慢性肝病患者血清VitD3水平与骨代谢的关系

检测了部分慢性乙型肝炎（下简称慢乙肝）及肝硬化患者的血清1，25（OH）2D3，骨钙素（BGP），甲状旁腺素（PTH），钙，磷及尺桡平均密度（BMD），并与对照组比较，结果两组患者血清1，25（OH）2D3，BGP及BMD值均明显下降，肝硬化组下降尤为显著，肝硬化组血清PTH显著升高，两组患者血钙明显降低，而血磷三组间无差异，1，5（OH）2D3水平与BGP，BMD呈显著正相关；PTH与血钙，BMD无相关性。提示慢性肝病患者存在以骨形成减少为主的骨代谢紊乱，其中血清1，25（OH）2D3减少为关键因素，PTH虽升高，但与肝病患者骨密度变化无相关。     

CD3AK杀伤机理及其杀伤活性调控效应的初步研究

应用抗CD3单抗和人rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞制备人CD3AK细胞(CDAK).采用LDH释放法、ABC-CELISA法、流式细胞术等方法观察了CD3AK杀伤癌细胞的机理及人rIFN-α、rIFN-γ、rTNF细胞因子、化疗药顺氨氯铂(CDDP)和阿霉素(ADM)对CD3AK杀伤活性的调控效应.结果表明,①粘附分子ICAM-1/LFA-1参与CD3AK的杀瘤过程,并且rIFN-α、rTNF的促CD3AK杀伤效应亦是通过上述途径实现的.③CD3AK通过分泌可溶性杀伤因子间接杀伤癌细胞.③CD3AK通过膜相关TNF参与杀伤效应.④CD3AK介导癌细胞凋亡.⑤化疗药CDDP和ADM处理癌细胞后,提高其对CD3AK杀伤活性的敏感性,CDDP促杀伤效应与其上调癌细胞表面ICAM-1、HLA-ABC抗原表达有关.     

HLA-G反义基因增强免疫效应细胞杀伤活性的研究

目的:研究HLA-G反义寡核苷酸逆转肿瘤细胞免疫逃逸,提高免疫效应细胞识别杀伤活性的作用和机制.方法:采用反义核酸技术合成HLA-G反义寡核苷酸(ASODN),硫代化修饰与脂质体形成复合物,转导入高表达HLA-G的绒毛膜癌细胞系JEG-3.采用RT-PCR方法检测HLA-G mRNA表达水平的变化;流式细胞术检测细胞表面HLA-G蛋白表达水平的变化;MTT法检测:NK杀伤活性、CD3AK杀伤、增殖活性的变化;ELISA方法探讨ASODN调节CD3AK细胞因子IFN-γ产生的变化.结果:HLA-G ASODN可显著抑制HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,逆转可溶型HLA-G分子对NK细胞杀伤活性的抑制作用;可部分逆转HLA-G分子对CD3AK细胞产生IFN-γ的抑制作用,并增强CD3AK的增殖活性,增强JEG-3细胞对CD3AK的杀伤敏感性.结论:HLA-G ASODN通过抑制肿瘤细胞HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,增强NK,CD3AK的杀伤作用和机制,发挥逆转肿瘤细胞免疫逃逸作用.     

淫羊藿苷、黄芩苷联合多柔比星抑制肝癌细胞APRIL表达和逆转肿瘤免疫逃逸

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(icarrin,ICA)、黄芩苷(baicali,BAI)联合化疗药多柔比星(doxorubicin,又称ADM)抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体(proliferation-inducing ligand,APRIL)的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖和逆转肿瘤细胞免疫逃逸的作用和机制。方法:MTT法检测25μg/ml ICA、200μg/ml BAI、2μg/ml ADM以及12.5μg/ml ICA 1μg/ml ADM、100μg/ml BAI 1μg/ml ADM等5个用药处理组与未用药对照组HepG2细胞的增殖活性;RT-PCR检测APRIL及其受体HSPG、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平;MTT法检测CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)对用药处理组和未用药对照组HepG2细胞的杀伤活性。结果:ICA、BAI以及ADM对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈时间依赖效应;ICA、ADM、ICA ADM、BAI ADM组作用96 h抑制率最高,分别为(29.30±6.62)%、(63.60±1.35)%、(99.03±0.10)%、(98.89±0.18)%(均P<0.01)。HepG2细胞高表达APRIL及其受体HSPGmRNA。ICA、BAI以及ADM下调HepG2细胞APRILmRNA以及凋亡相关蛋白bcl-2 mRNA的表达水平。ICA、BAI、ADM以及ICA ADM、BAI ADM能增加HepG2细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性,杀伤率由对照组的(30.00±4.50)%分别增加到(97.23±5.11)%、(93.12±9.88)%、(60.45±5.71)%、(43.87±8.2)%、(47.25±2.68)%(均P<0.01);且经CD3AK作用后,HepG2细胞bcl-2 mRNA的表达进一步下调。结论:ICA、BAI联合ADM抑制HepG2细胞APRIL、bcl-2 mRNA的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖;同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。     

