抗人P185^erbB2单克隆抗体的制备及特性分析

制备可特异识别Ｐ１８５＾ｅｒｂＢ２胞外区的单抗，选出亲和力较高并具有抑制瘤作用的克隆。方法以高表达ｅｒｂＢ２的人乳腺癌细胞系ＳＫＢＲ３免疫ＢＡＢＬ／ｃ小鼠，用纯化的重组ＤＮＡ表达的Ｐ１８Ｔ胞外区蛋白作为抗原，以间接ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结论所获单抗可特异识别Ｐ１８５胞外区抗原，具有肿瘤诊断，判断预后及人源化造造后用于治疗的应用潜力。     

MAGE-3基因的表达检测和重组MAGE抗原的制备及其应用

目的 克隆MAGE－3基因并检测其在人食管癌组织中的表达情况；重组表达MAGE－1和MAGE－3抗原，用于食管癌的治疗性蛋白疫苗的免疫原性研究。方法 RT－PCR法检测了MAGE－3在人食管癌组织中的表达情况。采用DNA重组技术将MAGE－1和MAGE－3全长cDNA克隆至pET30a( )载体上，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，经SDS－PAGE和western blot鉴定后，制备其可溶性蛋白，研究其对人T细胞增殖能力的影响。结果 MAGE－3基因在食管癌组织中的表达率为50％（15／30）；在30例相应癌旁正常组织中未见表达。成功获得了MAGE－1和MAGE-3可溶性蛋白；人T细胞能够对自身抗原递呈细胞加工处理的MAGE－1和MAGE－3蛋白产生应答。结论 MAGE－1和MAGE－3蛋白可能是用于食管癌免疫治疗的免疫原性较强的靶抗原。     

抗CEA人鼠嵌合F(ah’)_2在昆虫细胞中的表达

癌胚抗原(CEA)是一种非特异性肿瘤标记(TW).在结肠癌,胃癌,肺癌,乳腺癌,宫颈癌等许多恶性肿瘤中均有较高表达.利用抗CEA单克隆抗体进行放免显像研究近年来发展较快,但都存在着放射性本底较高的问题,影响了显像结果.F(ab’)_2.由于分子量小,没有Fc段,从血液中清除较快,可减少非特异结合,而因显像效果较好,但仍然受HAMA反应的影响.为此,本研究利用昆虫杆状病毒表达系统在SF9细胞中表达了抗CEA人鼠嵌合F(ah’)_2,以利于临床肿瘤的放免显像.提取一株表达完整抗CEA嵌合抗体的CHO细胞的总RNA,分别用与人轻链k恒区基因及α1重链CH2基因互补的3’引物进行反转录,再以CDNA为模板,5’引物相同,都与鼠重链前导肽互补,3’引物与反转录相同分别进行PCR扩增,得到含有鼠重链前导肽,轻链可变区,完整的k恒区的680bp的轻链基因和含有鼠重链前导肽,重链可变区,     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的：研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）在原发性肝癌中的表达与肝癌复发、转移的关系。方法：采用逆转录－聚合酶链式反应技术,对３９例原发性肝癌的手术切除标本（包括癌组织及癌旁肝组织）中的ＶＥＧＦ及ＭＭＰ－９基因表达进行了检测。结果：ＶＥＧＦ分别在９２％（３６／３９）的肝癌组织７９％（２６／３３）的肝硬变组织和５７．１％（４／７）的下沉肝组织中表达,ＭＭＰ－９分别基因表     

基质金属蛋白酶-9基因表达与肝细胞肝癌侵袭及转移的关系

肝癌术后复发、转移率较高，这是进一步提高肝癌疗效的主要障碍。研究与肝癌侵袭、转移有关的生物学因素对掌握肝癌复发、转移规律及指导肝癌复发、转移的防治都具有重要意义。本研究采用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）技术检测肝癌及癌旁肝组织基质金属蛋白酶?..     

抗人VEGF人源化抗体及基因工程抗体真核高产量表达技术的研究

众多研究表明,肿瘤的生长及转移依赖于血管生成,血管内皮生长因子(VEGF)在血管形成中起关键作用。因此,研制具有中和活性的VEGF抗体,有可能成为抑制肿瘤生长及转移的新型药物,有良好的应用前景。 1.VEGF多抗及单抗的研制:采用RT-PCR技术,从肝癌组织中克隆了VEGF165 cDNA,大肠杆菌中的表达量占菌体蛋白的30％,分离纯化后纯度达95％以上,具有良好的生物学活性。以VEGF165免疫家兔,所得多克隆抗体具有良好的中和活性。动物实验表明,其对小鼠S180肉瘤的抑     

