盐酸肾上腺素注射液中S-对映体的测定及稳定性考察

目的:建立肾上腺素对映异构体中S-对映体的高效毛细管电泳检测方法。方法:采用未涂层熔融石英毛细管(50μm×42 cm,有效长度32 cm),以含13 mmol·L-1DM-β-CD pH 2.5的缓冲体系(含0.10 mol·L-1磷酸和0.07 mol·L-1三乙胺)为背景电解质溶液,在20 kV分离电压下,于214 nm波长处测定S-对映体。结果:肾上腺素R-对映体和S-对映体浓度分别在0.0026～0.1036 mg·mL-1范围内线性关系良好,相关系数分别为0.9995和0.9999(n=6);定量限分别为0.3和0.4μg·mL-1(S/N≥10),检测限分别为0.1μg·mL-1(S/N≥3)。结论:本方法灵敏度高,重复性好,可用于盐酸肾上腺素注射液中S-对映体的测定及稳定性研究。     

HPLC同时测定羟喜树碱注射液的有关物质及含量

目的建立以高效液相色谱法同时测定羟喜树碱注射液的有关物质和含量的方法。方法采用Ultimate XB-C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-水（60∶40）,检测波长为370 nm,流速为1.0 mL.min-1,柱温35℃。结果有关物质：羟喜树碱与杂质分离度良好,羟喜树碱和其主要杂质喜树碱的线性范围均在0.2～1.0μg.mL-1之间,相关系数均在0.999 7以上,最低检测限分别为0.2 ng和0.3 ng。含量测定：羟喜树碱在4.0～36.3μg.mL-1内线性相关系数为1.000 0,根据3个不同生产厂家的处方工艺分别进行低、中、高3种浓度的回收率试验,结果均在100.0%～102.0%之间,RSD均在0.02%～0.71%之间（n=3）。结论本方法专属性强、准确性高,可全面系统地控制羟喜树碱注射液的质量。     

培哚普利对急性冠脉综合征患者血清MMP-9及TNF-a的影响

目的观察培哚普利对急性冠脉综合征患者血清金属蛋白酶-9(Matrix metalloproyeinases-9,MMP-9)及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha(TNF-a)的影响,并探讨其作用机制。方法选取急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS)患者68例及稳定型心绞痛(SAP)患者70例,2组患者均随机分为培哚普利治疗组及常规治疗组,选取健康体检者70例为正常对照组。用酶联免疫吸附法检测血清MMP-9水平,放射免疫法检测TNF-a水平。结果 ACS组患者血清MMP-9及TNF-a水平较SAP组及正常对照组高(P<0.05);培哚普利治疗的ACS及SAP患者MMP-9及TNF-a水平较治疗前明显下降(P<0.05)。结论血清MMP-9和TNF-a可能作为急性冠脉综合征患者诊断的一个有效指标,培哚普利可能通过降低血清MMP-9和TNF-a水平增加冠状动脉斑块的稳定性从而降低急性心血管事件。     

急性冠脉综合征单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体δ的表达及其与血清基质金属蛋白酶-9和白细胞介素-10的相关性

目的：观察急性冠脉综合征（ACS）患者外周血单核细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）的表达及其与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、白细胞介素-10（IL-10）的相关性。方法：52例ACS患者为研究组和46例健康者为健康对照组。分离其外周血单核细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测PPARδ的表达;采用酶联免疫吸附试验检测血清MMP-9和IL-10的水平。结果：ACS患者外周血单核细胞中PPARδ的表达水平显著低于健康对照组（P〈0.01）;ACS患者血清MMP-9水平高于健康对照组（P〈0.01）,而IL-10水平低于健康对照组（P〈0.01）;PPARδ表达水平与MMP-9呈负相关（r=-0.421,P〈0.05）,而与IL-10呈正相关（r=0.637,P〈0.05）。结论：PPARδ可能在ACS的发病中具有重要的促进作用。     

