结核分枝杆菌MPT64蛋白的表达、纯化及初步应用

目的　获得重组MPT64蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法 应用基因工程技术表达、纯化MPT64蛋白,通过Westernblotting分析其抗原性。分别以结核分枝杆菌PPD或纯化的rMPT64蛋白为抗原,通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果 重组质粒pET15b MPT64测序表达除83位密码子由CCA突变为CCG外,其余密码子均与报道的相同,但其氨基酸序列无变化。它在大肠杆菌BL21 (DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的20～30%,分子量约26kDa,Westernblotting分析它与抗结核分枝杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rMPT64样品经SDS PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为80%左右,每100ml培养菌可获得10mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值 +2S为正常界限值,PDD的特异性和敏感性分别为94% (31/33)、63.7% (21/33)、66.7%;rMPT64纯化蛋白分别为94% (31/33)、30.3(10/33);一步法分别为88% (29/33)、66.7% (22/23)。结论 pET15b MPT64大肠杆菌工程菌能以包涵体形式高效表达重组MPT64蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性。rMPT64纯化蛋白有可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一。     

结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果研究

目的研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病的效果。方法用结核分枝杆菌高耐利福平低耐异烟肼临床分离株HB240尾静脉注射BALB/c小鼠1个月后,将小鼠随机分成2组,第1组用利福平(RFP)、异烟肼(INH)治疗12周,第2组用RFP、INH和结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合型质粒DNA疫苗(免疫5次)联合治疗12周;治疗结束后4和8周,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取质量、作菌落计数。结果治疗结束后4和8周,第2组小鼠体质量均超过第1组,但无显著性差异(P>0.05)。治疗结束后4周,第2组肺、脾脏指数(0.017,0.011)均略低于第1组(0.020,0.012)(P>0.05);治疗结束后8周,第2组肺、肝脏指数(0.021,0.047)均略低于第1组(0.022,0.048)(P>0.05);而第2组脾脏指数(0.008)显著低于第1组(0.012)(P<0.05)。治疗结束后4周,第2组有4例脾脏未见明显病变,第1组仅1例脾脏未见明显病变;治疗结束后8周,第2组有1例肺门淋巴结肿大,而第1组有3例;第2组有5例脾脏未见明显病变,第1组仅2例脾脏未见明显病变。治疗结束后4周,第2组肺菌落计数和脾菌落计数比第1组显著减少,分别减少70%和80%。结论DNA疫苗和抗结核药物联合治疗小鼠耐药结核病疗效高于单纯化疗。     

传染性非典型肺炎患者血清白细胞介素含量测定及意义

严重急性呼吸综合症(severeacuterespiretorysyndrome,SARS)是一种全球性传染病,已经引起包括我国在内的世界各国高度重视,探讨SARS病原体冠状病毒感染宿主后的发病机制已成为目前急需解决的问题之一。为了解SARS患者血清白细胞介素含量变化,本文检测了66例SARS患者血清白细胞介素含量并与正常组作了对比,现将结果报告如下。     

BACTEC-MGIT960快速培养药敏对肺结核诊治的应用和评价

目的　BACTEC-MGIT960快速培养药敏在肺结核诊治中的应用评价。方法 采用BACTEC-MGIT960进行快速培养药敏,并与改良罗氏培养基和改良7H9培养基进行比较。结果 BACTEC-MGIT960培养报告时间仅8.5d,明显短于改良7H9培养基(20.6d)和改良罗氏培养基(30.8d)。BACTEC-MGIT960药物敏感试验结果与其它检测方法相比,符合率在90%以上,平均报告时间仅6.5d,明显短于改良7H9培养基(17d)和改良罗氏培养基(26.5d)。结论 BACTEC-MGIT960快速培养药敏有助于肺结核的诊断和治疗,是一种快速、有效、可靠的方法。     

甲磺酸左氧氟沙星在肺结核患者体内的药代动力学研究

 目的研究甲磺酸左氧氟沙星口服给药后在肺结核患者体内的药代动力学特性。方法采用高效液相色谱法测定血清中甲磺酸左氧氟沙星浓度,以3P97药代动力学程序计算药代动力学参数。结果8例肺结核患者p0 400 mg甲磺酸左氧氟沙星后,体内过程符合一室开放模型。t^max为1.22h,c^max为(4.52±0.72)mg·L^-1,一次给药24h后血药浓度为(0.52±0.26)mg·L^-1,AUC为(48.35±5.38)mg·h·L^{-1,t1/2为(6.49±1.70)h,V/F(c)为(77.48±8.33)L。结论肺结核患者服用甲磺酸左氧氟沙星,推荐每次400 mg,每日二次的服药方法。对肝肾功能不全的患者,防止出现不良反应。}     