肝癌干细胞抗体靶向治疗的实验

目的研究抗人肝癌干细胞鼠单抗15B7的生物学特征、体内外功能,探讨靶向肝癌干细胞是否能够有效抑制肝癌移植瘤复发、自发性肺转移以及延长荷瘤小鼠的生存期。方法采用双色免疫荧光、双色流式细胞技术、皮下成瘤实验,检测、鉴定15B7单克隆抗体能够识别肝癌干细胞(hepatocellular carcinomacancer stem cells, HCC-CSC)。从人肝癌细胞系BEL7402中以流式细胞仪分选具有CD133+或ESA+表型的细胞。在此基础上采用CCK-8细胞增殖实验、侵袭实验、迁移实验等检测分析15B7单抗对CD133+表型的细胞增殖、侵袭、迁移的作用以及对细胞周期的影响。裸鼠体内治疗实验研究15B7单抗对BEL7402移植瘤生长的抑制作用。以Western blot方法鉴定该功能性单抗的抗原。结果双色免疫荧光和双色流式检测显示15B7单抗能与HCC-CSC的标志物ESA、CD133共染;流式分选15B7+或ESA+或CD133+的细胞在体外无血清培养条件下有良好的成球生长能力;流式分选的15B7+细胞裸鼠皮下接种1×104个/只,2月可形成肿瘤,以上实验证明15B7单抗是抗肝癌干细胞的单抗。体外功能实验结果显示15B7单抗能够抑制CD133+细胞的增殖、迁移、侵袭,抑制率分别达13.8%、157%和30.9%,同时还能诱导CD133+细胞发生G1期阻滞。体内治疗实验研究结果表明15B7单抗能明显抑制裸鼠肝癌移植瘤生长,抑制率可达60.5%。Western blot显示15B7单抗识别HCC-CSC表达的抗原蛋白相对分子质量约50 kD。结论15B7单抗能明显抑制裸鼠体内人肝移植瘤的生长,为肝癌干细胞的靶向治疗提供有重要应用价值的候选抗体药物。     

胃癌干细胞单克隆抗体联合顺铂靶向治疗胃癌的实验研究

目的:探讨靶向胃癌干细胞单克隆抗体的生物学特征及其联合顺铂治疗胃癌的疗效.方法:采用无血清悬浮培养法和PKH26染色法确定胃癌SNU-5细胞中存在肿瘤干细胞.细胞免疫荧光法检测单克隆抗体21A3识别的抗原蛋白与PKH26+细胞及特异性抗原(CD90)在SNU-5细胞中的表达情况.无血清悬浮培养法检测流式细胞术分选出的21A3+细胞的自我更新能力以及21A3对SNU-5细胞自我更新能力的影响.CCK8法检测21A3对细胞顺铂耐药能力的影响.裸鼠体内治疗实验分析21A3联合顺铂对SNU-5移植瘤生长的抑制作用.结果:SNU-5细胞无血清悬浮培养11d后形成的细胞球体中存在单个PKH26+细胞.细胞免疫荧光显示,单克隆抗体21A3识别的抗原分子能与PKH26和CD90在SNU-5细胞上共定位.21A3+细胞体外成球率高于21A3-细胞.21A3+细胞具有更高的耐药性,21A3+细胞和21A3-细胞的IC 50分别为0.104μmol/L和0.025μmol/L.单克隆抗体21A3能够显著抑制SNU-5细胞的无血清成球,抑制率为37.5%.经21A3处理后的SNU-5细胞,耐药能力下降,其IC 50为0.001μg/ml,而对照组的IC 50为0.003μg/ml.抗体体内治疗实验结果显示,10、5、2.5mg/kg的21 A3组的肿瘤生长抑制率分别为80.6%、69.6%和59.2%,10mg/kg 21A3+顺铂组的肿瘤生长抑制率为90.6%,顺铂组的肿瘤生长抑制率为55.8%.结论:单克隆抗体21A3是抗胃癌干细胞的功能性单克隆抗体.     

鼻咽癌癌基因的分离及其属性的鉴定(简报)

近年来,人们从膀胱癌,肺癌、神经母细胞瘤、肝癌、骨癌等一系列细胞系或癌组织中提取DNA,转染小鼠NIH 3T3细胞,从转化灶中分离出上述肿瘤各自的癌基因。上海肿瘤所曾报告以鼻咽癌活检组织DNA转染NIH3T3小鼠细胞成功,但鼻咽癌癌基因属性迄今未见有报告. 我们用低分化鼻咽癌上皮细胞系CNE-2转染NIH3T3细胞,经二轮转染获得的转化细胞株在软琼     

一种人源血管抑制因子的克隆及其抗肿瘤作用

近对20的研究表明，血管的形成几乎是所有实体瘤生长和转移的必需条件之一。肿瘤生长到直径约1毫米-2毫米时，进一步生长有赖于血管为其提供氧气和营养成份，因此阻断新生血管的形成，能够抑制肿瘤的生长，减少和预防转移的发生，是一种“截断粮草”治疗肿瘤的新策略。肿瘤的血管形成是由正负调控因子的平衡决定的，正调控因子促进肿瘤血管的形成和生长，而负调控因子抑制其生长。我们从人胎儿肝脏组织中首次克隆到了一种人源的肿瘤血管抑制因子（HLW－l）。经测序并与Ge。hank比较发现其为人胶原XVm的一部分，与F01klnan等lop年从鼠内皮…