利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术的诊断效果对比研究

目的 评价利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（GeneXpert Mtb/RIF）检测临床标本诊断结核病和耐利福平结核病的效能.方法 2011年1-5月从解放军第三○九医院、广州市胸科医院和河南省疾病预防控制中心3家单位,连续收集门诊就诊的1971例疑似结核病患者的痰标本,进行涂片、金标准培养和金标准比例法传统药敏试验和GeneXpert Mtb/RIF检测.应用SPSS 11.5统计软件对GeneXpert Mtb/RIF与不同检测方法进行敏感度和特异度分析,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 与涂片及培养比较,GeneXpert Mtb/RIF检测1968例（1971例中有3例污染排除）痰标本诊断结核病的敏感度和特异度分别为93.27％（748/802）、91.93％（797/867）和91.60％（1068/1166）、95.55％（1052/1101）;与临床诊断比较,GeneXpert Mtb/RIF检测1945例（1971例中有26例无法定诊）痰标本诊断结核病的敏感度和特异度分别为78.66％（822/1045）、98.67％（888/900）;与金标准传统药敏试验比较,GeneXpert Mtb/RIF检测797例标本诊断耐利福平结核病的敏感度和特异度分别为97.92％（188/192）、100.00％（595/595）.结论 GeneXpert Mtb/RIF是一种检测痰标本诊断结核病及耐利福平结核病的快速简便、自动化、敏感度和特异度较高的分子生物学方法,适用于结核病和耐利福平结核病的临床诊断.     

应用DNA微阵列技术快速鉴定分枝杆菌菌种

目的利用DNA微阵列的高通量、高效性,建立一种快速、简便的分枝杆菌分子菌种鉴定方法,为临床医师正确诊断提供依据。方法以DNA直接测序法为对照,通过PCR-SSCP和DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和465株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用DNA微阵列技术分析28种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性100％。465株分枝杆菌临床分离株中,经16S rRNA PCR-SSCP初步菌种鉴定,256株为结核分枝杆菌复合群,应用DNA微阵列分析,显示与分枝杆菌属探针M和结核分枝杆菌复合群探针a杂交阳性,两种鉴定方法结果一致;209株PCR-SSCP初步鉴定为非结核分枝杆菌的分离株,经芯片分析,68株为龟分枝杆菌龟亚种和脓肿亚种,46株为胞内分枝杆菌,34株为堪萨斯、瘰疬、胃和猿猴分枝杆菌复合群,31株为偶然分枝杆菌,16株为戈登分枝杆菌,3株为鸟分枝杆菌,2株为海和溃疡分枝杆菌复合群,1株为土分枝杆菌, 1株为迪氏分枝杆菌,1株为草分枝杆菌;另6株只与探针M杂交,经测序显示5株为胞内分枝杆菌,但其基因序列与标准菌株不完全相同,1株为新金色分枝杆菌,芯片上无鉴定该菌种的探针。结论用DNA微阵列可简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,提高分枝杆菌病的正确诊断率,指导临床合理治疗。     

左旋氧氟沙星单体与左旋氧氟沙星凝胶的体外抗结核活性研究

目的观察卡波姆凝胶与左旋氧氟沙星联合体外抗结核作用和支气管介入的安全性。方法手工法、仪器法分别测定卡波姆凝胶与左旋氧氟沙星药物的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)及家兔经支气管介入的安全性试验。结果左旋氧氟沙星的卡波姆凝胶对H37Rv标准株、牛型结核分枝杆菌、草分枝杆菌MIC值分别为0.5mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L,MBC值分别为1.0mg/L、1.0mg/L和1.5mg/L;左旋氧氟沙星的卡波姆凝胶与左旋氧氟沙星单体MIC、MBC值无显著差异;家兔动物实验表明该药无任何毒副作用。结论左旋氧氟沙星凝胶具有与左旋氧氟沙星单体相同的抗结核菌药效,卡波姆基质不影响左旋氧氟沙星的抗菌活性;以卡波姆为基质的左旋氧氟沙星凝胶应用安全。     

应用PCR-寡核苷酸探针快速检测结核分支杆菌耐药基因突变

目的:结核分支杆菌耐药是结核病治疗中的棘手问题,由于传统的药敏试验方法烦琐而费时,因此,本研究通过快速检测结核分支杆菌耐药基因突变,以期建立一种敏感、特异、简便、快速的分子药敏试验方法,指导临床化疗.     

