左归丸针对性调节MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达

目的:研究左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达谱的影响,探讨左归丸调节MSG-肝再生-大鼠再生肝的分子机制.方法:复制MSG-肝再生-大鼠模型,给予左归丸5g/kg灌胃治疗2周后,观察再生肝组织基因表达谱的变化规律.结果:左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达具有针对性调节作用的有12条.其中,模型组相对于对照组上调、治疗后下调的基因有5条.模型组相对于对照组下调、治疗后上调的基因有7条.结论:左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织的部分基因表达具有针对性调节作用,这可能是左归丸滋养肝肾调节肝再生的重要分子机制之一.     

左归丸药物血清对骨髓间质细胞转化为肝细胞的作用

目的:一些实验已证实骨髓干细胞可以向肝细胞横向分化,观察补肾中药左归丸含药血清对骨髓间质细胞分化为肝细胞的影响。方法:实验于2002-01/2004-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成。①实验动物:选取SPF级纯系Wistar大鼠46只,1只用于骨髓间质细胞的分离及培养,剩余45只用于含药血清的制备。另取2d龄Wistar乳鼠20只,用于肝脏细胞的培养。②实验方法:以体外肝细胞培养上清为诱导条件培养液,采用贴壁分离法纯化大鼠骨髓间质细胞。45只Wistar大鼠依次取15只用生理盐水、中药左归丸(由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、川牛膝、鹿角胶、龟版胶组成)浓缩煎剂、中药八珍汤(由人参10g,白术10g,茯苓10g,甘草6g,当归15g,川芎10g,白芍15g,熟地15g组成)浓缩煎剂按10mL/kg灌胃,灌胃量以生药10g/kg计算,1次/d。第15天灌胃后2h,腹腔麻醉颈动脉插管取血,分管盛装含药血清,放置备用。大鼠骨髓间质细胞传至6代,分6组诱导培养:常规培养组使用常规培养液(DMEM培养液 体积分数为0.2的胎牛血清 2mmol/L谷氨酸胺)进行培养;肝细胞生长因子诱导组以常规培养液 25μg/L肝细胞生长因子 10-7mol/L地塞米松进行培养;肝细胞生长因子加左归丸组以常规培养液 25μg/L肝细胞生长因子 10-7mol/L地塞米松 10%左归丸含药血清进行培养;条件培养液加对照血清组以常规培养液 50%条件培养液 10%正常大鼠血清进行培养;条件培养液加八珍汤组以常规培养液 50%条件培养液 10%八珍汤含药血清进行培养;条件培养液加左归丸组以常规培养液 50%条件培养液 10%左归丸含药血清进行培养。③实验评估:诱导28d,每组10个复孔,分别于诱导第0,7,14,21,28天免疫细胞化学法检测肝细胞标志物甲胎蛋白、细胞角蛋白18及白蛋白阳性细胞率,PAS染色检测糖原阳性细胞率。结果:①诱导第0天,各组甲胎蛋白、白蛋白阳性细胞呈极少数表达(t=0.44～1.90,P>0.05),细胞角蛋白18及糖原均未见阳性细胞表达。②肝细胞生长因子加左归丸组、条件培养液加左归丸组在诱导第7,14,21,28天白蛋白、细胞角蛋白18、糖原的阳性细胞率均显著高于其他4组(t=5.42～55.00,P<0.05);甲胎蛋白阳性细胞率于诱导第7天时增高显著(t=55.00,P<0.05),此外各时间点又明显降低。③与肝细胞生长因子加左归丸组比较,条件培养液加左归丸组白蛋白阳性细胞率在诱导第14,21,28天时显著升高(t=4.06～7.49,P<0.05);甲胎蛋白阳性细胞率在诱导第7天时显著升高(t=83.69,P<0.05),至诱导第14,21,28天则明显下降(t=55.53～83.00,P<0.05)。结论:左归丸含药血清能够影响骨髓间质细胞向肝系细胞转化过程中的肝细胞标志物,从而提高骨髓间质细胞向肝细胞的转化率。     

左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝组织Wnt信号通路的影响

目的：探讨左归丸对同种异性骨髓移植小鼠肝组织wnt信号通路的影响。方法：建立同种异性骨髓移植小鼠模型,随机分为补肾组和对照组,每组40只,分别给予左归丸汤剂和生理盐水灌胃,给药6个月后处死小鼠,取小鼠肝组织,采用基因芯片技术检测同种异性骨髓移植小鼠肝组织基因表达谱,采用WesternBlot检测β-catenin蛋白表达。结果：补肾组相对于对照组小鼠肝组织Wnt信号通路中上调表达的基因有Wntl、分泌型Frz相关蛋白（secreted frizzled—related sequence protein,sfrp）1、sfrp5,下调表达的基因有Gsk3b、Wnt10a、Rac1、Mapk9、Prkcc、Frat1、Nfatc4、Csnk2b、Ppard等。补肾组比对照组小鼠肝组织中β—catenin蛋白表达明显增强。结论：左归丸可通过激活Wnt信号通路经典途径,游离β-catenin蛋白积累并进入细胞核激活下游靶基因,这可能是“补肾生髓成肝”调控肝再生的重要分子机制之一。     

中药复方搏癌丸对人肝癌细胞周期及bax、bcl-2、p53基因表达调控的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌细胞HepG2周期及相关调控基因表达的影响.方法:采用药物血清和细胞药理学方法:①用流式细胞仪观察搏癌丸对人肝癌HepG2细胞凋亡及周期的影响.②用免疫组织化学染色(SABC)法检测搏癌丸3个有效药物血清浓度对bax、bcl-2、p53基因表达的调控.结果:①10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,FCA检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%,P＜0.05.②能上调HeG2细胞凋亡调控基因bax、p53的表达,与无药血清对照组比较,差异有显著性意义,P＜0.05,且呈剂量依赖关系.结论:搏癌丸诱导HepG2细胞凋亡的作用机制之一可能是上调促凋亡基因bax和p53的表达.     

