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31.
杆状病毒载体表达系统使用一个或多个启动子 ,将外源目的基因插入到启动子下游 ,获得重组病毒 ,这种重组病毒在昆虫细胞或虫体内复制的同时 ,使外源基因得到表达。随着杆状病毒分子生物学和表达载体研究的不断深入 ,作为真核表达载体 ,该系统区别于其他表达系统的特点更为突出 ,主要表现在目的基因容量、表达效率、目的蛋白活性、可操作性、生物安全性和在寄生虫学上的应用等 相似文献
32.
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-GRA8转染vero细胞,分析转染vero细胞中GRA8的表达状况。结果PCR扩增出GRA8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-GRA8;在vero细胞中获得表达。结论成功构建了GRA8的真核重组表达质粒pVAC-GRA8。 相似文献
33.
34.
SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫 总被引:2,自引:0,他引:2
目的构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达栽体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础。 相似文献
35.
枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 对益生菌一枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础.方法 采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24 h)获得芽孢,使用pH 2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验.结果 在DSM培养基中,80%~90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011.在模拟胃液中1 h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活.在模拟小肠环境中3 h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖.结论 枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体. 相似文献
36.
37.
成熟疟原虫感染红细胞表面抗原 (matureparasite infectederythrocytesurfaceantigen ,MESA)又称恶性疟原虫红细胞膜蛋白 2 (Plasmodiumfalciparumerythrocytemembraneprotein 2 ,PfEMP2 )或PP30 0 ,是成熟期疟原虫合成的磷蛋白。它通过小泡运送至感染的红细胞膜骨架上[1 ,2 ] ,与红细胞蛋白 4 .1以非共价方式紧密结合。MESA包含 7个明显的重复区 ,重复区占全部氨基酸残基的 60 % [3] 。至今 ,MESA在感染的红细胞中的功… 相似文献
38.
目的 构建包含恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。方法 从FCCl/HN株基因组DNA中PCR扩增P1332基因片段,P332-RO、P332-R1和P332-R2;用PCR扩增法合成鼠IgG轻链信号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建分泌型重组质粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNAl-s—P332-R1、pcDNA3-s—P332-R2和非分泌型重组质粒pcDNA3-s—P332-R0、pcDNA3—s—P332-R1、pcDNA3—s—P332-R2。阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增得到特异的FCCl/HN株P1332基因片段,P332-R0、P332-R1、P332-R1,大小分别为489、429和393bp。用PCR扩增法合成63bp的Balb/c小鼠IgG轻链信号肽的编码序列。酶切、PCR及测序鉴定表明获得了正确的含P1332基因片段的分泌型、非分泌型重组质粒。结论 成功构建分别包含恶性疟原虫P1332基因片段-1332-R0、P332-R1和P332-R2的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。 相似文献
39.
日本血吸虫卵壳蛋白基因的筛选及EST序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 通过对日本血吸虫(Sj)成虫cDNA库的核酸杂交筛选,分离出Sj卵壳蛋白相关基因的cDNA克隆,并进一步探讨该基因的结构与功能关系。方法 用地高辛标记的特异性寡核苷酸探针对Sj成虫cDNA库进行膜原位杂交筛进,挑选出阳性克隆,用通用引物进行PCR扩增,获得cDNA插入片段,采用PCR直接序列测定法,对其部分序列进行测定,而后将EST序列输入GENEBANK进行同源性检索和分析。结果 本实验从Sj cDNA库筛选到9个不同的阳性克隆,用通用引物扩增出9十分子量大小不同的单一条带,其中两个为已知序列,其余7个为新的EST序列。结论 用寡核苷酸标记探针对Sj库中进行校酸杂交筛选是寻找特定目的基因的有效方法。 相似文献
40.
目的扩增华支睾吸虫一个微粒体谷胱甘肽转移酶(mGST)新基因,明确是否存在内含子,并进行原核表达与纯化. 方法用PCR方法分别从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库和基因组DNA中扩增mGST基因并测序,将编码基因定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠埃希菌BL21/DE3中表达,按照Ni-NTA agarose说明书纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和TLC分析. 结果 mGST基因全长486 bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-mGST在大肠埃希菌中得到了有效表达,融合蛋白的分子质量单位约为24 ku.重组蛋白达细菌总蛋白质的11%,纯化后的重组蛋白纯度为83%. 结论 mGST基因没有内含子,在大肠埃希菌中能有效表达,得到了纯化的重组蛋白,为进一步研究其功能奠定了基础. 相似文献