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目的:以猪血清所致的免疫损伤肝纤维化小鼠模型探讨抗肝纤冲剂对肝组织Ⅳ型胶原蛋白表达的影响及其对纤维化小鼠的治疗作用.方法:雌性Balb/c小鼠分为5组:正常对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱组、抗肝纤冲剂低剂量组、抗肝纤冲剂高剂量组.除正常组外,其余各组均采用腹腔注射猪血清的方法制备肝纤维化小鼠模型.造模的同时分别用药物对小鼠进行干预治疗7周.7周末处死小鼠,取肝组织,经固定、切片、Masson特殊胶原染色,光镜观察.其他肝组织用于实时荧光定量PCR检测.结果:胶原特殊染色显示,抗肝纤冲剂治疗组与模型组相比,胶原纤维增生程度减轻;实时荧光定量PCR检测显示,各实验组小鼠的肝组织中col4α2基因的表达量,模型组是正常对照组的9.44±2.81倍,抗纤冲剂低剂量组是正常对照组的2.04±0.27倍;模型组是抗纤冲剂低剂量组的4.63±0.45倍,抗肝纤冲剂低剂量组与肝纤维化模型组之间差异具有统计学意义,肝组织中的Ⅳα2型胶原蛋白在mRNA表达水平降低.结论:抗肝纤冲剂可以抑制免疫损伤肝纤维化小鼠肝组织的胶原蛋白增生,减少Ⅳα2型胶原蛋白的表达,提示抗肝纤冲剂对肝纤维化小鼠具有较明显的治疗作用. 相似文献
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目前,临床上对恶性肿瘤的治疗是以手术或化疗、放疗为主,但这些治疗方法均有一定的局限,不能有效地清除恶性肿瘤。最近有研究报道称蒽环类化疗药物处理诱导肿瘤细胞凋亡的同时伴有钙网蛋白(Calreticulin,CRT)向细胞膜外侧移动聚集,这种CRT定位改变可增强肿瘤细胞的免疫原性,刺激机体免疫系统产生抗肿瘤细胞的特异性免疫应答,达到彻底清除肿瘤细胞的功效。 相似文献
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目的:探讨表达钙网蛋白(Calreticulin,CRT)和HPV E2融合蛋白的肿瘤疫苗在小鼠体内诱导的抗肿瘤免疫应答.方法:转染重组质粒得到高表达CRT、E2和CRT-E2融合蛋白的肿瘤细胞,作为肿瘤疫苗隔周两次腹腔注射免疫小鼠,17天后观察成瘤率,检测NK细胞杀伤活性、特异性T细胞增殖能力、CIL活性以及睥淋巴细胞分泌IFN-γ水平,并观察荷瘤小鼠生存期.结果:高表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗免疫小鼠后,其成瘤率明显低于其他实验组,NK细胞杀伤活性、特异性T细胞增殖能力、CTL活性和脾淋巴细胞分泌IFN-γ水平均显著高于其它实验组(P<0.01),生存期也明显延长(P<0.01).结论:小鼠体内实验显示,表达CRT-E2融合蛋白肿瘤疫苗能够诱导特异性CD8+T细胞免疫应答和NK细胞活性,显著抑制了肿瘤生长. 相似文献
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目的:观察CRT-E2融合蛋白在小鼠黑色素瘤B16细胞中的表达及其定位,并探讨CRT引起的E2蛋白表达定位改变对B16细胞增殖及调亡的影响.方法:构建荧光真核表达载体pEGFP-CRT、pEGFP-E2、pEGFP-CRT-E2,将上述载体以及空载体pEGFP-C1经脂质体瞬时转染B16细胞,West-em blot分析确认目的蛋白表达.荧光显微镜下观察CRT-E2融合蛋白在细胞中表达定位;流式细胞术检测不同重组表达载体转染B16细胞24 h、48 h后,对细胞周期的影响和诱导凋亡的情况.结果:CRT-E2融合蛋白在B16细胞中正确表达,主要分布于细胞质,能将细胞阻滞于G1期,有效诱导肿瘤细胞发生凋亡(P<0.01).结论:成功构建CRT-E2真核表达载体,外源性CRT能够引起E2蛋白表达定位于细胞质,并明显促进了肿瘤细胞的调亡. 相似文献
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目的:证实宫颈癌细胞特异性细胞膜穿透肽特异性穿膜并优化穿膜条件。方法:将编码人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌细胞特异性穿膜肽(PTP)的cDNA片断与编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因片断融合,克隆至原核表达质粒pET15b克隆位点,构建pET15b-GFP-PTP重组原核表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达GFP-PTP融合蛋白,纯化后的GFP-PTP融合蛋白作用于体外培养的HPV阳性宫颈癌细胞株HeLa,Siha,肺癌细胞株A549及正常脐静脉内皮细胞ECV304。利用合成的标记短肽探讨优化穿膜条件。结果:荧光显微镜观察发现,与融合蛋白GFP-PTP共孵育后的Hela和Siha细胞胞浆及胞核内有绿色荧光均匀分布,而A549及ECV304胞内无绿色荧光。与GFP共孵育的任何细胞内均无绿色荧光。流式细胞术分析结果显示PTP对HeLa,Siha细胞的穿膜效率分别为33.2%和28.9%。10% DMSO处理细胞后可增强PTP特异性穿透HPV阳性宫颈癌细胞株的胞膜并改善胞浆内分布。结论:本研究结果为进一步探讨PTP作为宫颈癌防治的靶向导入载体奠定了基础。 相似文献
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钙网蛋白(calreticulin, CRT)是多种哺乳动物体内均存在的可溶性Ca2+结合蛋白。CRT的功能主要表现在维持Ca2+的平衡、储存Ca2+及分子伴侣作用。最近对CRT的研究集中于其可作为凋亡信号促进凋亡细胞的清除、增强抗原呈递及抑制肿瘤血管生成等方面。多项研究表明CRT可在肿瘤的基因治疗中发挥不可低估的作用,但相关研究暂处于初级阶段,其今后在肿瘤基因治疗中的应用尚存在很大潜力。 相似文献
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目的:检测早期自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白(CRT)和凋亡蛋白酶Caspase-3的表达及定位,初步探讨其在早期自然流产过程中的作用及相关性。方法:正常早孕者和早期自然流产者(先兆流产组、稽留流产组)行负压吸引人工流产术,取蜕膜及绒毛组织,HE染色比较其形态学变化,免疫荧光法检测CRT及Caspase-3的表达,统计学分析其相关性。结果:(1)CRT及Caspase-3在早期自然流产蜕膜及绒毛组织中表达高于正常早孕组;(2)稽留流产组蜕膜及绒毛组织中CRT及Caspase-3的表达均高于先兆流产组;(3)CRT与Caspase-3呈正相关。结论:CRT及Caspase-3异常表达可能参与早期自然流产的发生机制。 相似文献