钙通道阻滞剂对心肌重构保护机制的研究

目的研究L和L/T型钙通道在梗死心肌组织中钙蛋白酶介导的心肌损伤中的作用。方法结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型,术前7d分别用安慰剂、L型钙通道阻滞剂阿莫地平(4mg·kg-1d-1)、L/T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔(10mg·kg-1·d-1)。术后1、3、7、14d分别检测左心室游离壁(LVFW)、室间隔(IS),右室壁(LV)钙蛋白酶(ucalpain,mcalpain)及钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)表达。术后14d测心肌梗死病灶大小、IS隔厚度、左室大小。结果室间隔ucalpain蛋白表达于心肌梗死14d增加;左室游离壁mcalpain蛋白表达于心肌梗死3d时达高峰。米贝拉地尔更明显地抑制心肌组织mcalpain的上调,缩小心肌梗死病灶。阿莫地平则抑制ucalpain蛋白表达,明显抑制左室扩张和室间隔肥厚。结论心肌梗死病理过程中,梗死病灶内mcalpain上调,肥厚组织中ucalpain上调。L和L/T型钙通道阻滞剂能减轻心肌重构与选择性的抑制心肌组织中的ucalpain和mcalpain有关。     

转染血管紧张素Ⅱ受体反义核苷酸对心肌成纤维细胞的作用

目的 :评价转染血管紧张素 （Ang ）受体 （AT1 ）反义核苷酸 （AT1 A）对心肌成纤维细胞 （Fbs） Ang 受体亚型 m RNA、蛋白激酶 C（PKC）、丝裂素活化蛋白激酶 P38（P38MAPK）蛋白表达 ,及蛋白质合成的作用。方法 :RT-PCR克隆 AT1 c DNA片段 （4 76 bp） ,将克隆的 AT1 c DNA片段反向插入 Pc DNA 3.1（5 .4kb） ,构建一完整的含AT1 A的质粒 （PAT1 A）。转染培养的大鼠 Fbs,RT- PCR检测转染的 Fbs AT1 m RNA表达。 Ang 10 - 7m ol/ L 刺激 2 4h后 ,比较转染及非转染的 Fas Ang 受体 AT1 及 AT2 m RNA表达 （RT- PCR）、P38MAPK和 PKC蛋白表达（western blot）、蛋白质合成 （3H- L eu掺入 ）。结果 :成功构建 PAT1 A。 RT- PCR显示转染 Fbs AT1 m RNA的水平降低 ,与对照 Fbs相比差异显著 （P<0 .0 1）。 Ang 10 - 7m ol/ L 刺激 2 4h后 ,与非转染 Fbs相比 ,转染 Fbs AT1m RNA明显减少 ,AT2 m RNA明显增加 （P<0 .0 1） ;但两组间 PKC和 P38MAPK蛋白表达、3H- L eu及 3H- Td R掺入量均无显著性差异 （P>0 .0 5 ）。结论 :经 AT1 A封闭后 ,能显著地抑制 Fbs AT1 m RNA表达 ,同时上调 AT1 m RNA。单纯封闭 AT1 m RNA并不能有效阻断 Ang 介导的 Fbs蛋白质合成及 Fbs生长相关的信号转导。     

转染血管紧张素Ⅱ受体(AT1)反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:评价转染AT1反义核菩酸(AT1A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张Ⅱ(AngⅡ)受体亚型mRNA表达、蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶p38(P38MAPK)蛋白表达,及蛋白核酸合成的作用.方法:RT-PCR克隆AT1 cDNA序列(476bp),将克隆的AT1cDNA反向插入PcDNA3.1,构建一完整的含AT1A的质粒(PAT1A),测序鉴定.转染培养的大鼠VSMCs,RT-PCR检测转染VSMCs AT1mRNA表达.AngⅡ(10-7mol/L)刺激24 h后,比较转染与非转染的VSMCs AT1与AT2 mRNA表达(RT-PCR)、P38MAPK和PKC蛋白表达(免疫印迹,western blot)、蛋白核酸合成(3H-Leucine及3H-Thymidine掺入).结果:成功构建PAT1A.RT-PCR显示转染VSMCs AT1 mRNA表达量显著减少,与对照VSMC相比差异显著(P＜0.01).AngⅡ(10-7mol/L)刺激24 h后,与非转染VSMCs相比,转染VSMCs AT1 mRNA明显减少(P＜0.01),AT2 mRNA明显增加(P＜0.01);但两组间PKC和P38MAPK蛋白表达;3H-Leu及3H-TdR掺入量均无显著性差异(P＞0.05).结论:经AT1A封闭后,能显著抑制VSMC AT1mRNA表达,同时上调AT2 mRNA.单纯封闭AT1 mRNA并不能有效阻断AngⅡ介导的VSMCs蛋白核酸合成及VSMCs生长相关的信号转导,其他信号通路可能有代偿作用.     

