脾虚小鼠免疫功能的探讨

用大黄水煎剂灌胃制成灌模型小鼠，然后检测脾虚小型和正常小鼠的免疫功能。结果表明，脾虚小鼠的脾脏重量、脾重指数、巨噬细胞吞噬功能，抗体ＩＬ－１及ＩＬ－２的产生能力，与正常组相比均显著降低，说明脾虚小鼠的免疫功能低下。     

信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

目的 研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法 以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果 成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论 载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。     

IFN、IL-6与妇科肿瘤相关性研究

本研究采用双抗体夹心法ELISA检测58例妇科肿瘤患者血清中干扰素(IFN)及白细胞介素_6(IL—_6)的含量,并与30例正常人进行比较。结果表明卵巢癌、子宫颈癌患者血清中IFN及IL-_6含量明显增高,与正常对照组相比差异有非常显著性(P<0.01),但妇科良性肿瘤如子宫肌瘤及恶性肿瘤手术后患者IFN及IL-_6的含量基本正常。由此表明IFN、IL—_6的变化与妇科恶性肿瘤发生、发展及转归密切相关。     

黄芪对小鼠免疫功能的影响

目的：从免疫功能方面探讨中药黄芪的强身健体作用。方法：用１００％黄芪水浸出液定期给小鼠灌胃,然后其外周白细胞（ＷＢＣ）,脾脏及胸腺,抗体产生能力,淋巴细胞转化率,巨噬细胞吞噬率。结果 ：用药组小鼠除胸腺和ＷＢＣ外,其他免疫学指标均有明显改变,与对照组相比差异有非常显著性（Ｐ〈０．０１）,未见有副作用。结论：口服黄芪可明显增强机体的免疫功能。     

黄芪对小鼠免疫功能影响的研究

目的：探讨中药黄芪增强机体免疫功能。方法：用１００％黄芪水浸出液定期给小鼠灌胃,然后测定对小鼠淋巴细胞增殖和ＩＬ－２产生。结果：用药组小鼠的以上两项免疫学指标均有明显改变,与对照组相比差异有非常显著性（Ｐ〈０．００１）,未见有副作用,结论：口服黄芪可明显增强机体的免疫功能。     

鼠抗粒细胞集落刺激因子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

建立鼠粒细胞集落刺激因子单克隆抗体的杂交瘤细胞系。方法将ＳＰ２／０小鼠骨央瘤细胞和用Ｇ－ＣＳＦ免疫的Ｂａｌｂ／ｃＩＨ ＶＮＵＮＥＲＴＦＸＬＥＱＤ 宜５００ＷＴ 进行融合，用ＥＬＩＳＡ进行克隆化筛选并对杂交瘤细胞分泌的单抗滴度进行检测。     

幽门螺杆菌中基因过表达体系的构建及应用北大核心CSCD

目的 在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)体内构建外源基因以及自身基因的过表达系统。方法 以绿色荧光蛋白基因gfp为报告基因,通过同源重组基因敲入和穿梭质粒两种方法构建Hp中基因过表达体系。同源重组法:以预先构建的基因敲除载体pSJHK的衍生质粒pSJHK4为载体,构建gfp基因敲入质粒pSJHK4-gfp,使用Hp鞭毛高表达基因flaA的启动子调控gfp的表达;以hp0547基因区域为插入位点,通过自然转化的方式将质粒转入细菌,胞内通过同源重组将gfp插入到Hp基因组中,荧光显微镜观察gfp表达的荧光情况。穿梭质粒法:将含有鞭毛基因flaA启动子和gfp基因的表达盒连入H.pylori-E.coli穿梭质粒pCHFHP中,构建表达质粒pCHFHP-gfp,自然转化到Hp中,荧光显微镜观察gfp表达的荧光情况。用同样方法构建Hp CagA蛋白(融合有His-tag)的表达质粒pCHFHP-CagA,转入预先构建的Hp CagA敲除株,通过亲和层析纯化重组蛋白,Western blot检测CagA的表达情况。结果 构建了gfp基因敲入质粒pSJHK4-gfp,转入Hp后细菌发出绿色荧光;基于穿梭质粒构建了gfp基因表达质粒pCHFHP-gfp,转入Hp中细菌同样发出荧光;进一步构建了CagA的表达质粒并转入Hp CagA敲除株中,Western blot检测到CagA蛋白,并体外纯化获得一定量蛋白。结论 基于同源重组基因敲入和穿梭质粒的方法可在Hp中构建外源基因及Hp自体基因的过表达体系,该方法能够为Hp的基因功能研究和致病因子的发掘提供基因操作工具。     

尿道致病性大肠埃希菌P菌毛基因分型

目的 明确国内分离的45株尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛的papG和papA的基因型分布状况及两者可能的组合形式,为国内UPEC菌株的致病机制、遗传变异、流行病学分析和免疫防治等研究提供基础依据.方法 应用papG和papA多重PCR基因分型方法对45株UPEC菌株进行papG和papA基因分型,并分析基因型分布与组合形式.结果 45株UPEC P菌毛的papG均为Ⅱ型,与国外报道显著不同.其中44株(97.8%)papa基因可成功分型,1株(UPECA030,2.2%)不能分型,提示为未知基因型.44株papA基因分型结果阳性菌株中,11个基因型分布如下:24株(54.55%)具有单一型;13株(29.55%)具有2个基因型;4株(9.09%)和3株(6.82%)分别具有3个和4个基因型.单一基因型较为常见的为F7-2(25.00%)、F11(6.82%)和F16(9.09%).受试菌株各种基因型出现的频次,优势基因型依次为F10和F13各12株(27.27%)、F7-2和F11各11株(25.00%)、F14为10株(22.27%)、F16为9株(20.45%).具有2个以上基因型的组合形式与国外不同,并首次发现了4个基因型(F8+F9+F13+F14)组合的UPEC菌株.结论 国内分离的45株UPEC菌株papG高度保守,而papA呈现高度多态性,并出现与国外不同的基因型.     

幽门螺杆菌定植因子HpPrtC胶原蛋白酶的异源表达及其功能活性研究

目的异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性。方法根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeI和XhoI酶切后构建原核表达载体pET-22b(+)-HpPrtC,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和层析法纯化重组蛋白,通过检测重组酶处理胶原蛋白后L-亮氨酸的产生量表征其胶原蛋白降解活性。结果 HpPrtC基因编码422个氨基酸,与已知PrtC家族蛋白酶氨基酸序列比对最高相似性40%。克隆HpPrtC基因连接入表达质粒pET-22b(+),将测序正确的表达质粒pET-22b(+)-HpPrtC转化至感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达相对分子质量约为47×103的可溶性蛋白,与预期相符。经亲和层析纯化后的重组蛋白酶降解热变性I型胶原蛋白(可溶、不可溶)和天然I型胶原蛋白的活性分别为922.2±36.2、1168.8±65.6和674.0±13.4,与幽门螺杆菌培养液中胶原蛋白酶对可溶热变性I型胶原蛋白、不可溶热变性I型胶原蛋白和天然I型胶原蛋白活性分别为205.6±21.5、228.4±19.3和123.2±14.5一致。结论幽门螺杆菌定植因子HpPrtC为胶原蛋白酶。通过大肠埃希菌异源表达的重组HpPrtC蛋白具有胶原蛋白酶解活性,为探索该酶在幽门螺杆菌感染定植中的作用机制奠定了基础。