应用PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种

目的 建立快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种的方法.方法 将7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物(Mtbc1-7)进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过对扩增产物的不同系带型进行分析,对已知标准株和96株临床分离株进行菌种鉴定.结果 用3株结核分枝杆菌复合群(MTBC)标准株,9株非分枝杆菌标准株以及27株非结核分枝杆菌的分枝杆菌(MOTT)对7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物进行特异性鉴定,结果证明引物Mtbc1能鉴定出分枝杆菌和非分枝杆菌;引物Mtbc2能鉴定出MOTT和MTBC;引物Mtbc3能鉴定出田鼠分枝杆菌;引物Mtbc4能从MTBC中识别出牛分枝杆菌和卡介苗;引物Mtbc5能鉴定出非洲分枝杆菌Ⅱ型和结核分枝杆菌;引物Mtbc6和引物Mtbc4结合能鉴定出卡介苗;引物Mtbc7和引物Mtbc5联合能鉴定出canettii分枝杆菌.96株临床分离株经7对引物扩增,扩增结果显示MOTT 20株,牛分枝杆菌1株,卡介苗1株,canettii分枝杆菌3株,田鼠分枝杆菌3株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,caprae分枝杆菌1株,结核分枝杆菌或非洲分枝杆菌Ⅱ型64株.结论 应用PCR技术鉴定结核分枝杆菌复合群菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值.     

寡核苷酸探针膜杂交法检测耐药结核菌

目的应用寡核苷酸探针膜杂交法快速检测临床分离株中结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)的耐药性。方法设计与合成用于检测结核分枝杆菌3种药物常见耐药基因的寡核苷酸探针,点于硝酸纤维素膜上,与结核分枝杆菌临床分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交。结果26株耐INH菌株中,16株Klb杂交阳性;7株inhla杂交阳性;23株耐SM菌株中,17株rpsl基因突变型探针Slb杂交阳性,2株突变型探针rrslb杂交阳性;31株耐EMB菌株中,13株Elb杂交阳性,1株Elc杂交阳性,5株Eld杂交阳性,1株Ele杂交阳性,11株与El探针杂交。kagG、inhA、rp-sL、rrs和embB基因膜杂交突变检出率分别为61.5%,26.9%,74%,8.7%和64.5%,与PCR-DS分析结果一致。结论寡核苷酸探针膜杂交技术可能成为检测部分结核分枝杆菌耐药基因型简便、快速的方法。     

69例"复治肺结核"患者的病原菌构成、耐药性的临床分析

目的了解复治肺结核患者的细菌学及耐药情况和临床特征。方法分析69例临床分离株的耐药情况。应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行了菌种鉴定。结果结果表明,利福平(REP)、异烟肼(INH)链霉素(SM)、吡嗪酰胺(PZA)和乙胺丁醇(EMB)耐药率分别为79.7%,68.1%,76.8%,69.5%和44.9%。非结核分支杆菌4株,为堪萨斯分支杆菌2株,鸟胞内分支杆菌1株,偶然脓肿分枝杆菌1株。3例治愈,1例死亡。结论复治肺结核病人中有一小部分为非结核分支杆菌肺病患者,菌型鉴定非常重要,有助于诊断和治疗。     

Rv1196基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的 用PCR方法从结核菌基因组中扩增Rv1196基因,将之重组到pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白纯化后通过免疫印迹反应初步鉴定其抗原性和特异性.方法 提取H37Rv标准株的基因组DNA;设计Rv1196基因两端的引物,通过PCR方法从基因组DNA中扩增出Rv1196抗原的基因,直接连接到pGEMT载体上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序的质粒用NdeI和XhoI双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-39;转化BL21并优化表达条件,采用金属鏊合层析纯化重组蛋白;选取7例结核病阳性临床血清标本和7例健康人血清标本进行Western blot分析.结果 获得了氨基酸编码序列正确的基因,与数据库中报道一致;Rv1196基因能够在大肠杆菌中高效表达,其表达量约占细菌总蛋白的30%以上;重组抗原不与健康人血清反应,但与结核标本血清呈强烈反应.结论 重组Rv1196抗原具有较好的特异性和抗原性,有较好的血清学分析价值.     

活血化瘀汤联合护理干预对髌骨骨折患者膝关节功能及血液流变学的影响

目的 研究活血化瘀汤联合护理干预对髌骨骨折患者膝关节功能及血液流变学的影响.方法 从2018年6月—2019年12月收治的髌骨骨折患中者选取100例作为此次治疗的研究对象,将其分为对照组和试验组,2组的分组标准主要依据随机数字表法,2组均50例患者.对照组患者接受固定手术治疗联合护理干预,试验组患者在对照组基础上联合活...     