转染血管紧张素Ⅱ受体（AT1）反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的 …

目的：评价转染ＡＴ１我核菩酸（ＡＴ１Ａ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）血管紧张Ⅱ（ＡｎｇⅡ）受体亚型ｍＲＮＡ表达、蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）、丝裂素活化蛋白激酶Ｐ＾３８（Ｐ＾３８ＭＡＰＫ）蛋白表达,及蛋白核酸合成的作用。方法：ＲＴ－ＰＣＲ克隆ＡＴ１ ｃＤＮＡ序列（４７６ｂｐ）,将克隆的ＡＴ１ ｃＤＮＡ反向插入ＰｃＤＮＡ３．１,构建一完整的含ＡＴ１Ａ的质粒（ＰＡＴ１Ａ）,测序鉴定。转染培养的大鼠ＶＳＭＣｓ     

外周血淋巴细胞mTOR表达水平与冠状动脉狭窄程度的相关性分析

目的 探讨外周血淋巴细胞中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平与冠状动脉狭窄程度的相关性.方法 连续纳入170例在成都军区总医院心血管内科接受选择性冠脉造影的患者,其中男86例,女84例,年龄18～82岁,根据造影结果分为冠脉正常组和冠脉病变组,并计算冠脉病变的Gensini积分.采集两组患者的年龄、性别、民族、身高和体重等资料,测定空腹血糖、血脂及肝肾功能等生化指标,提取外周血淋巴细胞总RNA,采用Real time qPCR技术测定mTOR表达水平,分析mTOR表达水平及其他心血管危险因素与Gensini积分的相关性.结果 在170例患者中,冠脉病变组的年龄、体重指数、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)以及外周血淋巴细胞mTOR表达水平显著高于冠脉正常组,差异均有统计学意义(P＜0.05).相关分析结果显示,外周血淋巴细胞mTOR表达水平、TG、TC和年龄与冠脉病变狭窄程度Gensini积分呈正相关,相关系数r分别为0.343、0.254、0.236、0.207(P＜0.01).结论 外周血淋巴细胞mTOR表达水平与冠脉病变狭窄程度呈正相关,提示淋巴细胞mTOR在冠脉病变发展过程中可能发挥重要作用.     

PTEN在心力衰竭心肌MAPK/PKC信号通路的作用

目的 观察充血性心力衰竭病人心肌重构病理过程中肿瘤抑制因子PTEN（phosphatase and tensin homolog tumor suppressor,PTEN）及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）与蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）的作用.方法 通过手术取材,选择因瓣膜性心脏病接受二尖瓣置换术的心力衰竭病人39例,正常对照38例（其中8例来自意外伤亡的器官捐献者）.竞争蛋白结合法检测心肌组织PKC及MAPK活性,免疫沉淀法检测PTEN蛋白表达.结果 心力衰竭病人心肌组织呈典型的重构心肌的病理改变.心肌组织PTEN表达蛋白光吸收（absorbance,A）与β肌动蛋白光吸收比值（PTEN/β-actin）随心功能恶化而降低,各心力衰竭组与正常组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;相反,心力衰竭病人心肌组织PKC和MAPK活性明显高于对照组（P＜0.01）,并随心功能恶化其表达逐渐增加,各心力衰竭组与正常组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 PTEN及MAPK与PKC信号通路共同参与调节CHF病人心肌重构的病理过程,PTEN在心肌重构病理过程中起负性调节作用.