中国人基因组YAC文库的构建及首批克隆鉴定

本文采用PJS97/PJS98及TPH 274载体主宿系统构建中国汉族男性基因组YAC文库,在初探基础上不断改进方法,通过控制脉冲条件的原位筛选去除小片段DNA分子,用多胺溶液防止68℃对大片段DNA分子的破坏作用,并采用Agarase消解低熔点胶。转化获克隆10000余个,采用甘油一步到位法保存8000余个。对其中一批克隆进行鉴定。转化子阳性率为95％,其中75％的片段介于100～200kb间,10％为200～600kb,10％为600～1600kb,该批转化子平均片段230kb。克隆片段平均大小略高于回收到的目的片段的下限而低于它的平均大小。     

血液滤过治疗重症急性胰腺炎的研究进展

尽管延迟手术和个体化治疗已得到推广 ,重症急性胰腺炎 (SAP)的病死率仍然高达 2 0 %以上。许多学者致力于寻找治疗SAP的新方法以提高治愈率。作为一种成熟的血液净化方法 ,血液滤过开始逐步进入SAP的治疗领域 ,并取得良好疗效。本文就目前 (简称血滤 )治疗SAP的研究作一综述。一、血滤治疗SAP的理论基础SAP是胰腺自身消化启动的严重的全身炎症反应性疾病。炎症细胞被过度激活并大量释放细胞因子 ,以及由此产生的细胞因子级链反应是SAP病情加重的重要环节[1] 。调控细胞因子的生成 ,降低细胞因子水平成为SAP治疗中的重要课题之一…     

七氟烷联合舒芬太尼对创伤性失血休克患者血清相关细胞凋亡因子的影响

目的 观察七氟烷联合舒芬太尼对创伤性失血休克患者组织细胞凋亡和炎症反应的影响.方法 选取2011年5月至2013年11月在我院全身麻醉下进行急诊手术的120例创伤性失血休克患者为研究对象,将其分为4组:对照组(A组)、七氟烷组(B组)、舒芬太尼组(C组)和0.1 μg/kg舒芬太尼+1.0％七氟烷组(D组).每组30例,分别于药物处理前(T0)、药物处理后15 min(T1)、30 min(T2)、2h(T3)和24 h(T4)抽取静脉血,测定患者血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、白介素石(interleukin-6,IL-6)、重组人细胞间粘附因子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)以及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)的表达水平.结果 给药前,组间各项指标差异均无统计学意义(P＞0.05).与A组比较,七氟烷用药后2h,能够抑制创伤性失血休克患者细胞TNF-α、Caspase-3的表达,促进SOD的表达;联合使用七氟烷和舒芬太尼进行麻醉治疗,可有效增加上述表达效果.与B、C组比较,D组患者IL-6和ICAM-1的表达水平明显低于A组(P＜0.05).给药后,4组患者平均动脉压和中心静脉压均显著降低(P＜0.05);而各组患者心率降低的幅度差异无统计学意义(P＞0.05).B、C、D组患者手术中自主呼吸恢复时间、苏醒时间以及输液量均显著低于A组(P＜0.05),D组患者输液量显著低于B、C组(P＜0.05).D组出现ARDS和MODS并发症的人数显著低于其余3组(P＜0.05),而4组中出现DIC的患者人数相近,差异无统计学意义(P＞0.05).另外,4种用药方式对患者术后肝肾功能的损伤均较轻微,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 七氟烷联合舒芬太尼能够有效抑制创伤性失血休克患者组织细胞凋亡,减轻炎性反应,具有保护其脏器组织的作用.     

超顺磁氧化铁和EGFP双标NGF基因修饰中脑神经干细胞的建立

目的:建立超顺磁氧化铁(SPIO)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双标神经生长因子(NGF)基因修饰中脑神经干细胞。方法:以质粒pcDNA3-hNGF、pEGFPN1共转染第三代大鼠胚胎中脑神经干细胞并用SPIO标记。荧光显微镜检测EGFP的表达;免疫细胞化学、Western Blot鉴定NGF的表达;普鲁士蓝染色、透射电镜鉴定SPIO标记。结果:EGFP在基因转染12h后开始表达;免疫细胞化学、Western Blot表明细胞能正确表达NGF;普鲁士蓝染色显示细胞标记率达100%,透射电镜显示SPIO颗粒位于吞饮小泡和胞浆内。结论:建立了SPIO、EG-FP双标记NGF基因修饰中脑神经干细胞,为进一步开展细胞移植治疗帕金森病的研究奠定基础。     

