中药博癌丸对人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及相关调控基因的影响

目的:研究中药博癌丸诱导人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及对相关调控基因表达的影响。方法:采用流式细胞术检测HepG-2凋亡细胞,采用免疫组织化学方法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、P53的表达。结果:(1)10%、15%的博癌丸药物血清作用48h后,HepG-2细胞凋亡率均显著高于空白对照组,P<0.05;15%博癌丸药物血清组与阳性药物对照组比较无显著性差异,P>0.05。(2)5%、10%、15%博癌丸药物血清均能上调HepG-2凋亡调控基因Bax、P53的表达,P<0.05~0.01,并与剂量有关;15%博癌丸药物血清组与阳性药物对照组比较无显著性差异,P>0.05。结论:博癌丸能诱导HepG-2细胞凋亡,上调促凋亡基因Bax和P53的表达。     

慢性乙型肝炎分子证候辨证的研究思路与方法简析

提高慢性乙型肝炎辨证论治的准确性和临床疗效 ,有必要对其病程进展和证候转换的分子网络调控机制进行研究 ,进而建立慢性乙型肝炎分子证候辨证体系。其研究的基本思路是 :以中医“正邪进退”说和现代分子生物学的理论为指导 ,将人体本身 (正气 )的基因背景与HBV(邪气 )的基因突变影响结合起来进行研究 ,全面反映慢性乙型肝炎随病程进展中正邪斗争的分子网络相互作用机制 ,建立基因表型多态性与证候易感性和转归性的联系 ,发现证候形成与转换的基因背景。创新性的研究方法为开展分子证候辨证研究提供了先进、科学和可行的技术路线。已有的工作为全面深入地研究奠定了坚实的实验基础。     

滋水涵木法治疗慢性乙型病毒性肝炎的临床研究

目的:观察滋水涵木法治疗慢性乙型病毒性肝炎(肝肾阴虚证)的临床疗效.方法:将84例慢性乙型病毒性肝炎患者随机分为两组,对照组34例采用一般护肝治疗,治疗组50例用滋水涵木法中药,治疗3个月后比较两组患者的治疗效果.结果:治疗组的临床症状改善较明显,肝功能改善明显优于对照组(P＜0.05),HBeAg阴转率、抗-HBe阳转率、HBV-DNA阴转率也优于对照组(P＜0.05).结论:滋水涵木法治疗慢性乙型病毒性肝炎肝肾阴虚证,可显著改善患者的临床症状,促进肝功能的恢复,抑制HBV复制.     

左归丸促进骨髓形成肝细胞的研究

目的:观察补肾(左归丸)对小鼠骨髓形成肝细胞的影响,揭示"肾生骨髓,髓生肝"的科学内涵.方法:采用交叉性别骨髓移植模型,雌性BALB/c小鼠随机分为补肾组(左归丸)、补气血组(八珍汤)和对照组(生理盐水),接受9.0Gy60Co源γ射线照射后,经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞,骨髓移植后分别给予7g/(kg?d)左归丸、八珍汤、生理盐水灌胃,给药2、4、6mo处死动物,取肝组织标本.通过荧光原位杂交检测肝组织切片雄性性别决定基因Sry与白蛋白mRNA双阳性细胞(雄性骨髓来源的肝细胞),计算各组骨髓转化为肝细胞的阳性细胞率(%).结果:补肾组、补气血组和对照组的阳性细胞率均随着骨髓移植时间的延长而增加,移植后6mo时间点骨髓转化为肝细胞的阳性细胞率(18.25±3.36)与2、4mo时间点(4.00±1.73,4.80±1.30)相比显著升高(P<0.01).同一时间点不同组小鼠骨髓转化为肝细胞的阳性细胞率有显著差异,骨髓移植后2mo时补肾组阳性细胞率(4.00±1.73)高于补气血组(1.20±0.45)和对照组(1.00±0.61)(P<0.01),移植后4mo时补肾组阳性细胞率(4.80±1.30)高于补气血组(1.40±0.55)(P<0.01),移植后6mo时补肾组阳性细胞率(18.25±3.36)高于补气血组(7.20±1.33)和对照组(9.25±1.31)(P<0.01).结论:补肾(左归丸)能够促进骨髓形成肝细胞.补肾促进骨髓形成肝细胞的作用机制可能在于调节全身机能和改善肝脏微环境,有利于骨髓细胞移行至肝脏并转化为肝细胞.     

