藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

表达Ag85B-ESAT6的重组卡介苗在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力

超表达分泌蛋白Ag85B的重组卡介苗免疫豚鼠获得的保护效力超过卡介苗，这为研究新型结核病疫苗提供了思路。为了全面评估我们构建的融合表达Ag85B与ESAT6的重组卡介苗免疫学特性，我们进一步研究了该菌株在小鼠体内诱发的免疫应答水平及其对结核分枝杆菌毒株感染的保护力。     

提升医学微生物学研究人员生物安全意识的管理与探讨

随着新冠肺炎疫情的不断蔓延,生物安全显得尤其重要。结合某校微生物与病原生物学教研室的管理制度,本文分别从强化生物安全实验室等级概念、培养生物安全意识、建立良好实验习惯、规范科研人员实验操作、正确使用实验室科学仪器、提高科研人员实验技能、安全处理实验废弃物7个方面,探讨如何提升医学微生物学研究人员平时工作的生物安全意识,有效保证研究人员人身安全和实验室环境安全,为科研工作顺利进行奠定基础。     

在微生物学教学中激发学习动机，提高教学效果

心理学认为 :人的行为受动机驱使。动机是人们活动的一种动因或力量 ,包括个人的意图、愿望、心理的冲动 ,或企图达到的目标等。动机具有唤醒和指向的功能。要进行长期的有效的学习 ,动机是不可少的。学习动机是在社会生活条件和教育的影响下逐渐形成起来的 ,因此不同的社会和教育对学生的学习有着不同的要求。在实际教学过程中 ,教师要根据不同的授课对象 ,采取合适的教学手段 ,最大限度地激发学生的学习动机 ,以达到良好的教学效果[1] 。1　 创设教学情境 ,激发学生学习动机对一门新的科目 ,如何引起学生的学习兴趣 ,是决定教学效果的关键…     

屋尘螨抗原Der p2基因的克隆和表达

目的构建并克隆屋尘螨抗原Der p2基因,在大肠杆菌中初步表达. 方法根据已发表的Der p2基因,人工设计合成一系列基因片段,经单链扩增后连接成完整的Der p2基因;将该基因克隆入表达载体pProEX HTb中,测序并进行初步表达. 结果利用所设计的结构制备了完整的Der p2基因,以大肠杆菌为宿主在IPTG的诱导下获得初步表达,该外源蛋白Mr约为17×103,占总蛋白量的20%. 结论所构建的Der p2基因能在大肠杆菌中表达.     

结核分枝杆菌差异蛋白ESAT-6基因克隆及表达产物刺激人淋巴细胞产生干扰素的研究

结核病目前仍是我国主要公共卫生问题之一 ,用结核菌素反应诊断难以区分结核病人与ＢＣＧ免疫人群的差别。因为目前结核菌素试验所用的纯化蛋白衍生物 (ＰＰＤ)为结核分枝杆菌毒株与减毒株所共有 ,所以ＰＰＤ作为结核病诊断试剂有一定的局限性。结核分枝杆菌差异蛋白ＥＳＡＴ 6仅存在于毒株中 ,而不存在于ＢＣＧ中。研究发现ＥＳＡＴ 6可在动物感染模型引发Ｔ细胞反应和皮肤的迟发性超敏反应 (ＤＴＨ) ,可望替代ＰＰＤ作基金项目 :军队重点课题 ( 0 1Ｚ0 83) ;骨干教师资助计划资助项目作者单位 :西安结核病医院 (段艳 ) ;第四军医大学微生…     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

藤黄微球菌Rpf及其结构域蛋白对结核分枝杆菌生长的影响

目的 表达纯化藤黄微球菌(Micrococcus luteus)复活促进因子(Rpf)及结构域(domain)蛋白,研究其对结核分枝杆菌牛长的影响.方法 诱导表达含有藤黄微球菌Rpf及其结构域基因的融合表达载体pPro-EXHT-Rpf和pPro-EXHT-Rpf domain,在变性条件下对目的 蛋白进行纯化.用不同浓度的纯化蛋白刺激不可培养状态结核分枝杆菌的生长.结果 获得藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白的纯度分别为95%和93%,相对分子质量(Mr)大小分别为30×103和12×103,蛋白质含量分别为471 mg/L和337 mg/L.Western blot证实,获得的蛋白为我们所需要的目的 蛋白.所获得的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白能够促进不可培养状态的结核分枝杆菌的生长,而抗藤黄微球菌Rpf结构域的单克隆抗体可以明显抑制结核分枝杆菌的生长.结论 表达的藤黄微球菌Rpf及其结构域融合蛋白可以促进结核分枝杆菌的生长,而且藤黄微球菌Rpf蛋白与Rpf结构域蛋白具有一致的生物活性.     

结核分泌蛋白MPT64用于101例结核病快速诊断的研究

目的：比较痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，评价MPT64蛋白在结核病血清学诊断中的价值。方法：对101例结核病患者进行分析，同时进行痰菌检查、结明试验、PPD实验和MPT64蛋白抗体检测，对结果进行比较对照分析。结果：痰检阳性率20．8％0，结明试验45．5%，PPD试验77．2％，PPD抗体79．2%，MPT64抗体74．2％；在肺结核患者，MPT64抗体与PPD试验一致率为75．6％；在胸膜炎患者，MPT抗体检测特异性高达86．7％。结论：PPD试验仍是目前结核病早期诊断与鉴别诊断的重要方法，分泌蛋白MPT64可作为新型结核病快速诊断试剂的组分。     

结核分枝杆菌RpfA蛋白的表达纯化与鉴定

目的:表达和纯化RpfA融合蛋白.方法:将含有RpfA基因片段的质粒用NdeI与BamHⅠ双酶切,然后将目的基因片段克隆入pcDNA3.1 载体构建重组载体pcDNA3.1 -RpfA,测序正确后再将目的基因片段亚克隆入pET19b原核表达载体并转化E.coli DE3,IPTG诱导表达融合蛋白,Western blot鉴定融合蛋白.在变性条件下Ni2 -NTA 亲和色谱柱纯化目的融合蛋白.结果:目的基因片段测序与Genbank报道一致(切去了5'端99 bp).SDS-PAGE显示,在Mr约为80 ku处有表达条带,Western blot鉴定为(His)6融合蛋白,并与小鼠抗Rv1884和抗Rv2389免疫血清有交叉反应.可溶性分析发现融合蛋白主要以包涵体形式存在.经Ni2 -NTA亲和色谱柱纯化得到了融合有6个组氨酸残基的RpfA融合蛋白.结论:成功构建了pET19b-RpfA表达载体,并在E.coli DE3中高效表达,亲和层析后获得了纯化目的蛋白.