蛛网膜下腔出血后M4型瞬时受体电位通道对大鼠脑动脉肌源性紧张度的作用研究

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后M4型瞬时受体电位通道(TRPM4)对大鼠脑动脉肌源性紧张度的作用。方法 60只清洁级健康SD大鼠,性别不限,按随机数字表法分为SAH组(30只)和假手术组(30只)。采用立体定向仪向大鼠鞍上池注射自体鼠尾动脉血建立蛛网膜下腔出血模型。向SAH组注射0.2 ml自体动脉血,向假手术组注射0.2 ml等渗盐水。SAH模型建立5 d后,分离大鼠脑动脉,采用加压肌动扫描技术观察脑动脉管径并计算肌源性紧张度。对每个实验组脑动脉均采用时间贯序法观察其位于人工脑脊液(a CSF)、含0.03 mmol/L TRPM4特异性阻滞剂9-菲酚(9-phenanthrol,9-Phe)的a CSF和含0.1 mmol/L地尔硫卓的无钙a CSF中的动脉管径,并依此计算肌源性紧张度。结果 SAH后,脑动脉位于a CSF中时,SAH组脑动脉管径较假手术组显著缩小[(45.9±6.6)μm比(74.9±5.1)μm,t=5.08,P 0.05],脑动脉肌源性紧张度明显高于假手术组[(58.7±2.4)%比(41.2±3.4)%; t=2.77,P 0.05]。a CSF中加入9-Phe后,SAH组及假手术组脑动脉管径较加入前舒张明显[分别为(98.4±6.1)、(95.1±5.5)μm],差异均有统计学意义(均P 0.05); SAH组肌源性紧张度的下降程度明显高于假手术组[(42.4±4.4)%比(15.3±3.2)%;t=2.83,P 0.05]。结论 SAH后,TRPM4介导大鼠脑动脉肌源性紧张度增加。     

颅内蛛网膜囊肿97例外科治疗临床分析

颅内蛛网膜囊肿(intracranial arachnoid cyst,IAC)由Brighte和Howship最先报告[1],约为颅内占位病变的0.4%～1.0%[2].本文回顾我科2000年10月至2008年6月手术治疗97例蛛网膜囊肿,采用不同手术方法治疗,取得良好疗效,报道如下.     

原发性三叉神经痛微血管减压术中岩静脉的处理

目的 探讨原发性三叉神经痛微血管减压术中岩静脉及其分支的处理方法。方法 回顾性分析2012年1月至2015年5月微血管减压术治疗的92例原发性三叉神经痛的临床资料。根据术中表现,将岩静脉和其属支分为四种情况:①岩静脉主干妨碍手术操作;②岩静脉属支妨碍手术操作;③岩静脉为责任血管;④岩静脉未妨碍手术操作。结果 岩静脉主干妨碍手术操作32例,电凝切断10例;岩静脉属支妨碍手术操作40例,电凝切断28例;岩静脉及其属支为责任血管3例,电凝切断1例;岩静脉未妨碍手术操作17例,均未切断。术后疼痛消失82例,好转8例,无效2例;手术有效率为97.8%。术后随访3个月~3年,平均18个月;复发3例。术后死亡1例,为小脑梗死,术中切断岩静主干。结论 原发性三叉神经痛微血管减压术中,岩静脉的处理是术中重要的操作环节,同时也是减少术后严重并发症的重要环节。     

SPIO、EGFP双标GDNF基因修饰中脑神经干细胞移植治疗帕金森病

目的探讨超顺磁氧化铁(SPIO)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双标胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰中脑神经干细胞(mNSCs)移植对帕金森病(PD)大鼠的治疗作用。方法将PD大鼠随机分为对照组、GFP基因修饰mNSCs移植组和GDNF基因修饰mNSCs移植组,将相应细胞移植到PD大鼠纹状体。阿朴吗啡(APO)诱导PD大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用。磁共振成像、免疫荧光组织化学研究移植细胞的存活、迁移和分化。结果GDNF基因修饰mNSCs移植能显著改善APO诱导PD大鼠的异常旋转行为;大多数移植细胞停留于移植原位,移植8w后,GDNF基因修饰mNSCs移植组有更多的细胞存活并分化为多巴胺神经元。结论MR I成像可对体内移植的SPIO标记细胞进行活体示踪。GDNF基因修饰胚胎mNSCs移植可显著改善PD大鼠的运动障碍,其分子机制有待进一步研究。     

大鼠胚胎腹侧中脑神经干细胞的分离培养与鉴定

目的探讨大鼠胚胎腹侧中脑神经干细胞分离、培养及鉴定的方法。方法解剖分离E14d大鼠胚胎腹侧中脑组织,经机械吹打制成单细胞悬液,接种于无血清培养基中培养,观察其增殖、分化并进行Nestin免疫细胞化学鉴定和诱导分化后β-Ⅲ-tubulin、GFAP、CNPase免疫细胞化学鉴定。结果原代培养7d后,可形成大量悬浮生长Nestin免疫阳性的神经球,经诱导分化后细胞呈GFAP、CNPase或β-Ⅲ-tubulin免疫阳性。结论建立大鼠胚胎腹侧中脑神经干细胞分离培养与鉴定的方法,为进一步开展帕金森病的细胞移植治疗研究奠定基础。