中医药治疗高脂血症性脂肪肝的系统评价与Meta分析

目的:系统评价中医药治疗高脂血症性脂肪肝的临床疗效和安全性。方法:参考Cochrane协作网系统评价的方法,计算机检索11个数据库中有关中医药治疗高脂血症性脂肪肝的临床随机对照文献。根据纳入标准,经过两位评价员独立筛选、提取资料和交叉核对后,采用Jadad评分标准评价文献质量,Meta分析采用软件Rev Man 5.3进行,对发表偏倚情况进行漏斗图分析。并对入选的14个RCT方剂中中药出现频次进行统计。结果:最终纳入14篇文献,总计1351例患者。从临床总有效率、改善患者ALT、TC指标方面来看,中医组及中西医联合用药组疗效均优于西医治疗,但中医组治疗TC的敏感性分析发现中医组与西医组之间无差异。在不良反应分析方面,中医药治疗高脂血症性脂肪肝的安全性较高。从中药频次统计来看,山楂、泽泻两味药出现频次最高。结论:中医治疗较单纯西医疗效更显著安全,而中西联合用药可能较单纯中药疗效更好,且山楂、泽泻配伍运用更能增强降脂作用。但受纳入文献数量质量影响,尚需进行更为严格的RCT以提供充分证据支持临床应用。     

肝主疏泄与慢性肝病患者的心理调适

系统论述慢性肝病患者的心理调适对肝病康复的作用,探讨"肝主疏泄"通过调控情志变化、神经-内分泌-免疫功能和肝再生,促进肝病康复的作用机制,提倡"生而勿杀,予而勿夺,赏而勿罚"的健康心态和生活方式。     

甘草次酸修饰的姜黄素阳离子脂质体肝靶向性和抗肝癌作用研究

目的 研究甘草次酸修饰的姜黄素阳离子脂质体（GAMCLCL）肝靶向性以及抗肝癌作用。方法 制备甘草次酸（GA）配体——GA和十八胺盐（SGO）,用红外光谱和质谱检测;并进一步利用SGO制备GAMCLCL,透射电镜观察脂质体形态,Nano ZS90纳米粒度仪测定脂质体粒径与电位;采用活体成像系统观察GAMCLCL小鼠体内荧光分布。Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、阿霉素（阳性药,2 mg·kg^-1）组、姜黄素（20 mg·kg^-1）组和GAMCLCL低、高剂量（2、4 mg·kg^-1）组,除对照组外,采用Walker-256细胞种植法制备肝原位移植瘤模型,每天1次,尾iv给药,连续7 d ;另设GAMCLCL （4 mg·kg^-1）给药14 d组;称肿瘤质量,计算肝脏系数、脾脏系数;全自动生化分析仪测定血液红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血小板（PLT）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肌酐（CRE）水平,试剂盒法检测乳酸脱氢酶（LDH）水平; ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和白细胞介素-6 （IL-6）水平; Western blotting法检测肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）、cleaved Caspase-3、Bcl-2、p53、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平。结果 红外光谱和质谱的结果可以验证GA与十八胺的反应生成了SGO;GAMCLCL外观呈球形,其粒径为（194±0.25） nm,聚合物分散性指数（PDI）为0.21±0.02,电位为（31.9±0.31） mV;GAMCLCL在2个月内呈黄色透明溶液,无沉淀析出; GAMCLCL与血清混合未出现任何聚集和沉淀现象;活体成像实验显示,给药后各时间点荧光主要集中在肝脏,10、30、60 min时肝脏荧光较强,120 min时肝脏荧光明显减弱,240 min时肝脏荧光基本消失。与模型组比较,各给药组大鼠肿瘤质量均明显减轻（P＜0.05、0.01）;各给药组肝脏系数显著降低（P＜0.05、0.01）,游离姜黄素组、GAMCLCL 4 mg·kg^-1（7、14 d）组脾脏系数显著下降（P＜0.01）;阿霉素及GAMCLCL 4 mg·kg^-1（7、14 d）组的RBC和PLT计数均显著升高（P＜0.01）,WBC计数均显著降低（P＜0.05、0.01）;各给药组大鼠ALT、CRE均显著降低（P＜0.05、0.01）,除游离姜黄素组外,各给药组LDH显著降低（P＜0.05、0.01）;各给药组IL-6、TNF-α均显著降低（P＜0.01、0.05）;各给药组VEGF、Bcl-2、Akt、p-PI3K的蛋白表达均显著下调（P＜0.05、0.01）,cleaved Caspase-3和P53蛋白表达均显著上调（P＜0.05、0.01）; GAMCLCL （4 mg·kg^-1）给药7 d与14 d的抗肿瘤效果相似,明显强于游离姜黄素。结论 GAMCLCL能显著增强姜黄素的肝靶向性和抗肝癌作用,有利于提高荷瘤大鼠的无进展生存期。     

