果显示，ICA治疗组凋亡指数为（5．35±0．73）％，显著高于荷瘤对照组中的凋亡指数[（1．03±1．17）％]（P〈0．01）。正常小鼠血清中未检测到TNF—α的存在，而ICA治疗组及Cy治疗组中检测到微量TNF-α。病理检测表明，ICA中、高剂量组肿瘤组织中出现较多的灶状及小片状坏死，包膜处及肿瘤边缘可见瘤细胞坏死，包膜及肿瘤组织中可见少量的炎细胞（淋巴细胞与单核细胞）浸润。结论：ICA有显著的抑瘤作用，可能通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。     

c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和黏附活性的抑制作用

目的观察c-myc反义基因抑制人高转移性肺癌PG细胞增殖,下调侵袭黏附性的作用和机制.方法合成c-myc反义寡核苷酸,经脂质体包裹,转导入c-myc高表达的PG细胞中.RT-PCR方法检测c-myc mRNA表达水平的变化,流式细胞术检测c-myc蛋白的表达.MTT法检测细胞增殖活性,黏附实验检测PG细胞的黏附性.结果c-myc反义基因(＞0.625μmol/L)对PG细胞c-myc mRNA、蛋白表达和细胞增殖活性具有明显的抑制作用,其处理PG细胞72 h后,20～80 min不同时间的细胞黏附百分率,从50.0%,81.27%和90.0%分别显著下降到31.5%,37.5%和30.0%(P＜0.05),下降呈时间依赖效应.结论c-myc反义基因抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达水平,同时下调增殖活性和侵袭黏附性.     

乳腺癌组织中Fas和CTLA-4及RhoBTB2基因表达及其与临床病理因素的关系

目的 探讨乳腺癌组织中Fas、CTLA-4和RhoBTW2基因表达的临床意义.方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测60例原发乳腺癌患者癌组织和30例乳腺正常腺体组织中Fas、CTLA-4和RhoBTB2基因的mRNA表达,分析其与患者临床病理因素的关系.结果 乳腺癌组织中Fas、CTLA-4及RhoBTB2基因的相对表达量分别为0.699±0.285、1.045±0.302和0.625±0.160,而在乳腺正常腺体组织中分别为0.502±0.178、0.418±0.140和0.843±0.218,差异有统计学意义(P<0.01).腋淋巴结转移患者乳腺癌组织中Fas基因的表达(0.782±0.313)显著高于无转移患者(0.557±0.146,P<0.01),Ⅱ期患者乳腺癌组织中CTLA-4基因的表达(0.978±0.330)低于Ⅲ期患者(1.134±0.240,P<0.05),浸润性导管癌患者乳腺癌组织RhoBTB2基因的表达(0.597±0.157)低于浸润性小叶癌(0.717±0.145,P<0.05).Fas、CTLA-4和RhoBTB2的mRNA表达均与乳腺癌患者年龄、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)状态和生存时间无关,且3者间亦无显著相关(P>0.05).结论 Fas、CTLA-4和RhoBTB2的mRNA表达均与乳腺癌发生、发展有关.Fas mRNA表达与腋淋巴结转移有关,CTLA-4 mRNA表达与乳腺癌分期有关,RhoBTB2 mRNA表达与乳腺癌病理类型有关.     

蛋白酶体抑制剂对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人肝癌细胞系BELT402体外增殖和凋亡的影响。方法：用MG-132处理体外培养的BEL7402细胞，采用MTT法测细胞的生长抑制率，Annexin V／PI法、电镜、DNA片段分析观察MG-132对细胞凋亡的诱导作用及比色法测半胱天冬酶cagpage-3活性的变化。结果：MG132可明显抑制BEL7402细胞体外增殖，随着MG132浓度的增加和处理时间延长，细胞凋亡率增加，电镜观察发现，经MG-132处理后的部分细胞具有凋亡细胞的典型形态特征，细胞DNA抽提电泳发现特征性凋亡梯状条带，caspase-3活性显著升高。结论：MD132可抑制人肝癌BEL7402细胞增殖并促进其凋亡。