肺结核病人的利复星药代动力学研究

目的 :研究利复星口服给药后在肺结核病人体内的药代动力学特性。方法 :采用高效液相色谱法测定血清中利复星浓度 ,以 3P97药代动力学程序处理数据。结果 :8例肺结核患者口服 4 0 0mg利复星后 ,体内过程符合一室开放模型。血峰浓度于 1.2 2h到达 ,为 4 .5 2± 0 .72mg/L ,一次给药 2 4h后最低血药浓度为 0 .5 2±0 .2 6mg/L ,血浆药物浓度 -时间曲线下面积AUC为 4 8.35± 5 .38mgh/L ,半衰期为 6 .4 9± 1.70h ,表观分布容积V/FC为 77.4 8± 8.33L。结论 :肺结核病人服用利复星 ,应注意给药剂量及给药间隔 ,使患者 2 4h体内血药浓度维持在最低杀菌浓度MBC之上。     

应用基因芯片技术检测耐利福平结核分枝杆菌基因型

目的研制一种新型DNA芯片，用于快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计探针并制作DNA芯片，用TAMRA标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的片断，与DNA芯片杂交，同时以PCR-SSCP和DNA测序法为对照。结果240株结核分枝杆菌临床分离株中，55株全敏感株和66株耐其他药物的利福平敏感株的PCK—SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同；119株耐RFP临床分离株中DNA芯片杂交有117株检测到rpoB基因突变，其中111株单位点突变，78株为531住密码子TCG→TTG（Ser→Leu）、TCG→TGG（Ser→Trp）和TCG→TAC（Ser→Tyr）突变；24株为526位蓉码子CAC→TAC（His→Tyr）、CAC→GAC（His→Asp）、CAC→CCC（His→Pr0）、CAC→CTC（His→Leu）和CAC→CGC（His→A职）突变；4株为516住客码子GAC→GTC（Asp→Val）和GAC→GGC（Asp→Gly）突变；3株为533位密码子CTG→CCG（Leu→Pro）突变；1株为511位密码子CTG→CCG（Leu→Pro）突变；1株为513位密码子CAA→AAA（Gln→Lys）突变；6株为双位点突变，其中3株511和516位联合突变，2株533和515住联合突变，1株517位密码子CAG→CAC（Gln→His）和518位密码子AAC→GAC（Asn→Asp）联合突变。DNA测序结果与DNA芯片杂交结果完全一致。1株516位GAC—TAC（Asp→Tyr）突变的分离株及1株516位GAC—TAC（Ssp→Tyr）和518住AAC—CAC（Asn→His）联合突变的分离株DNA芯片检测阴性，是因为芯片上无相应的探针。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。可用于临床耐药性的检测，指导临床用药。     

分支杆菌耐乙胺丁醇分子机制的研究进展

分支杆菌耐药性的出现一直是结核病治疗中的棘手问题 ,许多感染了耐药性分支杆菌的患者 ,都因缺乏及时的诊断和治疗而使病情加重甚至死亡。近年来国内外学者从分子遗传学的角度对利福平 (ＲＦＰ)、异烟肼 (ＩＮＨ)、链霉素(ＳＭ)、吡嗪酰胺 (ＰＺＡ)、喹诺酮类 (ＦＱ)的耐药分子机制做了详尽的研究 ,分支杆菌耐药基因检测方法也日趋成熟。乙胺丁醇 (ＥＭＢ)是具有广谱抗分支杆菌活性的一线抗结核合成药物 ,是和ＩＮＨ、ＲＦＰ、ＳＭ、ＰＺＡ联合治疗结核病的药物之一 ,被广泛用于治疗鸟分支杆菌、堪萨斯分支杆菌、蟾蜍分支杆菌、海分支杆菌…     

老年矽肺结核患者血清肿瘤坏死因子水平的临床观察

为了解老年矽肺结核患者的免疫状况 ,采用放射免疫法检测了 6 9例老年矽肺结核患者的血清肿瘤坏死因子 (TNF)水平 ,并与老年肺结核患者和健康老年人做了比较。结果发现 :老年矽肺结核和老年肺结核患者的TNF水平 ,均显著低于健康老年人 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,老年矽肺结核患者和老年肺结核患者血清TNF水平相差无显著性 (P >0 .0 5 )。TNF水平与痰菌无明显相关。老年肺结核患者和老年矽肺结核患者机体免疫力低下 ,在治疗中应加用免疫调节剂     

SARS患者血清干扰素-2α和肿瘤坏死因子水平检测

目的　观察SARS患者血清干扰素-2α(IFN-2α)和血清肿瘤坏死因子(TNF)含量变化。方法 用放射免疫法检测了66例SARS患者血清IFN-2α和TNF含量,并与正常对照组作了比较。结果 SARS组进展期患者IFN-2α含量明显高于对照组,重型SARS患者血清IFN-2α含量高低不一。SARS组进展期患者TNF含量明显高于对照组,重型SARS患者血清TNF含量明显高于普通型。结论 患者血清IFN-2α和TNF含量变化提示细胞免疫参与了机体的免疫反应,重症SARS患者IFN-2α和TNF含量变化反映了患者的免疫机能状况差异。