“肝肾同源于脑”与肝肾本质研究

在《内经》“肾生骨髓,髓生肝”的理论基础上,历代医家继有“肝肾与脑相关”的认识。现代国内学者对肝肾本质研究的主要一致性结论是将肾虚定位于下丘脑,和肝病证候的出现与大脑皮层功能紊乱密切相关。我们首次建立了“左旋谷氨酸单钠—肝再生—大鼠模型”,观察了左归丸对该动物模型的影响及机理。结果表明,该动物模型的肝再生受到显著抑制,左归丸能显著促进该动物模型的肝再生;该动物模型的“神经—内分泌—免疫网络”功能紊乱,左归丸治疗后得到一定程度的纠正;从而将“肝肾同源于精血”的认识推进到“肝肾同源于脑”,“肝肾同源于下丘脑—垂体—肝轴”,“肝肾同源于神经—内分泌—免疫网络”。     

"肾生骨髓,髓生肝"的科学内涵

“肾生骨髓,髓生肝”的精辟论断见于《素问·阴阳应象大论》,是“肝肾同源”的理论基础和核心内容,一直科学地指导着中医药临床实践。近现代国内外学者采用先进的现代科学技术,对“肾生骨髓”的科学内涵进行了比较系统而深入地研究,但对于“髓生肝”的理论精髓鲜有学者深入挖掘其科学内涵。主要原因是经典胚胎发育学认为,在发育过程中一种胚层的细胞不能转化为另一种胚层的细胞,源于中胚层的骨髓不会产生源于内胚层的肝脏。受此观点限制,长久以来缺乏对于“肾藏精、精生髓成肝”的研究,“髓生肝”只能是尚无现代科学依据的科学假说。近些年…     

海珠益肝胶囊对2215细胞乙肝病毒标志物的影响

目的 :应用 2 2 15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型 ,研究益肝胶囊对乙肝病毒抗原(HBeAg)、表面抗原 (HBsAg)的抑制作用。方法 :通过细胞毒性实验以确定对细胞无毒性作用的最高药物浓度 ,直接加药物到细胞培养液中 ,分别采取第 4天、第 8天的细胞培养上清 ,用固相放射免疫方法测定其HB sAg、HBeAg含量。结果 :海珠益肝胶囊最大无毒浓度TCD <1.2 5mg/ml,海珠益肝胶囊有明显抑制HBsAg、HBeAg的作用 ,各浓度间存在量效关系 ,其中对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用。结论 :海珠乙肝胶囊对 2 2 15细胞HBV标志物有显著的抑制作用。     

左归丸促进骨髓形成肝细胞的分子机制研究

目的：探讨左归丸促进骨髓形成肝细胞的分子机制。方法：采用交叉性别骨髓移植模型，雌性BALB／c小鼠接受9．0Gys ^60Co源γ射线照射后，经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞，分左归丸组和模型组，6个月后处死实验动物，取肝组织标本。选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片，观察实验小鼠肝组织基因表达谱的变化。结果：左归丸组小鼠在骨髓移植6个月后肝组织的基因表达谱与模型组比较有显著不同，差异表达基因有1147条，已知功能基因有533条，其中上调基因264条，下调基因269条。结论：左归丸可能是通过影响肝组织基因表达谱的变化促进骨髓形成肝细胞。     

论藏象概念的三种演变形式

藏象概念的演变 ,虽划分不出明确的时间界限 ,却能清楚地看到三种演变形式 :第一 ,实体赋予功能实体功能统一 ;第二 ,功能脱离实体实体功能分离 ;第三 ,功能涵盖实体实体功能重组。早期的藏象概念以第一种形式为主 ,而中医学术发展到近代和现代 ,藏象概念却出现了第二和第三种演变形式。1　实体赋予功能实体功能统一早期的藏象概念以解剖的五脏为基础 ,然后以五脏为中心 ,内系五腑、五体、五官、五华形成五个功能活动的系统 ,分别主司人体生命过程中的物质代谢等功能活动 ,通过五脏系统之间的协调和控制 ,来适应自然变化[1]。藏象学说认为 :…     

发挥中医特色和优势 促进肝病专科建设和发展

湖北中医药大学附属医院肝病中心现为国家中医临床研究基地(肝病为优势病种)、国家中医药管理局重点专科(中医肝病)、重点学科(中医肝胆病)、国家中医药管理局中西医结合传染病基地、重点临床(肝病)研究室和国家中医药管理局三级实验室等六位一体的建设单位。2011年又被批准为国家第一批中医药标准研究推广基地(试点)建设单位。多年来,肝病中心依据《国家中医药管理局十一五重点专科(专病)项目建设目标与要求》,积极发挥中医特色和优势,专科建设取得丰硕成果,现总结如下。