逆转录病毒载体介导的反义c-myc抗白血病作用的研究

目的：研究c-myc基因在L6565小鼠白血病发生中的作用以及抑制其表达所起的治疗作用。方法：用逆转录病毒载体pGNC构建一个含有小鼠反义c-myc基因的逆转录病毒表达系统pGNCas。用磷酸钙沉淀法将pGNCas导入包装细胞PA317,筛选获得病毒生产细胞。用pGNCas病毒感染L6565白血病克隆细胞,筛选后,获得抗G418阳性克隆细胞L6565as。PCR方法检测反义c-myc序列是否稳定整合入L6565as细胞中。最后从细胞生长、形态、周期、软琼脂集落形成能力以及c-myc基因表达方面观察其恶性和表型的改变。结果：L6565as细胞形态变圆,大小较一致。生长曲线显示:L6565as细胞生长被抑制;流式细胞仪检测细胞周期：L6565as阻滞于G₀/G₁期,S期细胞减少;软琼脂集落形成试验发现L6565as细胞形成克隆数明显减少。免疫组化检测：L6565as细胞c-myc蛋白表达呈弱阳性,而对照组细胞呈强阳性。结论：c-myc基因在L6565小鼠白血病的发生中起着重要的作用;抑制c-myc的表达,可部分逆转L6565白血病的恶性表型和恶性行为。     

小鼠SRS实体瘤的生物学、病理学和电子显微镜观察

1971年,本室在昆明种小鼠建立了SRS淋巴细胞腹水型瘤株,对其生物学特性和超微结构及其提取液的致白血病活性进行了研究。SRS腹水瘤细胞注射小鼠皮下可以产生实体肿瘤,移植发生率可达100％,对多种抗癌药物较敏感,可用于实验肿瘤研究和药物筛选。现将SRS实体瘤的生物学、病理学和电镜观察结果报道如下。     

类胰蛋白酶通过PAR2激活JAK-STAT通路促进小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1表型转换

 目的  研究类胰蛋白酶促进小鼠巨噬细胞表型转换的作用及其机制。方法 体外分离培养小鼠巨噬细胞(对照组),并诱导为M1和M2亚型,经类胰蛋白酶和PAR2激动剂分别作用后,通过real-time PCR和Western blot检测巨噬细胞亚型标志物以及JAK STAT信号通路的变化。结果  成功分离培养小鼠骨髓来源的巨噬细胞,并诱导其分化为M1和M2亚型。PAR2激动剂（2-Furoyl-LIGRLO-amide）和类胰蛋白酶分别与M1型巨噬细胞分别作用后,M1型标记物iNOS和IL-12高于对照组,而M2型标记物arg1和mrc1与对照相比无明显变化,提示类胰蛋白酶和PAR2激动剂可以促进巨噬细胞向M1型转化,而不会促进M1型向M2型转化。PAR2激动剂和类胰蛋白酶分别与M2型巨噬细胞作用后,M2型标记物arg1和mrc1明显下降,而M1型标记物iNOS和 iL-12有所增加,提示类胰蛋白酶和PAR 2激动剂均可促进M2型向M1型转化。类胰蛋白酶作用于M1型巨噬细胞后,JAK2磷酸化水平、STAT和p STAT的表达水平均无明显变化。类胰蛋白酶作用于M2型巨噬细胞后,JAK2的磷酸化随着时间延长明显升高,STAT的磷酸化水平同时升高,提示类胰蛋白酶可以通过和PAR2结合而激活JAK2-STAT信号通路,进而引起M2型向M1型转化。结论  类胰蛋白酶可能通过与其受体PAR2相互作用后激活JAK-STAT通路,促进小鼠骨髓来源的巨噬细胞向M1亚型转化,起到促进炎症发展的作用,从而进一步加重动脉粥样硬化的发展。     

外泌体在肝癌中作用的研究进展

 外泌体(exosome)是一种具有脂质双分子层膜结构的微小囊泡,直径为30～100 nm,几乎可由所有细胞分泌,含有细胞特异的蛋白质、脂质和核酸等物质,能把信号分子传递给靶细胞从而改变其生物学功能。目前对于外泌体在肝癌中作用的研究引起了广泛关注。由于外泌体的内容物可以反映其来源细胞的特性,从而区分正常组织和病变组织,并在人体内广泛存在且获取便捷,故有望成为肝癌检测、诊断和治疗的生物标志物。本文对外泌体miRNA在肝癌发展过程中潜在的生物学效应及外泌体在肝癌中的相关作用作一综述。     

