建立长期保存结核分支杆菌的方法

结核分支杆菌的生存主要依靠培养基的各种营养物质,培养基质量的优劣直接关系到细菌寿命的长短、生长的状况和是否产生变异.多次转种不同质量的培养基,也可使细菌产生变异.因此,寻找结核分支杆菌长期保存方法是十分重要的课题.     

应用基因阵列法快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的　研制一种新型的基因阵列 ,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测。方法　根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列 ,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断 ,与基因阵列杂交 ,同时以聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序法为对照。结果　 111株结核分枝杆菌临床分离株经PCR SSCP分析 ,4 1株RFP敏感株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同 ;70株耐RFP菌株中 ,6 3株(90 % )SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株不同 ,其余 7株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同。基因阵列检测结果 4 1株RFP敏感株杂交图谱与标准株完全相同 ,70株耐RFP临床分离株中 ,6 3株检测到rpoB基因突变 ,检出率为 90 % ;其中 37株 (5 3% ) 5 31位丝氨酸 (Ser)置换 ,15株 (2 1% ) 5 2 6位组氨酸(His)置换 ,11株 (16 % )其他位置的氨基酸置换。基因阵列检测结果与PCR SSCP及测序结果一致。结论　用基因阵列法可简便、快速、准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。     

结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB／c小鼠1个月后，将小鼠随机分成2组，第1组用利福平（RFP）、异烟肼（INH）治疗12周，第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗（免疫5次）联合治疗12周；治疗结束后4和8周，分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周，第2组小鼠体质量均超过第1组，但无显著性差异（P〉0．05）。治疗结束后4周，第2组肺、脾脏指数（0．017，0．011）均略低于第1组（0，020，0，012）（P〉0．05）；治疗结束后8周，第2组肺、肝脏指数（O．021，0．047）均略低于第1组（0．022，0．048）（P〉0．05）；而第2组脾脏指数（0．008）显著低于第1组（0．012）（P〈0．05）。治疗结束后4周，第2组有4例脾脏未见明显病变，第1组仅1例脾脏未见明显病变；治疗结束后8周，第2组有1例肺门淋巴结肿大，而第1组有3例；第2组有5例脾脏未见明显病变，第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周，第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少，分别减少70％和80％。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

严重急性呼吸道综合征患者血清肿瘤坏死因子含量变化及其临床意义

目的 观察严重急性呼吸道综合征(SAPS)患者血清肿瘤坏死因子(TNF)含量变化。方法 采用放射免疫法检测66例SARS患者血清TNF含量，并与对照组(正常人)进行比较。结果 SAPS组进展期患者TNF含量明显高于对照组，重型SARS患者血清TNF含量明显高于普通型。结论 患者血清TNF含量变化提示细胞免疫参与了机体的免疫反应，重症SARS患者TNF含量变化反映了细胞因子效应的两面性。     

总结本地区7个月甲型H1N1流感病毒传播的特点

目的检测7个月疑是甲型H1N1流感病毒特异片断,分析本地区H1N1流感病毒的流行病学特点。方法采用实时荧光定量（Real Time RT-PCR）法,对2039例可疑病例的咽拭子、鼻拭子进行检测。结果检测出甲流患者791例,检出率为38.79%（791/2039）;甲流H1N1157例,检出率为7.7%（157/2039）,各月检出率均有不同。结论本地区甲型流感是在8月开始多发,以普通甲流感染为主,甲型H1N1流感混在其中,本地区的传播高峰是在10月。     

肺炎误诊为肺结核83例分析

随着抗生素耐药率的上升 ,使肺炎的临床症状和Ｘ线影像有别于经典的肺炎表现 ,难治性肺炎比例增加 ,肺炎误诊率随之上升。自 1993～ 1998年 9月住我院治疗的 35 0例肺炎病人中 ,有 83例误诊为肺结核 ,误诊率为 2 3.71%。现将其报告如下。1　临床资料1.1　一般资料　本组 83例 ,男 47例 ,女 36例 ,年龄11～ 6 9岁 ,平均 44岁。1.2　临床表现　本组除 9例外其余的都有不同程度的咳嗽、咯痰、发热、气短等。其中 5 3例盗汗、乏力、午后低热 ,体温波动于 37.2～ 38℃。咯黄脓痰 18例 ,有臭味。出现程度不等的咯血 2 8例 ,最大咯血量达 30 0ｍｌ …     

