海绵中抗肿瘤抗病毒生物活性的生物碱研究进展

海绵中含有很多结构新颖且具有显著生物活性的生物碱。对近5年来具有抗肿瘤、抗病毒生物活性的生物碱加以概括。     

抗前列腺特异抗原单链抗体/人羧肽酶A融合基因的构建及表达

目的 构建抗前列腺特异抗原（PSA）单链抗体（scFv)/人羧肽酶A(hCPA)融合基因,为前列腺癌的抗全导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法 在已克隆抗PSAscFv和hCPA基因的基础上,用加端PCR分别在scFv基因的3′端和hCPA基因的5′端加上部分连接肽（linker)基因序列,回收后混合。应用重叠延伸拼接法,将抗PASscFv基因和hCPA基因通过linker序列串联为scFv/hCPA融合基因;并将构建的融合基因克隆到融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。结果 序列测定结果表明,构建的抗PSAscFv/hCPA融合基因中scFv和hCPA序列均正确,scFv和hCPA间有18bp的linker序列,推导的氨基酸序列为GSGGSG,与设计的序列相符,融合基因经IPTG诱导表达重组蛋白并以SDS-PAGE分析,在Mr为94000左右出现一条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的34%。结论 成功构建并原核表达了抗PSAscFv/hCPA融合基因。     

铸造工人肺癌死亡队列研究

以三个工厂３ ２７９名铸钢、铸铁工为暴露组, 以同厂１ １７６ 名机加、修机工为非暴露组, 对１９７２ 年１ 月１ 日在册的队列成员进行了回顾性队列研究。观察期自１９７２ 年１ 月１ 日至１９９２ 年１２ 月３１ 日。结果表明, 铸造工肺癌粗死亡率４６－４４／１０ 万, 占恶性肿瘤死亡的３０－１０ ％ , 在恶性肿瘤死亡中居首位。以一般人群作参比标准时, 铸工标化死亡比（Ｓｔａｎｄａｒｒｉｚｅｄ Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ Ｒａｔｉｏ, ＳＭＲ） 为１－５６ , １－８３ （ Ｐ＜ ０－０５）。男性尘肺患者肺癌死亡率高于男性非尘肺患者, ＳＭＲ 为２－１５ （χ２ ＝ ６－９２） , 相对危险度（ＲＲ） 为３－４０ （χ２ ＝ ６－９６） , 年龄分层处理后总的相对危险度（Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｒｉｓｋ Ｔｏｔａｌ ＲＲＴ） 为１－６９ （χ２ＭＨ＝ １－１９）。结果表明,该队列铸造工肺癌死亡超量, 尘肺患者尤为明显。     

水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究

目的：研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用，并进一步探讨其作用机制。方法：MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系MCF－7和SK－BR－3的半数抑制浓度（IC50）；软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。在此基础上，用Her-2抑制剂AG825进行干预，对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨。结果：水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用，其中对MCF－7细胞的作用较强，IC50≤0．02％，而对SK－BR－3的作用较弱。Her-2抑制剂AG825可增加SK－BR－3细胞对药物的敏感性，抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成。结论：水飞蓟素在体外对MCF－7细胞具有明显的抑制作用，而AG825可增强SK－BR－3细胞对药物的敏感性。因此，SK－BR－3细胞中Her-2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因，而水飞蓟素也可能通过Her-2调节某个或某几个下游分子起作用。     

重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞抑制作用研究

目的:考察原核表达的重组人NDRG2蛋白对肿瘤细胞的作用.方法:通过设置不同浓度的蛋白剂量并设置对照组,采用细胞MTT比色法和细胞计数检测NDRG2蛋白对7901、HHCC细胞的抑制效果,流式细胞仪检测细胞周期的变化,体内实验采用裸鼠抑瘤试验.结果:重组人NDRG2对肿瘤细胞生长有较强的抑制作用,约50μg/ml浓度时对肿瘤细胞生长的抑制作用明显,流式细胞术结果显示肿瘤细胞G1期变化,体外能抑制裸鼠肿瘤的生成.结论:重组人NDRG2蛋白在体内体外具有一定的抑制肿瘤细胞生长作用,在肿瘤治疗方面将具有一定的意义.     

全人源肝癌噬菌体单链抗体的筛选及特异性鉴定

目的对全人源肝癌噬菌体单链抗体库进行鉴定,筛选肝癌抗体,同时对抗体的活性及特异性进行鉴定。方法PCR鉴定阳性重组菌TG1中人肝癌ScFv的插入率。先以人成纤维细胞吸附后再以体外培养的肝癌细胞SMMC7721为抗原对所建抗体库进行3轮“吸附洗脱扩增”的亲和筛选。将筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定;通过ELISA法及FCM鉴定其与人肝癌细胞及正常细胞的结合活性。结果ScFv基因插入率为70%。在亲和筛选过程中,肝癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第3轮为第1轮的214倍。筛选后的ScFv进行PCR鉴定及双酶切鉴定,均可检测到目的基因。ELISA分析结果显示18个克隆与SMMC7721呈阳性反应,阳性率为90%,15个克隆与成纤维细胞有交叉反应。得到3株肝癌单链抗体。ScFv的FCM鉴定表明,以正常胎肝细胞L02为对照,ScFv与肝癌结合比率为41.3%。特异性鉴定表明,其与肝癌细胞结合活性明显高于正常细胞。结论利用噬菌体抗体库技术结合减数筛选得到了肝癌噬菌体单链抗体及其基因,且筛选后的抗体片段与人肝癌细胞有特异性的结合活性。     

针罐加中频治疗颈性眩晕200例

近年来，本科采用针刺拔罐加中频电治疗颈性眩晕，收效颇好，现介绍如下。     

针罐加中频治疗颈性眩晕200例疗效观察

近年来，我科采用针刺拔罐加中频电治疗颈性眩晕，收效颇好，现介绍如下。