肥大细胞类胰蛋白酶促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435的跨膜侵袭

 目的 研究类胰蛋白酶对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435侵袭力的影响及其机制。方法 通过体外细胞侵袭力试验观察不同浓度、不同时间类胰蛋白酶对乳腺癌MDA-MB-435细胞跨膜侵袭力的影响，并利用RT-PCR以及明胶酶谱法研究类胰蛋白酶对基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制物（tissue inhibitor of metalloproteinases-2，TIMP-2）表达水平的调节。结果 150～500pmol/L的类胰蛋白酶可以促进MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭；还可以促进MMP-2、TIMP-2的mRNA表达（P<0.01）和MMP-2的蛋白表达（P<0.05）。 结论 类胰蛋白酶可以促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭，该作用可能与增加MMP-2的mRNA和蛋白表达、TIMP-2的mRNA表达相关。     

SRS淋巴瘤株癌基因表达筛选研究

研究ＳＲＳ鼠白血病／淋巴瘤克隆株（包括ＳＲＳ─８２亲系和ＳＡＣ─ⅡＢ２、ＳＡＣ─ⅡＣ３克隆株）癌基因和癌基因蛋白的表达，筛选此克隆株的癌基因表达谱型，为ＳＲＳ淋巴瘤株的实验性反义核酸治疗提供目标。用ＡＢＣ免疫组织化学方法筛选ＳＲＳ─８２亲系和ＳＡＣ─ⅡＢ２、ＳＡＣ─ⅡＣ３克隆株癌基因表达诺型。在ＳＲＳ克隆株中呈强表达的有ｃ─ｆｏｓ和ｃ─ｍｙｃ。ｃ─ｊｕｎ、ｒａｓ─ｐ２１和ｃ─ｅｒｂＢ─２呈中度表达，Ｐ５３和ｂｃｌ─２则不表达。同时用ＣＤ４和ＣＤ８细胞表面标记进研究，发现ＳＲＳ克隆株属于原始干细胞。结果提示：癌基因谱型的建立对ＳＲＳ淋巴瘤克隆株的实验性反义核酸治疗具有相当重要的作用，ｃ─ｆｏｓ和ｃ─ｍｙｃ可能是反义核酸治疗最好的癌基因靶。     

病毒性L6565白血病细胞克隆株的建立及其特性研究进展

Ｔ638和Ｌ6565模型是目前国内仅有的两株ＲＮＡ病毒诱发的白血病 ,均属于我国天津 (Ｔ) -上海 (Ｓ) -遵义 (Ｚ)小鼠白血病系统之内[1 ,2 ] 。近年来未见Ｔ638白血病研究的进一步报道 ,情况不详。Ｌ6565病毒性淋巴细胞白血病是由程立等于 1 965年建立的瘤株[3～ 6] 。 1 986年张雷等[7] 应用Ｌ6565白血病小鼠外周血液无细胞提取液感染ＮＩＨ/3Ｔ3细胞 ,在体外建成了Ｌ6565-Ｂ1 细胞系 ,惜已失传。最近 ,殷莲华等[8] 将Ｌ6565白血病小鼠脾脏在灭菌条件下制成细胞悬液后 ,用ＲＰＭＩ 1 640液和 1 0 %小牛血清中培养 2 0代后 ,再用有限稀释法置…     

反义c-myc基因抗L6565白血病作用的研究

小鼠Ｌ６５６５白血病是我国特有的ＴＳＺ实验性白血病／淋巴瘤系统中的实验动物模型之一［１］。我室用Ｌ６５６５白血病小鼠的脾脏细胞悬液以有限稀释法建立了Ｌ６５６５细胞株,在对其早期癌基因进行筛选时,发现ｃｍｙｃ基因过度表达,这提示ｃｍｙｃ的高表达可能与Ｌ６５６５白血病的发生机制有关［２］。为了进一步探索ｃｍｙｃ与Ｌ６５６５白血病发病机制的关系及反义ｃｍｙｃ对其治疗作用,我们针对高表达的ｃｍｙｃ构建了一个含有反义ｃｍｙｃ基因的逆转录病毒载体,观察它对Ｌ６５６５白血病细胞株恶性表型和恶性…     

肥大细胞和类胰蛋白酶与心血管疾病

肥大细胞分泌的类胰蛋白酶具有多种生物学活性。这些活性与某些心血管疾病的发生发展密切相关。实验证实,在扩张型心肌病和缺血性心肌病患者的心脏组织中,类胰蛋白酶的含量要高于正常心脏组织。活化的肥大细胞可以通过多种机制降解细胞外基质,其中类胰蛋白酶促进基质金属蛋白酶的生成起到了关键的作用。此外,类胰蛋白酶能够降解纤维蛋白原,诱导内皮细胞、成纤维细胞及平滑肌细胞的增殖,降解纤维连接蛋白。它的这些活性在动脉粥样硬化、血管重构和新生以及血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡的过程中均起到了重要的作用。