HIV表型耐药及检测方法的研究进展

高效抗逆转录病毒治疗（HAART）的应用有效地控制了艾滋病患的病情，延长了患的生命，大大地降低了HIV／AIDS相关的发病率和死亡率。但是耐药性的出现却极大地限制了HIV抗病毒治疗效果。选择一个能最大抑制HIV-1复制的方案成为一个极具挑战性的任务。对于接受过抗病毒治疗的病人，不但可能对使用的药物产生耐药，对其它药物亦会产生潜在的交叉耐药，因此耐药性的产生对救援治疗方案的效力亦具有很大的影响。即使未经抗病毒治疗的患，耐药病毒的感染也会限制初期联合抗病毒方案的病毒学和免疫学效力。研究证明根据耐药检测结果选择抗病毒治疗方案可有效地降低病毒载量，升高CD4细胞，从而极大地改善HIV一1感染抗病毒治疗的效果，因此许多专家组织，如IAS—USA、DHHS及EuroGroup已提供耐药检测的推荐和指南。目前HIV耐药性检测方法主要有3种：基因型耐药检测、表型耐药检测和虚拟表型耐药检测。[第一段]     

郑州市男男性行为人群HIV-1毒株变异特征及其与既往有偿供血感染者的关系

目的 分析郑州市男男性行为者(MSM)中HIV感染者的毒株变异特点及其与当地有偿供血者中流行毒株的关系.方法 以郑州市2010年确证的31例MSM的HIV感染者和41例既往有偿供血HIV感染者为研究对象,采集血标本并收集流行病学信息.RT-PCR法扩增全部研究对象的HIV-1 gag、pol全长基因(分别为1584 bp和3147 bp)及env基因的C2V3片段(558 bp)并测序,使用LosAlamosHIV Database在线工具确定病毒基因亚型、绘制系统进化树并分析可能的传播关系.结果 在72例研究对象中,获得全长gag序列53条、pol序列38条、env(C2V3)序列48条;31例MSM的HIV感染者中,CRF01 AE亚型14例、CRF07_BC亚型5例、B亚型12例(B'亚型11例、B亚型1例),41例既往有偿供血的HIV感染者均为B'亚型.MSM人群的CRF01 AE亚型毒株与河北、辽宁省的毒株关系密切、CRF07 BC毒株与河北省石家庄和北京市的毒株关系密切.在MSM人群中的12条HIV-1 B亚型中,有8条聚集成簇并与1例有偿供血感染者的序列距离最近、2条形成可靠的进化簇且与02HNseq4的序列距离最近,提示MSM人群中的B'毒株可能来自有偿供血员,且在MSM人群中存在传播关系.结论 郑州市MSM人群中流行的HIV-1毒株遗传背景复杂、有多个来源.首次发现目前MSM人群中流行的HIV-1 B亚型毒株主要是B'亚型,可能来自当地的有偿供血人群.     

HIV感染者CD4/CD8细胞与病毒载量的关系

目的　探讨HIV感染者体内CD4细胞数与病毒载量的关系。方法　对 84人的 2 0 7次血样进行病毒载量的测定 ,对 194人的 491次血样进行CD4/CD8细胞数的检测。CD4/CD8细胞计数采用流式细胞仪的绝对计数法进行检测 ,使用核酸序列测试 (NASBA)方法检测病毒载量。对其中一部分人进行随访 ,采集血样并检测相应指标。结果　HIV感染者体内的CD4细胞数与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 576,P <0 0 1) ,CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈负相关 (r =-0 544,P <0 0 1)。CD4细胞数较低的感染者 ,CD8细胞数也较低。在HIV感染者体内 ,随着病毒载量的升高 ,CD4细胞数呈下降趋势。结论　病毒载量与CD4有明显的相关关系 ,当病毒载量较低时 ,使用CD4细胞数可以粗略估计血浆中病毒载量的高低。CD4/CD8比值与病毒载量的Log值呈现负相关。当病毒载量较高时 ,HIV感染者体内病毒载量与CD4细胞数的变化趋势相反 ,但不完全同步     

自然环境中人类免疫缺陷病毒感染活力的探索

目的 明确自然环境下人类免疫缺陷病毒（HIV）的灭活规律，防止日常生活和医疗卫生工作中接触HIV阳性体液引起的HIV感染。方法通过测TCID50，检测了HIV在水和含10％血清RPM11640培养液稀释后，持续存在于4℃、室温（20℃～26℃）、37℃不同时间的感染活力，并对不病变样品盲目传三代以明确其感染性。结果〈4℃无论在水或细胞培养液中，HIV感染活力〉35d；室温及37℃下，水中HIV感染活力可维持7～14d，培养液中可维持14-21d。结论HIV在自然环境中抵抗力较强，对HIV阳性体液及其污染物应谨慎处理，防止HIV意外传播。     

广西壮族自治区133例艾滋病患者抗病毒治疗效果评价

目的了解广西壮族自治区部分艾滋病感染者抗病毒治疗后免疫功能恢复与病毒抑制效果。方法2004年7月至2005年10月在广西南宁与柳州地区招募接受抗病毒治疗时间＞3个月的艾滋病患者133例,并在同一地区选择感染时间接近、尚未接受抗病毒治疗感染者58例作为对照。通过专业问卷,了解抗病毒治疗患者服药依从性;采集患者的EDTA抗凝静脉血,通过CD4~+ T淋巴细胞计数与病毒载量测定,了解免疫重建与病毒抑制情况;通过基因型耐药性检测分析抗病毒治疗人群与未治疗人群中HIV-1耐药性毒株的发生情况。结果在接受抗病毒治疗人群中,约有70．69%患者的CD4~+ T淋巴细胞明显回升,23．28%患者CD4~+ T细胞未有明显变化,6．03%的患者CD4 T细胞计数明显下降;比较治疗与未治疗人群病毒载量水平,接受治疗人群载量对数均值(1．834±0．853)显著低于未治疗人群(3．621±1．121)(P＜0．05),治疗人群中67．91%的患者病毒载量水平低于检测限;治疗人群中耐药性发生率(11．90%)与未治疗组(11．63%)无明显差异。结论广西地区实施的抗病毒治疗对免疫系统重建、体内病毒的抑制具有明显作用;耐药性流行情况在治疗与未治疗人群中无明显差异。     

