幽门螺杆菌oipA基因片段的克隆表达及抗原性分析

目的:分片段克隆表达幽门螺杆菌oipA基因,确定抗原性最强的重组蛋白肽段.方法:从Hp国际标准株NCTC11637中获取oipA全长基因,克隆至pGEM-T载体并鉴定正确,以重组pGEM-T/oipA为模板PCR扩增6个不同大小的oipA基因片段,与表达载体pET-42a连接,转化大肠杆菌BL-21,重组子经PCR、酶切、测序鉴定.IPTG诱导重组蛋白肽段的表达,经Western Breeze 化学发光法鉴定融合蛋白;优化诱导时间和IPTG浓度,诱导重组蛋白大量表达;Ni-NTA His*Bind树脂亲和纯化表达产物;羊抗Hp多克隆抗体,Western blot法检测纯化蛋白的抗原性,间接ELISA法筛选抗原性最强的重组肽段.结果:6条oipA基因片段在大肠杆菌中都得到了表达,表达的蛋白肽段均可被抗Hp多克隆抗体识别,具有抗原性,其中反应性最强的是最小的蛋白肽段.结论:oipA基因片段可在原核系统中表达,所获取的最小的肽段抗原性最强,可望制备检测血清相应抗体的试剂盒.     

空肠弯曲菌mcp1/2/3基因原核表达及其产物与细菌趋化作用的相关性

目的 克隆空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)接受甲基趋化蛋白(MCP)编码基因mcp1、mcp2和mcp3并构建其原核表达系统,建立空肠弯曲菌体外趋化模型并确定趋化诱导物质,了解MCPs与趋化诱导物之间的关系.方法 PCR扩增mcp1、mcp2和mcp3基因片段,T-A克隆后测序.构建上述目的 基因原核表达系统,SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶成像分析系统检查目的 重组蛋白rMCP1、rMCP2和rMCP3的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rMCPs.rMCPs免疫家兔获得抗血清,免疫扩散法测其效价.用饱和硫酸铵盐析法和DEAE-32离子交换法提纯IgG,经胃蛋白酶酶解和Sephedex G-100层析制备IgGF(ab')2.建立HAP(hard-agar plus)法空肠弯曲菌体外趋化模型并检测8种物质的趋化诱导作用.采用基于IgG F(ab')2封闭的趋化阻断试验,确定不同MCPs的功能及其差异.结果 PCR扩增获得预期大小的mcp1、mcp2和mop3基因片段,其核苷酸和氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能有效地表达各rMCPs,其产量均约为细菌总蛋白的10%.rMCP1、rMCP2和rMCP3免疫家兔后能产生特异性抗体,其免疫扩散效价均为1∶4.牛胆汁和脱氧胆酸钠(DOC)对空肠弯曲菌趋化有浓度依赖性诱导作用(P<0.05).MCP1和MCP2被其IgG F(ab')2 封闭后,空肠弯曲菌对DOC的趋化能力明显减弱(P<0.05),MCP3被封闭后对空肠弯曲菌趋化能力无影响(P>0.05).结论 本研究成功地表达了空肠弯曲菌MCPs蛋白.牛胆汁和DOC是诱导空肠弯曲菌趋化的信号物质,MCP1和MCP2可能参与该菌对DOC的趋化过程.     

上海市宫内节育器取出术现状的调查分析

目的:调查上海市宫内节育器(IUD)取出的现状和方法,探讨手术并发症的原因及安全取出IUD的措施。方法:对上海市87所医院2001～2007年期间所有IUD取出术病例进行回顾性调查,内容包括手术方式、手术地点及是否施行静脉麻醉手术等。对严重并发症进行个案调查。结果:2001～2007年常规IUD取出术数量稳步上升,维持在每年60000～100000例。二级综合医院、三级综合医院和妇幼保健院手术分布为37.61%、16.41%和45.98%。与2001年比较,2007年宫腔镜IUD取出术住院数量上升158.47%,静脉麻醉宫腔镜IUD取出手术上升124.47%。常规IUD取出术和宫腔镜IUD取出术中,严重并发症的发生率各为2.99/10万和36.00/10万。常规IUD取出术中17例严重并发症为脏器损伤14例,感染引起再次开腹手术3例。宫腔镜IUD取出术的严重手术并发症为死亡病例4例。结论:随着近年来IUD取出术逐年上升,宫腔镜手术有助于困难IUD的取出。建立宫腔镜操作规范,包括配置、抢救设备和有资质的医护人员是非常必要的。     