斑点免疫金渗滤法在结核病快速诊断和鉴别诊断中的应用价值

近年来 ,结核病日益引起人们重视 ,多种检查结核病的方法已陆续报道[1～ 3] ,我们采用斑点免疫金渗滤试验 (ｄｏｔ -ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓａｙ ,ＤＩＧ ＦＡ)检测了结核组和对照组受检者血清中的特异性结核抗体 ,现将结果报告如下。1　观察对象和方法1 1　肺结核组　共 2 60例 ,男 179例 ,女 81例。年龄 15～ 86岁 ,平均年龄 35 7岁。均为本院结核科住院和门诊病人。诊断依据 :痰涂片抗酸染色阳性且 /或培养阳性 ;痰菌阴性者 ,其临床症状、Ｘ线胸片和抗结核治疗反应符合肺结核的诊断。其中痰菌阳性者 94例 ,痰菌…     

煤工尘肺结核耐喹诺酮类分离株gyrA基因突变的研究

目的对耐喹诺酮类药物的结核分枝杆菌作gyrA基因突变研究以指导临床应用。方法从120例煤工尘肺结核住院患者晨痰标本中，培养出30例阳性的分枝杆菌菌株，通过药敏试验和聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）技术，鉴定30例煤工尘肺结核分离株的菌种，并分析gyrA基因突变情况。结果30株临床分离株的电泳图谱均与结核分枝杆菌相同。在30例耐多药结核分离株中，对喹诺酮类药物敏感株15株，耐喹诺酮类药物为15株，耐药率50％（15／30），高浓度耐药2株均有gyrA基因突变，低浓度耐药13株，其中8株有gyrA基因突变，基因突变率为66．66％（10／15）。结论煤工尘肺结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物和gyrA基因突变有关，提示在临床治疗耐多药煤工尘肺结核病例时，可提高喹诺酮药物的浓度。     

基因芯片技术及其在结核病研究中的应用

基因芯片技术是将预先设计好的探针DNA在芯片上做成点阵，按碱基配对的特性与样品中DNA杂交，通过计算机进行高效解读和分析，获取大量信息。本文对该技术及其在结核病的诊断、基因突变和多态性分析、菌种鉴定、药物筛选和致病机制方面进行综述。     

应用蛋白质谱建立活动性肺结核病的血清诊断模型

目的 应用蛋白质谱技术研究活动性肺结核病患者的血清诊断标志物,建立诊断模型早期诊断活动性肺结核.方法 应用表面加强激光解吸-电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)和蛋白芯片技术检测264例活动性肺结核患者、其他呼吸疾病患者和正常人血清;应用Ciphergen蛋白芯片3.1.1软件比较、分析血清蛋白峰,找出差异蛋白;应用Biomarker Pattern 5.0软件建立活动性肺结核的诊断模型.结果 129例活动性肺结核血清和135例对照血清蛋白指纹图谱比较,有50个差异蛋白峰(P<0.01).以69例其他呼吸疾病血清和66例健康人血清为对照,选择5个蛋白峰(4360、3311、8160、5723、15173 m/z)建立诊断模型1,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为82.95%,特异性为89.63%,准确率为86.36%.以69例其他呼吸疾病血清为对照,选择3个蛋白峰(5643、4486、4360 m/z)建立诊断模型2,该模型诊断活动性肺结核的灵敏度为96.9%,特异性为97.8%,准确率为97.3%.结论 应用蛋白质谱技术分析肺结核病患者血清可能建立一种新的结核病早期诊断方法 .