乙型肝炎病毒rtA181V/T和rtN236T变异阿德福韦耐药株表达质粒的构建及其病毒学特征

目的构建乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异株（rtA181T／V和rtN236T）表达载体并对其体外复制能力和耐药性等病毒学特征进行体外研究。方法以含1．2倍拷贝HBV DNA全基因的质粒PUC-HBV1．2WT为模板，PCR定点诱变技术构建含阿德福韦耐药株（rtA181V／T和rtN236T）的目的质粒，测序验证并利用变异株特异检测引物进行PCR检测；转染人肝癌细胞系HepG2，ELISA检测上清中分泌的HBsAg和HBeAg水平，荧光定量PCR检测上清中病毒DNA水平，Southern blotting检测胞浆HBV复制中间体水平，比较野生株和变异株体外复制能力和对阿德福韦敏感性的差异。结果构建的rtA181T、rtA181V和rtN236T表达质粒可用于变异株特异检测引物检测相应变异的阳性对照品；转染HepG2细胞后均可获得高水平的病毒抗原表达，胞浆和细胞培养上清中可以检测到HBV复制中间体和病毒颗粒的存在；三种变异均可单独导致对阿德福韦耐药，IC50为野生株的2．8至4．7倍；体外复制能力较野生株降低，分别为野生株的94．2％、89．0％和77．7％。结论成功构建乙型肝炎病毒阿德福韦变异株表达质粒并应用于变异株特异引物扩增检测技术，体外实验证实rtA181V／T和rtN236T单独变异均可导致HBV对阿德福韦耐药，且变异株的病毒复制能力较野生株有所下降。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

51例慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA及ALT随访研究

目的研究慢性丙型肝炎不同基因型患者对于扰素治疗的反应性差异。方法 42例慢性丙型肝炎患者中33例为基因Ⅱ型,9例为基因Ⅲ型。所有患者给予干扰素-α2b 3Mu治疗,每周三次,连续十二个月,治疗结束后随访十二个月。结果 治疗结束及随访结束时,33例慢性丙型肝炎病毒基因Ⅱ型患者中,HCV RNA阴转率为45.45％(15/33)和27.27％(9/33),ALT的复常率分别为63.64％(21/33)和33.33％(11/33);而在基因Ⅲ型患者中则分别为66.67％(6/9),55.56％(5/9)及88.89％(8/9),77.78％(7/9)。结论不同基因型的慢性丙型肝炎患者对干扰素的疗效不同,基因Ⅲ型对干扰素的疗效反应优于基因Ⅱ型。     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式［ＨＣ非编码区（５′ＮＣＲ）与ＮＳ５联合］ＰＣＲ技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献血员及３７例输血后丙型肝患者的血清ＨＣＶＲＮＡ。结果１０例抗ＨＣＶ阳性献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物及套式ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物扩增时，其ＲＮＡ检出率分别为５／１０、６／１０、７／１０、８／１０和９／１０；而３７例输血后丙型肝炎患者中３５例ＲＮＡ阳性，检出率为９５％，其中１８例１ｂ型和１９例２ａ型样品的检出率分别为１００％和８９％。结论ＨＣＶＮＳ５区的ＲＮＡ检出率与引物的选择有关     

丙型肝炎病毒NS5b区酶切基因分型及其在干扰素治疗中的应用

探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型及其与干扰素应答效果的关系。应用逆转录 -聚合酶链反应(RT -PCR)技术对 2 6 9例肝炎患者血清进行HCVNS5b区基因片段扩增 ,并对 5 6例阳性PCR产物进行酶切分型 ,同时观察干扰素α - 2b对其中 48例慢性丙型肝炎的疗效。HCV单纯 1b型感染、1b基因变异及 2a型感染对干扰素的应答率分别为 70 % (14/ 2 0 )、9 5 % (2 / 2 1)、71 4% (5 / 7) ;其中完全应答分别为 45 % (9/ 2 0 )、4 8% (1/ 2 1)、5 7 1% (4/ 7) ;部分应答分别为 2 5 % (5 / 2 0 )、4 8% (1/ 2 1)、14 3 % (1/ 7)。 1b基因变异组同单纯 1b型及 2a型感染组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ,而单纯 1b型感染组与 2a型感染组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。HCV单纯 1b型感染或 2a型感染者对干扰素敏感 ,而 1b基因变异者干扰素治疗效果极差 ,可作为预测干扰素疗效的一项新的重要指标。     