干扰素在肿瘤细胞凋亡信号传导通路中的作用及影响

干扰素(IFN)是一类具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子。近年来研究发现, IFN与肿瘤细胞表面受体结合后,主要通过JAK／STAT信号途径来调节一系列IFN刺激基因的表达,影响肿瘤细胞凋亡传导通路及某些凋亡调节因子,增强肿瘤细胞对凋亡信号的敏感性,诱导肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤效应。     

c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和黏附活性的抑制作用

目的观察c-myc反义基因抑制人高转移性肺癌PG细胞增殖,下调侵袭黏附性的作用和机制.方法合成c-myc反义寡核苷酸,经脂质体包裹,转导入c-myc高表达的PG细胞中.RT-PCR方法检测c-myc mRNA表达水平的变化,流式细胞术检测c-myc蛋白的表达.MTT法检测细胞增殖活性,黏附实验检测PG细胞的黏附性.结果c-myc反义基因(＞0.625μmol/L)对PG细胞c-myc mRNA、蛋白表达和细胞增殖活性具有明显的抑制作用,其处理PG细胞72 h后,20～80 min不同时间的细胞黏附百分率,从50.0%,81.27%和90.0%分别显著下降到31.5%,37.5%和30.0%(P＜0.05),下降呈时间依赖效应.结论c-myc反义基因抑制PG细胞c-myc mRNA和蛋白表达水平,同时下调增殖活性和侵袭黏附性.     

蛋白酶体抑制剂对人肝癌细胞BEL7402凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对人肝癌细胞系BELT402体外增殖和凋亡的影响。方法：用MG-132处理体外培养的BEL7402细胞，采用MTT法测细胞的生长抑制率，Annexin V／PI法、电镜、DNA片段分析观察MG-132对细胞凋亡的诱导作用及比色法测半胱天冬酶cagpage-3活性的变化。结果：MG132可明显抑制BEL7402细胞体外增殖，随着MG132浓度的增加和处理时间延长，细胞凋亡率增加，电镜观察发现，经MG-132处理后的部分细胞具有凋亡细胞的典型形态特征，细胞DNA抽提电泳发现特征性凋亡梯状条带，caspase-3活性显著升高。结论：MD132可抑制人肝癌BEL7402细胞增殖并促进其凋亡。     

特异性ASODN抑制Fas表达降低FasL介导细胞凋亡的研究

为了研究特异性Fas反义寡核苷酸(ASODN)对T细胞Fas表达及肝癌细胞诱导其凋亡的抑制作用,用脂质体介导法将Fas ASODN导入Jurkat T细胞,并通过用流式细胞术、RT-PCR及与肝癌细胞共培养方法研究Fas ASODN对T细胞Fas表达、Fas mRNA水平及凋亡的影响。结果显示:①Hep G2.2.15细胞表达有功能的FasL,可诱导Jurkat细胞凋亡;②Jurkat细胞转染Fas ASODN后,Fas mRNA降低;细胞表面Fas表达下降;与Hep G2.2.15细胞共培养后的凋亡率下降。表明Fas ASODN转染可以部分逆转肝癌细胞对T细胞的凋亡诱导作用。     

淫羊藿甙逆转转化生长因子β2对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用

探讨淫羊藿甙逆转转化生长因子 β2 (TransformingGrowthFactorβ2 ,TGFβ2 )对LAK、CD3AK细胞的免疫抑制作用及其机制。方法 :采用MTT法 ,RT PCR和流式细胞术。结果 :淫羊藿甙能逆转受TGFβ2 抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性 ,并能部分恢复受TGFβ2 抑制的LAK细胞表面IL 2Rα表达和CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平 ,以及CD3AK细胞的增殖活性。结论 :淫羊藿甙通过恢复LAK细胞IL 2Rα表达 ,提高CD3AK细胞内穿孔素mRNA水平及促进CD3AK增殖 ,逆转TGFβ2 对LAK、CD3AK的免疫抑制作用。