抗HIV药物的筛选评价方法

随着对艾滋病致病机制的深入研究,越来越多新的抗艾滋病病毒（HIV）药物进入临床试验,但大量抗HIV药物的应用也导致了耐药性问题的出现。因此,建立高通量快速的抗HIV药物筛选平台对研究新的抗HIV药物非常重要。本文综述了目前抗HIV药物研究中常用的体外和体内筛选模型,重点阐述了体外以病毒复制特异性功能活动或特定结构作为靶点的筛选系统及其评价方法。     

GENSCREEN~ULTRA HIV抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒的敏感性评价

目的评价BIO-RAD公司开发研制的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗原抗体酶联免疫诊断试剂盒(GENSCREEN~ ULTRA HIVAg-Ab),对不同来源样本检测的敏感性。方法以法国生物梅里埃公司生产的HIV1+2抗原/抗体ELISA检测试剂为参比试剂,分别使用评价试剂和参比试剂检测621例样本,分析两种试剂检测HIV抗原/抗体的敏感性。结果评价试剂和参比试剂检测502份HIV感染者/AIDS患者临床血浆标本均为阳性,符合率为100%,敏感性为100%。评价试剂和参比试剂检测92份HIV分离培养上清液,评价试剂检出89份阳性、参比试剂检出31份阳性,表明评价试剂检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。另外,又检测了27份HIV抗原系列稀释样本,计算出评价试剂检测HIV抗原的敏感性是参比试剂的4～8倍。结论评价试剂检测HIV抗体的效果与参比试剂相同,检测HIV-1p24抗原的敏感性高于参比试剂。     

5株不同亚型HIV-1毒株gp120序列特征分析及其蛋白的表达

目的 分析我国HIV-1主要亚型毒株的gp120区域的序列特征,并表达出gp120糖基化蛋白,为研究gp120的致病机制和设计疫苗奠定基础.方法 利用巢式PCR从来自于不同省份的5名HIV-1感染者外周血单个核细胞DNA中扩增全长gp120基因并测序,对序列特征进行分析,并将获得的gp120基因克隆入真核表达载体,体外表达获得gp120糖基化蛋白.结果 序列分析显示,此5条gp120序列分属HIV-1 Thai-B、BC重组和AE重组哑型,虽然亚型不同,但这些gp120序列在相同的位置都存在着一些保守的糖基化位点,且都具备相同的Furin蛋白酶第一切割位点,与参考序列比较发现,不同的HIV亚型序列中,除V3序列长度较为保守外,V1、V2、V4、V5各区域都有不同程度的缺失现象,与BC重组和AE重组亚型相比,Thai-B亚型V3的顶端环呈现出多种组合.最终将这5条gpl20序列都克隆人真核表达载体并表达出糖基化的gp120蛋白.结论 在设计疫苗和检测试剂时应考虑到膜区的高变性,gp120糖蛋白的体外表达有利于进一步开展针对我国主要HIV流行毒株膜蛋白致病机制和疫苗学的研究.     

我国部分地区HIV-1流行毒株亚型分布及gag基因变异特征研究

目的：分析我国4个地区的人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）主要流行毒株的亚型分布,以及在宿主免疫压力下的基因变异和抗原表位的变化情况,初步探讨这些地区HIV-1gag基因的分子进化特征。方法：从来自河南、广东、四川、北京的HIV-1感染者血浆样本中提取基因组RNA,经逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增部分gag基因,用扩增产物直接进行测序;使用Genotyping Tool软件进行亚型分析,使用MEGA4.1软件绘制系统进化树;用Distance工具计算各个亚型序列的基因离散率;用SNAP程序分析同义替换率与非同义替换率的比值（Ks/Ka）,并对各亚型中我国人群中较常见的HLA-Ⅰ型限制的CTL抗原表位的突变情况进行分析。结果：这些地区HIV-1主要流行毒株gag基因亚型主要是B′、CRF07_BC、CRF01_AE、B、CRF08_BC和CRF02_AG。各亚型内的基因离散率不同,由大到小排列为CRF01_AE〉B〉CRF08_BC〉CRF07_BC〉B′,Ks/Ka为CRF01_AE〉B〉CRF08_BC〉B′〉CRF07_BC。p17区段的CTL抗原表位变异远大于p24区段。各个亚型共享序列中存在的突变位点由多到少排列为CRFOI_AE〉B〉B＇〉CRF07-BC。结论：我国HIV-1流行毒株的gag基因序列中，CRF01-AE亚型受到的选择压力最大，基因离散率也最大，且CTL抗原表位的变异亦最大，其次是B和B’亚型，CRF07-BC亚型变异最小。各亚型间CTL抗原表位变异的差异明显。     

人免疫缺陷病毒的职业感染与预防

随着我国艾滋病疫情发展,医务人员越来越多地遇到人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染者诊治问题,预防医务人员职业性ＨＩＶ感染已成为当务之急。因此,概述了职业性ＨＩＶ感染的发生特点、影响传播的因素、预防措施及意外事故处理措施。适用于和实验室工作人员及医疗管理人员艾滋病知识的宣传教育。