脂质体介导姜黄素抑制Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的:研究提高姜黄素治疗肝癌生物学效应的新技术和新方法.方法:对比观察脂质体-姜黄素水溶制剂对人肝癌细胞(Bel-7402)凋亡及凋亡相关调控基因Bax、Bcl-2的影响.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法观察脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制作用.原位末端标记法(TUNEL技术)观察脂质体-姜黄素诱导Bel-7402细胞凋亡的作用.免疫组织化学染色(SABC)法检测脂质体-姜黄素对Bax和Bcl-2基因表达的影响.结果:10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素对Bel-7402细胞增殖有显著抑制作用,P＜0.01,其抑制率分别为38.67%、26.67%和17.33%,与同浓度的姜黄素的抑制率(29.33%、20.00%、5.33%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05);增殖抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,3个有效浓度组间差异均有显著性意义(P＜0.05).10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml脂质体-姜黄素处理组Bel-7402细胞凋亡率分别为68.9%、43.4%、26.9%,与同浓度姜黄素组的Bel-7402细胞凋亡率(53.3%、30.2%、14.9%)比较,差异有显著性意义(P＜0.05).脂质体-姜黄素对细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响,与对照组比较差异无显著性意义.结论:脂质体能显著提高姜黄素对Bel-7402细胞增殖的抑制和诱导其凋亡的作用.脂质体-姜黄素对Bax、Bcl-2的表达无显著影响.     

PCR-SSCP银染技术筛检HBV基因突变实验方法的建立

为了对乙肝患者ＨＢＶ基因突变进行大样本大面积筛检,我们建立了良好简便快速的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染色筛检ＨＢＶ基因突变的实验方法,结果显示本法具有很高的特异性和较高的敏感性,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术筛检出的ＨＢＶ基因突变的阳性标本经直接测序证实全部存在ＨＢＶ基因突变,并证实该方法能特异性的检出１８９８位或１９０１位发生了Ｇ→Ａ出现了ＴＡＧ终止密码的突变,具有一定的推广应用价值。     

芍药甙对人肝癌细胞株Bel—7402增殖的影响

目的：研究芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖的影响。方法：采用人肝癌细胞株Bcl-7402和细胞药理学方法、对比观察3种措施（阴性无药对照、阳性阿霉素对照及芍药甙）对Bel-7402细胞增殖的影响。结果：芍药甙（2mgml,1mg/ml,0.5mg/ml)对Bel-7402细胞增殖均有显著性抑制作用（均P＜0．01）,其抑制率分别为33．78％、22．22％和11．56％;增殖抑制作用随药物浓度增高而加强,呈显著的量效关系。结论：芍药甙对人肝癌细胞株Bel-7402增殖有一定的抑制作用。