日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团（TSP2HD）基因合成、表达与免疫原性研究

目的合成和表达日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团（TSP2HD）基因,并研究其免疫原性。方法采用重叠PCR人工合成日本血吸虫TSP2HD（aa107～aa182）完整基因片段,经测序正确后,将此片段插入表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒TSP2HD-PG,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,获得含重组表达质粒的转化子,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）观察TSP2HD融合蛋白表达情况。用谷胱甘肽（GST）融合蛋白纯化胶（glutathione sepharose 4B）从表达产物裂解上清中纯化GST-TSP2HD融合蛋白,用凝血酶切割融合蛋白,制备纯化的重组TSP2HD蛋白。通过蛋白质印迹（Western blotting）分析重组TSP2HD蛋白与血吸虫病患者血清及血吸虫重感染兔血清的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白刺激血吸虫感染小鼠淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验,通过比较实验组与对照组脉冲指数（cpm）值的差异研究重组TSP2HD蛋白的免疫原性。结果经过3轮重叠PCR扩增,获得长228bp的TSP2HD基因,序列分析证实与天然基因序列完全一致。含重组质粒TSP2HD-PG的转化子细菌,经IPTG诱导后表达相对分子质量（Mr）约为34000的可溶性GST-TSP2HD融合蛋白。凝血酶切割GST-TSP2HD融合蛋白获得纯化的重组TSP2HD蛋白。Western blotting分析证明,重组表达蛋白可被血吸虫重感染兔血清和血吸虫病患者血清识别,有较好的免疫反应性;重组TSP2HD蛋白能刺激血吸虫感染小鼠脾细胞增殖,实验组cpm值明显高于对照组,两者间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论日本血吸虫TSP2HD基因合成及表达获得成功,重组TSP2HD蛋白有天然免疫原性。     

刚地弓形虫RH株主要表面抗原1的原核表达和纯化及免疫反应性检测

目的　对重组的刚地弓形虫RH株主要表面抗原 1(SAG1)原核表达载体SAG1/pET 32c ,在大肠杆菌中诱导表达产物进行亲和纯化 β免疫反应性检测评价。 方法　接种含SAG1/pET 32c的BL2 1单菌落至LB肉汤中 ,1∶10 0稀释转种后用 1mmol/L终浓度的IPTG诱导表达 ,表达产物用Ni2 螯合柱亲和纯化 ,并用免疫印迹技术对纯化的融合蛋白进行免疫反应性检测 ,用重组融合蛋白对弓形虫病 5 2份阳性和 4 0份阴性血清进行初步检测。结果　SAG1/pET 32c在原核系统中 ,经诱导表达出约 370 0 0大小的融合蛋白 ,并以包涵体的形式存在 ;通过Ni2 亲和柱纯化可获得SAG1重组融合蛋白。免疫印迹试验表明 ,重组SAG1融合蛋白能被弓形虫阳性血清特异性的识别。初步检测表明 ,阳性和阴性符合率分别为 81% (42 /5 2 )和 95 % (38/40 )。结论　SAG1在原核系统获得高效表达 ,亲和纯化的rSAG1具有较强的免疫反应性 ,对弓形虫病的免疫诊断具有潜在应用价值 ,也为人用或兽用的弓形虫病免疫诊断试剂盒研制奠定了基础。     

日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化及功能逆转研究

目的观察日本血吸虫感染小鼠调节性T细胞水平动态变化,筛选调节性T细胞功能抑制因子。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用流式细胞分析法检测不同感染阶段小鼠体内调节性T细胞水平;通过检测小鼠血清中细胞因子的水平变化,观察免疫反应的极化过程;采用磁珠分离法纯化小鼠脾脏的调节性T细胞,人工设计合成2条寡核苷酸（CpG1-ODN,CpG2-ODN）,通过淋巴细胞增殖试验筛选能逆转调节性T细胞功能的刺激因子。结果流式细胞分析发现,随着血吸虫感染进程的发展,小鼠外周血及脾脏调节性T细胞水平逐渐增加,免疫反应逐步向Th2型极化,血清IL-5水平增加,IFN-γ下降。淋巴细胞增殖试验显示,人工合成的寡核苷酸（CpG2-ODN）能有效刺激淋巴细胞增殖,使淋巴细胞的IL-2分泌增加,TGF-γ下降,并能解除调节性T细胞对效应T细胞增殖的免疫抑制作用。结论血吸虫感染可增加小鼠体内调节性T细胞水平,诱导免疫反应向Th2型极化。寡聚核苷酸CpG2-ODN能逆转调节性T细胞的免疫抑制功能。     