左旋氧氟沙星的体外抗结核作用

目的观察左旋氧氟沙星(利复星)在体外的抗结核活性.方法通过最低抑菌浓度(MIC),最低杀菌浓度(MBC)的测定及左旋氧氟沙星对结核菌的瞬间-杀菌试验,时间-杀菌试验,综合评价左旋氧氟沙星的抗结核作用.结果左旋氧氟沙星在所试3种培养基中对人型结核菌(H37RV),本院住院病人耐药株的MIC分别为1mg*L-1及2mg*L-1,MBC为2mg*L-1.左旋氧氟沙星对结核菌的瞬间杀菌作用效果不佳,左旋氧氟沙星浓度为2mg*L-1,菌浓度为105CFV*ml-1时,10～24h,60d未能培养出菌,耐药株12～24h60d未能培养出菌.结论左旋氧氟沙星具有较强的抗结核活性,对结核菌无瞬间杀菌作用,体外杀菌时间一般不得低于8h,临床使用时注意使左旋氧氟沙星的体内药物浓度24h维持在最低杀菌浓度之上.     

建立快速检验结核分枝杆菌复合群的方法

近年来 ,非典型结核分枝杆菌病的发病率呈上升的趋势。这种病的临床表现、X线特征和痰液涂片抗酸染色与结核病极其相似 ,很难鉴别。原用的非典型分枝杆菌生化反应方法繁琐 ,历时 2个月 ,影响诊断与治疗。故建立快速检验结核分枝杆菌复合群的方法有极其重要的意义。现将该方法介绍如下 :1　材料与方法1 .1　标本　为本院住院已确诊为肺结核病人痰标本 80例。经过 L-J氏培养基或米氏 7H-1 0培养基或 BACTEC-960培养的分离株 ,提取分离株 DNA,(同一般 DNA提取法 ,略 ) ,置零下 2 0℃保存备用。结核标准株 ( H37RV)与各种非结核标准株由…     

糖类抗原CA125水平测定在结核性腹膜炎诊治中的意义

目的了解和评价CA125检测对结核性腹膜炎的诊断和治疗价值。方法采用电化学发光法检测了35例结核性腹膜炎患者和28例恶性腹水患者血清和腹水的CA125水平,并与非活动性肺结核组和正常对照组进行比较。结果结核性腹膜炎组和恶性腹水组血清CA125水平分别为（243.29±131.60）U/mL和（309.05±245.38）U/mL,组间差异无统计学意义（P〉0.05）,但均明显高于正常对照组血清CA125水平（7.13±4.50）U/mL,（P〈0.01）。结核性腹膜炎组和恶性腹水组腹水CA125水平分别为（590.17±275.18）U/mL和（732.39±362.56）U/mL,组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结核性腹膜炎组血清和腹水CA125水平均增高者达74.6%,抗结核治疗6个月后,结核性腹膜炎组血清CA125水平下降至（8.47±5.28）U/mL,与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论CA125水平检测对结核性腹膜炎的诊断价值有限,动态观察CA125水平变化可能有助于预后的判断。     

卡波姆基质帕司烟肼凝胶体外抗结核活性及动物实验的研究

目的　观察卡波姆凝胶与帕司烟肼联合体外抗结核作用和支气管介入的安全性。方法　手工法、仪器法分别测定卡波姆凝胶与帕司烟肼药物的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度及家兔经支气管介入的安全性试验。结果　帕司烟肼的卡波姆凝胶对H37Rv标准株、牛型结核分枝杆菌、草分枝杆菌MIC值分别为 0 1、0 1、0 4mg/L ,MBC值分别为 0 2、0 2和 1 6mg/L ;帕司烟肼的卡波姆凝胶与帕司烟肼单体MIC、MBC值无显著差异 ;家兔动物实验表明该药无任何毒副作用。结论　帕司烟肼凝胶具有与帕司烟肼单体相同的抗结核菌药效 ,卡波姆基质不影响帕司烟肼的抗菌活性 ;以卡波姆为基质的帕司烟肼凝胶应用安全     

65例糖尿病合并肺结核病的临床分析

目的探讨糖尿病合并结核病的临床特征、诊断和治疗。方法分析65例糖尿病合并结核病的临床资料，并与单纯肺结核患者进行对比。结果2组临床症状差异无统计学意义，糖尿病合并肺结核组渗出性病灶和空洞数量要多于单纯肺结核组（P〈0．01）。针对糖尿病治疗和抗结核治疗，2组近期疗效差异无统计学意义（P〉0．05）。结论糖尿病合并结核病应引起高度重视，两病同治可保证疗效。