结核分枝杆菌重组MPT64蛋白对豚鼠淋巴细胞增殖反应的影响

结核分枝杆菌在生长过程中分泌许多蛋白到细胞外,它们在结核病人的免疫反应中起重要作用。结核分枝杆菌MPT64属结核分枝杆菌分泌蛋白^[1],国内外研究^[2,3]表明了天然和重组的MPT64蛋白能引起结核分枝杆菌致敏豚鼠产生强烈的迟发型超敏反应,是引起人体对结核分枝杆菌保护性免疫反应的重要抗原之一。我们对重组MPT64蛋白刺激豚鼠脾淋巴细胞增殖反应进行了研究,现将结果报道如下。     

结核分枝杆菌耐利福平药物机理的初步研究

目的通过诱导试验观察结核菌产生耐利福平药物的全过程,初步分析结核菌耐该药的机理。方法采用诱导试验、聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)和序列分析,对经不同药物浓度传代培养后的结核菌强毒株（H₃₇Rv）和36株临床耐药分离株进行分析。结果在诱导到第7代时,H₃₇Rv的PCR-SSCP电泳出现异常,经测序证实在513位点发生基因突变。36株临床耐药分离株中有23株发生突变,为63.9% (23/36);其中有5株与诱导株基因突变位点相同。结论用药物不间断的刺激结核菌,是产生结核菌耐利福平药物的重要原因。     

小鼠肝、脾组织病理学变化对结核DNA疫苗保护作用的评估

目的：评价结核分枝杆菌MPT64和ESAT6 DNA疫苗的保护效果。方法：将BALB／C小鼠随机分为5组，分别用生理盐水(A组)，载体质粒(B组)，卡介苗(C组)，MFT64(D组)，ESAT6(E组)免疫小鼠，3周后以结核分枝杆菌H37Rv腹腔攻击小鼠。5～10周后，观察肝、脾组织病理改变。结果：结核分枝杆菌攻击5周后，A、B组肝脏病变主要表现为中度充血，淋巴细胞聚集与上皮样细胞组成小结节，数量1～2／HPF。C，D，E组表现为轻一中度充血，淋巴细胞聚集与上皮样细胞组成中等大小结节，数量3～7／HPF。攻击10周后，A、B组肝脏病变主要表现为轻度充血，淋巴细胞聚集与上皮样细胞组成中等大小结节，数量3～4／HPF。C组轻度充血，淋巴细胞聚集与上皮样细胞组成中等大小结节，数量7～9／HPF。D组为轻一中度充血，淋巴细胞聚集与上皮样细胞组成小结节，数量4～5／HPF。E组为轻度充血，淋巴细胞聚集与上皮样细胞组成中等大小结节，数量4～8／HPF。攻击10周后脾脏改变：A组充血明显，脾小体增生，1例融合；B组未见明显变化；C组脾小体增生，融合显著；D组脾小体轻度增生融合；E组脾小体中度增生，融合。结论：结核分枝杆菌MPT64和ESAT6DNA疫苗能增加机体抵抗力，并且起效较快，ESAT6DNA疫苗的保护效力比MPT64DNA疫苗强，但均未超过卡介苗。     

两种染色法在分枝杆菌检测中的临床应用价值

目前,临床上结核病细菌学的诊断主要采用抗酸染色法,即萋-尼染色法,但其检出率偏低,尤其是在标本含菌量较少时。本研究采用快速荧光染色液检测420例痰液标本,并与萋-尼染色法进行对比,以探寻分枝杆菌的最佳检测方法。1材料与方法收集2010年10-12月解放军309医院收治的初     

建立长期保存结核分支杆菌的方法

结核分支杆菌的生存主要依靠培养基的各种营养物质,培养基质量的优劣直接关系到细菌寿命的长短、生长的状况和是否产生变异.多次转种不同质量的培养基,也可使细菌产生变异.因此,寻找结核分支杆菌长期保存方法是十分重要的课题.     

结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB／c小鼠1个月后，将小鼠随机分成2组，第1组用利福平（RFP）、异烟肼（INH）治疗12周，第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗（免疫5次）联合治疗12周；治疗结束后4和8周，分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周，第2组小鼠体质量均超过第1组，但无显著性差异（P〉0．05）。治疗结束后4周，第2组肺、脾脏指数（0．017，0．011）均略低于第1组（0，020，0，012）（P〉0．05）；治疗结束后8周，第2组肺、肝脏指数（O．021，0．047）均略低于第1组（0．022，0．048）（P〉0．05）；而第2组脾脏指数（0．008）显著低于第1组（0．012）（P〈0．05）。治疗结束后4周，第2组有4例脾脏未见明显病变，第1组仅1例脾脏未见明显病变；治疗结束后8周，第2组有1例肺门淋巴结肿大，而第1组有3例；第2组有5例脾脏未见明显病变，第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周，第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少，分别减少70％和80％。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。