肝癌和肝硬化患者TTV感染的研究

目的 :了解肝癌和肝硬化患者输血传染病毒 (transfusiontransmittedvirus ,TTV)感染状况。方法 :采用套式PCR技术检测及血清稀释法检测血清TTV滴度。结果 :肝癌中TTV阳性为山东临沂 8例 (8/ 2 5 )、广州 6例 (6/ 16)、广西 2 8例 (2 8/ 65 ) ;肝硬化中TTV阳性为 6例 (6/ 16)。结论 :本组肝癌和肝硬化患者中 39.3%的TTV感染 ,TTV感染可能对肝癌、肝硬化有促进作用     

广西85例肝癌患者庚型肝炎病毒感染的血清学研究

对肝癌高发区的８５例患者血清采用套式ＰＣＲ方法检测认型肝炎病毒核糖核酸（ＨＧＶ－ＲＮＡ），并用相同方法检测了ＨＣＶ－ＲＮＡ；ＨＢＶ－ＤＮＡ则采用单次ＰＣＲ检测，阴性者再用套式ＰＣＲ证实。结果提示：８５例肝癌患者中，１１例患者可检出ＨＧＶＲＮＡ，占和的１２．９％，而ＨＣＶ－ＲＮＡ，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者分别为１５例及６８例，占１７．６％和８０％。初步证明文本部分肝癌病人血清中存在ＧＶ感染，作者认为：Ｈ     

鸭乙型肝炎病毒感染与肝组织学病变关系的研究

双盲研究表明,江苏麻鸭的血清DHBV DNA与肝组织匀浆DHBV DNA检出率无明显差异;鸭乙型肝炎病毒感染与肝组织点灶状坏死有关,并可导致肝组织超微结构的异常。     

丙型肝炎病毒5''-非编码区RNA检测及酶切基因分型

我们应用逆转录套式聚合酶链反应 (ＲＴ -ｎｅｓｔｅｄ-ＰＣＲ)对河南地区 90例抗 -ＨＣＶ阳性献血员血清及北京地区 2 6 9例各型肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ检测 ,并对 5’ -非编码区 (5’ -ＮＣＲ)ＰＣＲ阳性扩增产物用酶切法进行ＨＣＶ基因分型 ,现将结果报告如下。1　材料和方法　 (1)材料 :ＨＣＶＲＮＡＰＣＲ试剂盒由北京大学人民医院肝病研究所提供 (批号 980 813) ;逆转录酶为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品 ;Ｔａｑ -Ｐ及限制性内切酶ＨａｅⅢ 16ＩＵ·μＬ- 均为ＳＡＢＣ产品 ;Ⅱ、Ⅲ型对照血清经日本自治医科大学检测确定。 90例抗 -…     

乙型肝炎病毒子宫内传播的研究

应用Southern blot杂交试验对39例流产的死胎,检测其肝细胞中HBV-DNA的存在状态。并用免疫组织化学酶标记ABC方法检测肝细胞中的HBcAg的存在状态。结果:23例HBeAg阳性孕妇胎儿中有3例,8例HBsAg单项阳性孕妇胎儿中有1例,在胎肝细胞基因组中检出整合型HBV-DNA顺序。经片断探针杂交:4例中有3例出现HBV-C基因及Pre-s基因整合型杂交带,其中2例胎肝细胞核内有HBcAg存在。证明HBV能在子宫中从HBsAg阳性携带者孕妇传给其胎儿。