洪涝灾害对长江下游血吸虫病传播的影响

目的了解洪涝灾害对长江下游血吸虫病传播的影响,为制定防治对策提供依据。方法长江洪灾后每年按常规方法进行沿江地区人、畜血吸虫病调查,同时对沿江洲滩钉螺消长情况和有关影响因素进行纵向观察。结果洪涝灾害后沿江地区人、畜血吸虫病检查阳性率分别维持在0.65%~1.71%和0.14%~10.62%;钉螺面积和感染性钉螺面积逐年增加,且后者随前者增加而增加,两者相关具有显著性(r=0.866,P=0.005);洪灾后2年感染螺框出现率、钉螺感染率、感染性钉螺密度均呈下降趋势,第3年开始恢复性上升,急性血吸虫病发病率与此三项指标的相关具有显著性(r1=0.836,P1=0.010;r2=0.773,P2=0.024;r3=0.893,P3=0.003)。调查资料显示距长江口愈近,洲滩淹水时间愈长,平均潮差愈大,钉螺分布愈少,江阴及其下游未发现钉螺。结论长江洪涝灾害可引起钉螺扩散、急性血吸虫感染增加,而这种影响在灾后逐渐显现,具有延迟性;加强洪灾前后的预防控制措施均可有效控制血吸虫病的传播。     

江苏省血吸虫病疫情控制效果与评估

目的 评估江苏省血吸虫病疫情控制的效果。方法采用回顾性分析与现场抽样调查相结合的方法,统计2004-2006年居民粪检阳性率、家畜粪检阳性率、急性血吸虫病发病人数、实有钉螺面积和感染性钉螺面积变化情况;2007年采用Kato-Katz法（1粪3检）和粪便毛蚴孵化法调查居民和家畜血吸虫感染情况,并现场抽查核对防治资料的准确性和完整性。结果2004-2006年全省居民血吸虫感染率分别为0．09％、0．07％、0．02％,家畜感染率分别为0．19％、0．06％、0．02％;发生急性血吸虫病人数分别为38、11、3例;钉螺面积分别为7882、5357、4067hm^2;感染性钉螺面积分别为2131、1185、703hm^2。2007年在12个县（市、区）共调查193个村,检查居民42227人,查出粪检阳性14人,人群平均感染率为0．03％。其中有10个村查到了粪检阳性病人,病人最多的村查出阳性3例,感染率为1．42％;调查各种家畜4292头（只）,其中牛906头,羊3386只,未查到粪检阳性家畜;现场走访140户427人,其中送粪查病231人,查病登记结果和走访情况完全一致。结论2004年以来江苏省血吸虫病疫情逐年稳定下降,各项血吸虫病疫情指标已达到我国血吸虫病疫情控制标准的指标要求。     

青蒿琥酯对日本血吸虫作用的研究Ⅰ小鼠体内不同发育阶段虫体对青蒿琥酯的敏感性

目的观察小鼠体内不同发育阶段日本血吸虫童虫与成虫对青蒿琥酯的敏感性.方法用定量日本血吸虫尾蚴感染小鼠,感染2 h,1、3、7、12、14、16、25、35 d和42 d分别一次性灌服500 mg/kg青蒿琥酯.给药后4周解剖小鼠,采用门静脉灌注法收集虫体,计算减虫率.结果青蒿琥酯对1、3、7、12、14、16、25、35、42 d龄童虫或成虫的减虫率分别为16.9%、18.0%、71.3%、50.2%、36.9%、31.3%、45.3%、58.0%、26.4%,其中以7～35 d龄虫对该药最敏感.结论青蒿琥酯对小鼠体内日本血吸虫不同发育阶段均有杀灭作用,对7～35 d龄虫体杀灭效果更为明显.     

2006年江苏省血吸虫病监测点疫情分析Ⅰ居民和家畜感染情况

目的了解、掌握江苏省居民和家畜血吸虫感染情况,为制订防治规划提供科学依据。方法根据全国和江苏省血吸虫病疫情监测方案的要求,在全省血吸虫病流行区选择有代表性的82个流行村作为监测点,开展居民和家畜血吸虫感染情况的监测调查。结果全省监测点常住居民血检阳性率为1.63%、粪检阳性率为0.035%;流动人群血检阳性率为2.42%,粪检阳性率为0.988%。推算全省流行区居民平均血吸虫感染率为0.0074%,牛感染率为0.80%,羊感染率为1.90%。结论全省血吸虫病疫情继续呈较为稳定的低流行态势;流动人群血吸虫感染率远高于常住居民;全省流行区中散放的家畜较少,总体感染率较低,但局部地区家畜感染率仍较高。流动人群和家畜仍为全省局部地区重要的血吸虫病流行因素。     

血吸虫病防治标准修订在推进我国消除血吸虫病规划中的作用

本文围绕我国6次修订血吸虫病控制和消灭标准的历史背景,以及其在不同防治时期对推进我国血吸虫病控制规划中的作用,提出了在当前消除血吸虫病进程中进一步修订完善防治标准的必要性。并基于文献复习与提炼、回顾性调查、专家论证、完善指标等工作基础,就修订完成我国新的《控制和消除血吸虫病标准》的背景进行了阐述。