问号钩端螺旋体MazF蛋白对巨噬细胞的毒性作用分析

目的了解问号钩端螺旋体（简称钩体） MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白（ rMazE和rMazF ）。采用DNA和RNA降解试验确定rMazF的DNA或RNA酶活性以及rMazE抑制rMazF酶活性的作用。采用实时荧光定量RT-PCT、Western blot 和激光共聚焦显微镜法,分别检测问号钩体赖株感染THP-1单核细胞时mazE和mazF基因转录、表达及分泌情况。采用CCK-8法和流式细胞术检测mazF基因产物对THP-1细胞的细胞毒性及死亡方式。结果 rMazF能水解问号钩体赖株和 THP-1细胞的RNA,但无DNA酶活性, rMazE 能抑制rMazF的RNA酶活性。感染THP-1细胞后,mazE-mRNA和mazF-mRNA及MazE和MazF蛋白表达水平显著升高,但仅有MazF蛋白外分泌。 mazF 基因产物对 THP-1细胞有细胞毒性并引起细胞坏死。结论MazEF毒素-抗毒素系统中具有RNA酶活性的MazF蛋白是问号钩体的毒力因子,可引起感染的巨噬细胞坏死。     

高雪氏病研究的进展

高雪氏病是一种神经鞘磷脂贮积的疾病,由于缺乏酸性β-葡萄糖苷酶所致,系常染色体隐性遗传.1882年Gaucher氏首先描述,故称高雪氏病,是脂质沉积病中最常见的疾病.本文拟就近年来对此病研究的进展进行综述报道.发病率和遗传高雪氏病在全人类均可发病,Fredrick及Sloan(1972)提出本病可分为三型:Ⅰ型为成人型或非神经病变型,Ⅱ型为婴儿型或神经病变型,Ⅲ型为青年型或亚急性神经病变型.此病虽是世界各地内外科门诊中最常见的脂质沉积病,但在犹太人成年型高     

胸腰椎内固定术后局部感染的临床治疗

目的探讨胸腰椎内固定术后局部感染的临床诊断和治疗策略。方法回顾性分析自2008-03—2012-12诊治的胸腰椎内固定术后局部感染13例的临床资料。结果 13例胸腰椎内固定手术术后发生早期和晚期感染,感染发生时间术后1~13个月。经过及时诊断和积极的病灶清除、冲洗引流、抗感染治疗。除1例外,12例在保留内固定的情况下感染治愈。随访时间8~40(22±11)个月,无复发病例。感染后,清创引流术前、术后6个月血液分析、ESR、CRP和腰痛VAS评分,差异有统计学意义(P0.05)。结论胸腰椎内固定术后局部感染后应及时明确诊断,尽早手术治疗。多数患者可以在保留内固定的情况下治愈感染。     

178例常见中毒急诊救治体会

目的总结各种中毒急诊救治经验。方法回顾分析178例中毒的急诊诊断与救治等。结果从178例中毒中得出积极诊断,及时处置各种中毒危急情况的经验和误诊、误治导致的后果。     

婴儿肺叶气肿

婴儿肺叶气肿(Infantile Lobar Emphysema,ILE)是一种较罕见疾病,其特征为由于瓣膜抑制机理,继发空气只进不出,使一个肺叶过度膨胀,导致邻近肺叶压缩或肺不张并出现纵隔移位。     

制定三维适形放射治疗标准操作规程是放射治疗质量保证的必要措施之一

三维适形放射治疗作为一种精确放射治疗手段,提高了肿瘤局部控制率,减少了放射反应和后遗症,而且具有较好的成本效益,近年来在全球各大放疗中心得到了广泛的应用[1],被放射肿瘤学术界认为是21世纪初的发展方向,是放射治疗技术发展的主流[2]。同时也给放射治疗医师、物理师、放射治疗技师在质量保证和治疗控制方面提出了新的要求,我科通过制定三维适形放射治疗标准操作规程,保证了三维适形放射治疗每个过程的正确实施,取得了预期的效果,先将其内容报告如下,供广大同行探讨和借鉴。1三维适形放射治疗定位前的准备详细了解患者病历资料,仔细阅…